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La detección de ISAV-HPRO en Salmón del Atlántico (Salmo salar) cultivado en las Islas Faroes es asociada a una infección subclínica, transitoria y altamente prevalente (Christiansen et al., 2011). I.- Introducción A. Hemaglutinina (HE) El Virus de la Anemia Infecciosa del salmón (ISAV) ha sido clasificado en la familia de los Orthomyxovirus (Krossoy et al., 1999), género Isavirus. En la envoltura lipídica se insertan las dos glicoproteínas características que son la hemaglutinina (HE) y proteína de fusión (F), las cuales se proyectas como espigas sobre la superficie viral. La vacunación contra ISAV en Islas Faroes se inicio en abril del año 2005. Para monitorear la reemergencia del ISAV se estableció un programa de vigilancia, en 4 a 6 jaulas en todos los centros de cultivo con Salmón del Atlántico (Salmo salar). Este estudio resume los resultados obtenidos en muestreos realizados entre agosto del 2005 y diciembre de 2009 (Christiansen et al., 2011). Figura 1: a) Estructura del Virus de la Anemia Infecciosa del Salmón. b) Gen de la Hemaglutinina del Virus de la Anemia Infecciosa del Salmón. Se destaca la región altamente polimórfica (HPR). c) Características principales delos grupos HRP0 y HPR vilulentos. www.marcosgo do y. c o m B. Hemaglutinina - Esterasa (HE) Cola Citoplasmatica NH2 - - COOH { La hemaglutinina posee una región altamente polimórfica (HPR), limitada a 35 aminoácidos, pudiendo de esta forma clasificar a los ISAV en dos grupos ISAV-HPR0 y ISAVHPR virulentos. Los primeros no se asocian enfermedad clínica, mortalidad y hasta ahora no ha sido posible su aislamiento en cultivo celular. Por otro lado, el grupo ISAV-HPR virulento presenta todas las características mencionadas de forma opuesta. Proteina de Fusión (F) HPR (Highty Polymorphic Region) Región N-terminal C. Dominio Transmembrana Grupos HPR HPR Virulento HPR0 Mortalidad Sin Mortalidad Signos Clínicos No presentes Signos Clínicos Crece en Cultivo celular No Crece en Cultivo celular Año 01/ Abr. de 2011 - Nº 01 Situación de ISAVHPR0 en Islas Faroe Situación de ISAVHPR0 en Islas Faroe II.- Resultados 2.1.- ISAV-HPR0 es prevalente en el cultivo de Salmón del Atlántico (Salmo salar) en Islas Faroes Durante el periodo de estudio de 53 meses (Agosto del 2005 a Diciembre del 2009), se detectaron 2.787 (8.1 %) muestras positivas a ISAV-HPR0, de un total de 34.573 muestras analizadas. La prevalencia anual de ISAV-HPR0 fluctuó entre un 0% el año 2005 y un 15.1 % en el año 2007. La frecuencia de positivos se incremento con cambio de metodología de análisis (RT-PCR convencional a real time RT-PCR) y metodología de muestreo, uso de branquias (tabla 1). 2.2.- ISAV-HPRO muestra una tendencia diferente de tropismo tisular que ISAV virulento La detección en paralelo de ISAV-HPR0 en branquias y riñón muestras diferencias significativas en los resultados, observándose un porcentaje significativamente superior en branquias respecto de riñón. Solo 14 peces de un total de 1.095 fueron positivos en el riñón y no en branquias (tabla 2). La media del valor de Ct en branquias 28.1 con un rango entre 19.0 to 36.7, mientras que en riñón la media del valor de Ct en riñón fue de 35.9 con un rango de 31.4 a 36.5. Considerando ciclos de producción cerrados en la vigilancia un total de 27 de 31 (87 %), fueron positivos a ISAV. Riñón Año 2005 2006 2007 2008 2009 Total Total N Riñón Branquias ISAV +ve N % Total N ISAV +ve N % 2998 0 7157 10 6505* 142 - 0 0.1 2.2 - 5387* 811 15.1 9066 1100 12.1 8847 8847 9.6 16660 152 0.9 23300 2763 11.9 Christiansen et al., 2011 Tabla 1: Resultados de programa de Vigilancia, centros de cultivo Salmón del Atlántico (Salmo salar), Islas Faroe. La tabla muestra el número de peces (N) muestreados por año, positivos en número y porcentaje (N, ISAV +ve), testeados por RT-PCR (Agosto 2005 a Marzo 2007) y realtime RT-PCR (Abril 2007 a Diciembre 2009). * En Enero y Febrero del 2007 se muestreo solo riñón de 1118 peces. www.marcosgo do y. c o m Negativo Positivo Total Negativo 480 (43,83%) 14 (1,27%) 494 Positivo 474 (43,28%) 127 (11,59%) 601 954 141 Branquias Total 1095 Christiansen et al., 2011 Tabla 2: Frecuencia de detección de ISAV-HPR0 de 16 poblaciones de muestreo en las cuales al menos una branquia o riñón fueron positivas. El muestreo incluye 1.095 peces de los cuales fue analizado en paralelo branquias y riñón mediante real time RT-PCR. 2.3.