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EFICACIA DE
PROCEDIMIENTOS DE
MUESTREO EN
SUPERFICIES DE ACERO
INOXIDABLE
CONTAMINADAS CON
Listeria monocytogenes
Diego Gómez
Agustín Ariño
J.J. Carramiñana
Carmina Rota
Javier Yangüela
Estrategia de muestreo ambiental → Determinación
presencia de microorganismos patógenos en ambiente
ICMSF (1988):
Muestrear los equipos
Tomar muestras de alimento durante el procesado
Determinar la carga microbiana de los alimentos una
vez que ya se han procesado
Tomar muestras del ambiente
Características de un método de muestreo: eficaz,
simple, rápido, económico, sensible y no presentar riesgo
para el operador
OBJETIVOS
• Puesta a punto y aplicación de técnicas de
muestreo ambientales para el control
microbiológico de Listeria monocytogenes
• Elección del procedimiento que se muestre
más eficaz
Material y métodos
Suspensión Bacteriana
•
•
Listeria monocytogenes 935 -ATCC 13932- serovar 4b (humana)
Listeria monocytogenes 437/07 serovar 1/2b (cárnica)
105 UFC/100 cm2
Cultivo puro de L.
monocytogenes
(BHI)
Ajuste
transmitancia a
61% (1,9x108
UFC/ml)
135 ml agua
peptona 0,1%
1,26 ml
TOTAL
151,26 ml
15 g carne
picada de cerdo
1,6x106 UFC/ml
Contaminación de las superficies
0,1 ml
100 cm2
25 min a Tª ambiente
• Extender con asa Drigalski de vidrio
estéril
• Secado de la superficie (10-15 min)
Métodos de toma de muestras
Esponja
Toalla prehumedecida
Hisopo de algodón
Bolitas de estropajo de acero inoxidable
Minirrodillo de nailon (MRN)
Sistema Petrifilm
Placas RODAC de agar PALCAM y ALOA
Placas RODAC de agar PALCAM y de agar ALOA
Inóculo 0,15 ml/150 cm2 (≈103 L.m.)
500 g/10 s (ISO 18593)
104 y 105 L.m./150 cm2 NO RECUENTO
105 L.m./150 cm2
104 L.m./150 cm2
HOMOGENEIZACIÓN
Stomacher → en bolsa de Stomacher, 5 minutos
SIEMBRA EN PLACA Y RECUENTOS
Medios de cultivo:
Agar PCA: 1 ml homogeneización en masa (control)
Agar PALCAM: 0,25 ml con asa de Drigalski estéril
Agar ALOA: 0,25 ml con asa de Drigalski estéril
Resultados y discusión
Cada uno de los procedimientos ensayados se sometió a 5
réplicas
Los resultados se
Recuperación de los
repeticiones (PR)
expresan como Porcentajes de
recuentos obtenidos en las 5
Listeria monocytogenes 935
Procedimiento
MRN
Esponja
RODAC ALOA
Hisopo algodón
RODAC PALCAM
Bolita estropajo
Petrifilm
Toalla prehumedecida
PR
7,8
6,1
2,6
1,4
1,4
1,0
0,4
0,3
p < 0,001
Listeria monocytogenes 437/07
Procedimiento
RODAC ALOA
RODAC PALCAM
Petrifilm
MRN
Esponja
Bolita estropajo
Hisopo algodón
Toalla prehumedecida
PR
4,2
3,9
2,1
1,5
1,2
0,4
0,2
0,1
p < 0,001
2 cepas Listeria monocytogenes
Procedimiento
MRN
Esponja
RODAC ALOA
RODAC PALCAM
Petrifilm
Hisopo algodón
Bolita estropajo
Toalla prehumedecida
MEDIA
PR
4,7
3,7
3,4
2,7
1,3
0,8
0,7
0,2
PCA 24h
PCA 48h
PALCAM
24h
PALCAM
48h
1,8
1,8
1,9
2,0
p < 0,01
ALOA 24h ALOA 48h
2,3
2,4
No diferencias significativas entre agar PALCAM y ALOA
No diferencias significativas entre tiempo de incubación 24 ó 48 horas
Resultados convenientes con cualquier agar tras 24 h incubación
7 métodos L.
monocytogenes 935
vs
7 métodos L.
monocytogenes
437/07
ANOVA 2
vías
Esponja
Hisopo algodón
Toalla prehumedecida
Cepa
Método
vs
82% de
variación
MRN
MRN (4,7%)
ESPONJA (3,7%)
Conclusiones
El nuevo sistema de toma de muestras en superficie de
acero inoxidable “MINIRRODILLO DE NAILON”,, utilizado por
primera vez en este estudio, ha demostrado ser el que
recupera mayor cantidad de Listeria monocytogenes
MUCHAS
GRACIAS
POR SU
ATENCIÓN