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EXPERIENCIAS EN
EL CONTROL DE
MICOTOXINAS
Pilar Jiménez
Laboratorio de Salud Pública de Madrid
JORNADAS AESAN, 5-7 Junio 2013
LABORATORIO SALUD PUBLICA
Fundado en 1877 (Lab. Municipal de Higiene)
Actualmente adscrito a Madrid Salud
51 trabajadores en plantilla
Oferta analítica
+200 ensayos acreditados por ENAC




Alimentos y bebidas
Aguas continentales
Aire: Control de calidad ambiental
Ensayos FQ, Biológicos, Parasitológicos, Micro
ACTUACIONES
PROGRAMADAS (PAP)
Inspección y muestreo
Controles analíticos
Evaluación de las actividades
MICOTOXINAS
Reglamento CE 1881/2006
Límites máximos (LMR s)
Reglamento CE 401/2006
Criterios
• REQUISITOS DEL MUESTREO
• REQUISITOS DE LOS METODOS DE
ANALISIS (Precisión, Recuperación)
• EXPRESION DE RESULTADOS
NOTIFICACIONES RASFF
AFLATOX
2003
2004
2005
2006
2007
2008
2009
2010
2011
762
839
946
801
705
902
638
649
585
10
4
3
2
11
DON
FUMON
15
14
2
15
9
2
1
3
4
OTA
26
27
42
54
30
20
27
34
35
6
7
669
688
635
PATU
ZEARA
Total
803
880
996
3
1
6
2
878
760
933
RASFF-2011 Annual Report
TOMA DE MUESTRAS
Planificación anual
• Revisión trimestral
PROGRAMA 5: CONTROL DE
CONTAMINANTES EN ALIMENTOS
 Micotoxinas
 Metales pesados
 Nitratos
 HAP s
 Acrilamida
TOMA DE MUESTRAS
Requisitos del muestreo
Tipo de muestras
Productos preferentes
Peso o volumen
Subdivisión de muestra
Ficha de producto
OFERTA ANALITICA
PRODUCTO/MATERIAL
A ENSAYAR
ENSAYO
ENSAYOS
nº LE/416
NORMA/PROCEDIMIENTO
DE ENSAYO
Aflatoxinas por ELISA
(screening)
Frutos secos
Cacahuetes
Especias
Limites de detección:
≥ 2,0 µg/kg: Cacahuetes para consumo
directo, Frutas desecadas (excepto higos
secos)
MA-42-EE
≥ 5,0 µg/kg: Especias, Avellanas, Nuez de
Brasil, Higos secos.
≥ 8,0 µg/kg: Cacahuetes para tratamiento
posterior, Almendras, Pistachos.
Frutos secos
Cacahuetes
Cereales
Especias
Alimentos infantiles
Leche líquida y en polvo
Preparados y alimentos
para lactantes
Aflatoxinas por CL-FLD
≥ 0,50 µg/kg Frutos secos, cacahuetes,
cereales y especias
MA-22-HPLC
≥ 0,050 µg/kg Alimentos infantiles
Aflatoxina M1 por CL-FLD
≥ 0,0050 µg/kg
MA-20-HPLC
OFERTA ANALITICA
PRODUCTO/MATERIAL
A ENSAYAR
Alimentos a base de
maíz
Alimentos y Bebidas a
base de manzana
Vino
Café tostado y soluble
Cereales
Alimentos infantiles a
base de cereales
ENSAYO
Fumonisinas por CL-FLD
≥ 100 µg/Kg
Patulina por CL-DAD
≥ 5,0 µg/kg
ENSAYOS
nº LE/416
NORMA/PROCEDIMIENTO
DE ENSAYO
MA-15-HPLC
MA-19-HPLC
Ocratoxina A por CL-FLD
≥ 0,30 µg /kg
≥ 1,2 µg /kg
≥ 0,50 µg /kg
≥ 0,10 µg /kg
infantiles
Vino
Café tostado y soluble
Cereales
Alimentos y leches
MA-13-HPLC
PROCESO ANALITICO
PREPARACION
MOLTURACION
CALIBRACION Y
DETERMINACION
EXTRACCION
PURIFICACION
PREPARACIÓN DE MUESTRAS
MOLTURACIÓN MUESTRA
C. Minorista
< 1 kg
C. Mayorista (PIF)
20-30 Kg
Medios para garantizar
la homogeneización y
molturación de
la muestra recibida
(FVO-Oct 2012)
DETERMINACIÓN DE
AFLATOXINAS
1. METODO SCREENING (EIE)