- ISAV-HPR0 no se asocia con signos clínicos o enfermedad A pesar de la alta prevalencia de ISAV-HPR0 en Salmón del Atlántico (S. salar), no se detectó la presencia de signos clínicos o cambios patológicos consistentes con Anemia Infecciosa del Salmón (cuadros clínicos). Situación de ISAVHPR0 en Islas Faroe Después de la infección primaria de ISAV-HPR0, la diseminación del virus muestra dos patrones, caracterizados por la presencia de uno o dos peaks a lo largo del ciclo de producción (Figura 2 y 3). Un análisis de 18 ciclos muestra que el 56 % de estos presenta el patrón de un peak, con una prevalencia promedio de ISAV-HPR0 de 74 % y un 6 % de los ciclos presentaron el patrón de dos peaks, con prevalencia de ISAV-HPR0 promedio de 64 %. El tiempo promedio entre el primer y segundo peak es de 7,5 meses con un rango de 4 a 12 meses. el ISAV aislado responsable del brote de ISA en Faroes, mientras que el segundo grupo se encuentra relacionado con los aislados de ISAV European-like en Norte América. Provalence in gills (%) 2.4.- Las infecciones por ISAV-HPR0 son temporales y altamente infecciosas 100 75 50 25 0 2 3 4 6 7 8 9 1113 14 151617 18 19 Months post seawater transfer 2.5.- Los centros marinos se infectan por ISAVHPR0 después de transferidos al mar 2.6.- La infección por HPR0 es estacional La figura 5 muestra la prevalencia de ISAV-HPR0 entre el año 2007 y 2009, basado en el screening de branquias. La detección de ISAV-HPR0 en branquias presenta un patrón estacional con alzas y bajas, registradas en invierno y verano respectivamente. Figura 2: Patrones de infección de ISAV-HPR0 en cultivo de Salmón del Atlántico (Salmo salar), Islas Faroes. El gráfico muestra patrón caracterizado por un peak, 7 meses post transferencia al mar. Provalence in gills (%) La detección de ISAV-HPR0 después de transferidos los peces al mar ocurre en promedio a los 8,5 meses, rango 1 a 20 meses (figura 4). Si se considera solo aquellos sitios en los cuales se utilizo branquias como tejido, el promedio de la primera detección fue de 7,7 meses con un rango 1 a 13 meses. Christiansen et al., 2011 100 75 50 25 0 2 3 4 6 7 8 9 1113 14 151617 18 19 Months post seawater transfer 2.7.- En Islas Faroes se encuentran dos genotipos de ISAV-HPR0 Christiansen et al., 2011 El análisis de las secuencias genéticas muestra que en Islas Faroes se encuentran dos clases de aislados de ISAV-HPR0 identificadas como EU-G2-like y EU-NA-like. El primero se encuentra genéticamente relacionado con Figura 3: Patrones de infección de ISAV-HPR0 en cultivo de Salmón del Atlántico (Salmo salar), Islas Faroes. El gráfico muestra patrón caracterizado por dos peaks, el primero de estos 10 meses y el segundo 16 meses, post transferencia al mar. www.marcosgo do y. c o m Situación de ISAVHPR0 en Islas Faroe III.- Discusión El presente estudio muestra que ISAV-HPR0 en Islas Faroes presenta una distribución endémica y estacional, no asociado a mortalidad, presencia de signos clínicos o cambios histopatológicos. Esto apoya la hipótesis de que la infección subclínica por ISAV-HPR0 no se relaciona directamente con la presentación de brotes de ISA. Los datos analizados muestras dos patrones de infección, el primero caracterizado por presentar un peak de infección a lo largo del ciclo de producción, con un rápido incremento en la prevalencia y clearence del virus y un segundo patrón con dos peaks a lo largo del ciclo de producción, siendo el último sugerente de una reinfección. 100 Provalence in gills (%) Accumullated % infected Este estudio apoya la hipótesis sobre el probable origen de que las cepas de ISAV causantes de los brotes correspondan a una adaptación de virus ISAV-HPR0 endémicos y de baja patogenicidad (Christiansen et al., 2011). 50 0 50 25 0 FMAMJJASONDJ FMAMJJASONDJ FMAMJJASOND 2007 0 5 10 15 20 2008 2009 Christiansen et al., 2011 Months post seawater transfer Christiansen et al., 2011 Figura 4: Periodo de tiempo acumulado post transferencia hasta la primera detección de ISAV-HPR-0. El promedio de infección fue de 8,5 meses post transferencia al agua de mar (rango de 9 a 20 meses). www.marcosgo do y. c o m Figura 5: Prevalencia mensual de ISAV-HPR0 en 10 sitios de producción de Salmón del Atlántico (Salmo salar), entre los años 2007 y 2009. La prevalencia alcanza el peak en los meses de de invierno.