Kit indicador de AF s totales AFLACARD TOTAL
Negativo
< LD (2,5,8
Positivo
Confirmación HPLC
µg/kg
Ventajas:
 Dar una respuesta rápida (15 minutos)
 Sensibilidad “a medida” (nivel de screening)
 Requisito: Aceptación del cliente
)
DETERMINACIÓN DE
AFLATOXINAS (screening)
PRODUCTO A ENSAYAR
NIVEL DE CRIBADO (LD)
 Cacahuetes consumo directo
 Frutas desecadas (excepto higos
secos)
 Cereales y harinas
2,0
µg/kg




Especias
Avellanas y Nuez de Brasil
Higos secos
Maíz y arroz
5,0
µg/kg
 Cacahuetes para tratamiento
posterior
 Almendras
 Pistachos
8,0
µg/kg
LMR s Micotoxinas.pdf
DETERMINACIÓN DE
AFLATOXINAS II
2. METODO CONFIRMACIÓN (LC-FLD)
 Columnas de inmunoafinidad (selectividad)
 Derivatización postcolumna con Br2 (sensibilidad)
 Mº cuantitativo LQ= 0,5 µg/kg y 0,05 µg/kg (*)
 Resultado en µg/kg  x
U (k=2, α=0,05%)
 Resultado corregido: x = x · factor recuperación
 Versátil: aplicable a amplio tipo de matrices
(*) Alimentos infantiles
ASEGURAMIENTO CALIDAD
CONTROL DE CALIDAD INTERNO/serie
 Calibración diaria (4-5 niveles)
 Control de residuales relativos
 Control de pendiente (x 2•SD)
 Recuperación: MRC o MC reforzada
 Muestra Conforme (LQ)
 Muestra NO Conforme (≥ LMR)
 Criterio de matriz blanca (< 1/3 LQ) (rotación)
 Precisión: 1 muestra duplicada
CRITERIOS: RCE 401/2006
ASEGURAMIENTO CALIDAD
CONTROL DE CALIDAD EXTERNO
Ejercicios de intercomparación
Periodicidad Anual:
 Aflatoxinas
 Ocratoxina A
Periodicidad Bienal:
 Patulina
 Fumonisinas
 Aflatoxina M1
CRITERIOS: Guía ENAC-14 y NT-03
CONTROL DE CALIDAD
2010
2011
Polvo Curry
(z= -0,2)
Pistachos
(z=-1,0)
2012
AFLATOXINAS
B1, B2, G1, G2 y
Totales
Almendra
(z= 0,5)
FUMONISINAS
B1 y B2
Maíz
(z= 0,6 y -0,6)
Maíz
(z= -0,5 y -0,3)
PATULINA
Zumo manzana
(z= -0,6)
Puré manzana
(z= -0,5)
Café tostado
(z=0,1)
Vino
(z= -2,1, 0,1, -0,4)
Trigo (z= 0,3)
Paprika (z=-1,3)
OCRATOXINA A
AFLATOXINA M1
Vino
(z= 0,7, 0,4, 0,7)
Leche polvo
(z= -1,6)
Maíz
(z= 0,7)
MUESTRAS MICOTOXINAS
PROGRAMADAS
AFLATOXINAS
B1, B2, G1 y G2
FUMONISINAS B1
y B2
PATULINA
OCRATOXINA A
AFLATOXINA M1
Nº TOTAL
2011
2012
2013
58 cacahuetes y
68 cacahuetes,
50 cacahuetes
frutos secos
frutos secos* y
especias
frutos secos y
especias
15 aperitivos maíz y
-
alimentos infantiles
-
25 zumos
10 zumos de
manzana y sidra
manzana
51 vino, café,
26 vino, café,
30 vino, café,
cereales,
especias
alimentos infantiles,
pimentón
especias
17 leches* y
11 leches y
preparados para
lactantes
preparados para
lactantes
151
132
*1 leche en polvo (M1) y 2 pistachos (AFLA´S) > L.Max
-
-
80
MUESTRAS MICOTOXINAS
NO PROGRAMADAS (PIF)
AFLATOXINAS TOTALES
(B1, B2, G1 y G2)
Nº TOTAL
CONFIRMACION (HPLC)
CONFORMES
2011
Cacahuetes
Almendra
Pistachos
Especias
2012
Cacahuetes
Almendra
Pistachos
Cúrcuma
Jengibre
219
199
47
22
100%
100%
En 2012 se establecen los niveles de screening en 2, 5 y 8
µg/kg reducción en el nº de confirmaciones
C/ Emigrantes, 20
28043 MADRID
www.madridsalud.es
msplaboratorio@madrid.es
MUCHAS GRACIAS
POR
SU ATENCIÓN