Download Capacidad de respuesta de proliferación mitogénica modulada de

Capacidad de respuesta de proliferación mitogénica
modulada de linfocitos en cultivos de sangre después
de una dieta baja en carotenos y suplementación de
carotenoides combinados en mujeres 1-3
Tim R Kramer y Betty J Burri
RESUMEN Para determinar los efectos de los carotenos dietéticos en
la capacidad de respuesta de proliferación mitogénica de linfocitos en
sangre in vitro, nueve mujeres premenopáusicas fueron alimentadas
con una dieta baja en carotenos por 120 d. Una dosis baja de caroteno (0.5 mg/d) fue otorgada a cinco personas durante los días 1 60, mientras que cuatro recibieron un placebo. Todos los sujetos
recibieron una dosis reducida de suplemento de -caroteno (0.5 mg/d)
en los días 61 - 120, además de un complejo de carotenoides en los
días 101 - 120. El significado ( SEM) de la concentración de caroteno en suero para las personas que recibieron suplementación de
-caroteno y placebo combinados (n  9) no se redujo en forma
significativa con respecto a la registrada en el día 1 (1.27  0.24
mol/L) a los días 60 (0.66  0.14 mol/L) y 100 (0.91  0.38 mol/L),
pero en el día 120 (3.39  0.44 mol/L) se incrementó por arriba de
las de los días 1, 60 y 100. La máxima capacidad de respuesta de
proliferación mitogénica de linfocitos sanguíneos in vitro a la dosis
óptima de fitohemaglutinina (PHA, siglas basadas en el término en
inglés) se redujo en los días 60 (P  0.025) y 100 (P  0.0001), pero
se corrigió a sí mismo en el día 120 a un valor arriba de aquellos del
día 1 (P  0.04), del día 60 (P  0.0001), y del día 100 (P  0.0001).
Los descubrimientos presentes demuestran que una dieta reducida en
carotenos tuvo un efecto sorpresivo en la máxima capacidad de
respuesta de proliferación mitogénica de linfocitos sanguíneos in vitro,
la cual no fue corregida con la suplementación de -caroteno de dosis
reducida sino con el complejo de carotenoides derivados de vegetales
ricos en carotenoides.
Am J Clin Nutr
1997;65:871-5.
PALABRAS CLAVE -caroteno, carotenoides, proliferación de T
linfocitos, capacidad de respuesta mitogénica, cultivos de sangre,
fitohemaglutinina
INTRODUCCIÓN
La asociación positiva entre el consumo de frutas y vegetales ricos en
carotenoides y un menor riesgo de ciertos tipos de cáncer específicos
ha sido consistentemente documentada mediante la investigación
epidemiológica (1- 9). El mecanismo que subyace a esta relación aún
no está claro. Un mecanismo posible es el incremento de las
respuestas inmunes a causa de los carotenoides (10, 11),
fitonutrientes no carotenoides, o ambas (12, 13). Estudios en animales
demuestran un efecto que incrementa la inmunidad con el -caroteno
aislado (14, 15). Descubrimientos similares en humanos han sido
inconsistentes. Parte de esto puede estar relacionado al uso de
diferentes sistemas de cultivos celulares para la medición de la
capacidad de respuesta de proliferación mito génica de los linocitos en
sangre en estudios de suplementación de -caroteno. Utilizando
células mononucleares periferales de linfocitos en sangre en estudios
de suplementación (PBMCs, por sus siglas en inglés), que contienen
leucocitos mononucleares no adherentes y adherentes plásticos
(referidos aquí como células no adherentes y adherentes,
respectivamente) cultivadas en suero autólogo, van Popple et al (16)
encontró una mayor capacidad de respuesta de proliferación mito
génica de linfocitos sanguíneos in vitro a la fitohemaglutinina (PHA)
pero no a la concanavalina A (Con A) en hombres fumadores
suplementados por 14 semanas con 20 MG de -caroteno al día. Este
incremento no fue observado cuando las PBMCs fueron cultivadas en
medios que contenían suero de bovino fetal heterólogo. Moriguchi et al
(17) encontró una mayor capacidad de respuesta de proliferación mito
génica de linfocitos en sangre in vitro a la (PHA) y Con A en jóvenes
varones no fumadores saludables que fueron suplementados por 30
días con 30 MG de -caroteno al día cuando las PBMCs fueron
purificadas más que consistir principalmente en células no adherentes
y cultivadas como linfocitos sanguíneos prefiérales (PBLs) en suero
heterólogo. Al utilizar PBMCs, pero cultivadas en suero humano no
autólogo tipo AB, Daudu et al (18) no observó cambios en la capacidad
de respuesta de proliferación mito génica de linfocitos sanguíneos in
vitro a la PHA o Con A en mujeres premenopáusicas saludables que
experimentaron reducción y repleción de -caroteno. Así, un efecto
modulador de -caroteno en la capacidad de respuesta de proliferación
mitogénica en linfocitos sanguíneos in vitro fue descubierta cuando las
células fueron cultivadas como PBMCs, las cuales contienen células
adherentes y no adherentes, en presencia de plasma autólogo (16) o
cuando las células no adherentes, con un reducido número de células
adherentes, fueron cultivadas como PBLs en suero heterólogo (17). El
efecto modulador, sin embargo, no se encontró cuando las PBMCs
fueron cultivadas en medio de cultivo de tejido que contenía suero
heterólogo (16) o suero humano no autólogo tipo AB (18). Para imitar,
en todo lo posible, el estado in vivo elegimos usar el método del
cultivo en sangre entera (19 - 22) para determinar los efectos de una
dieta
baja en carotenos y de la suplementación con una dosis
reducida de -caroteno (0.5 mg/d) y carotenoides combinados
derivados de vegetales en la capacidad de respuesta de proliferación
mitogénica de linfocitos sanguíneos in vitro a varias dosis de PHA.
------------------------------------------1 Del Departamento de Agricultura de los Estados Unidos, Servicio de
Investigación en Agricultura, Centro de Investigación en Nutrición
Huaman Beltsville, Unidad de Investigación en Carotenoides, Beltsville,
MD, y el Centro de Investigación en Nutrición Humana de Occidente,
Presidio de San Francisco.
2 La referencia al nombre de una compañía o producto no implica
aprobación o recomendación del producto por el Departamento de
Agricultura de los Estados Unidos excluyendo otros que pueden ser
apropiados.
3 Las solicitudes de reimpresión deben ser dirigidas a TR Kramer,
USDA, ARS, BARC-EAST, Building 307, Room 216, 10300 Baltimore
Avenue, Beltsville, MD 20705, E-mail: kramer@307.bhnrc.usda.gov
Recibido el 7 de marzo, 1996.
Aceptado para publicarse el 14 de octubre de 1996.
___________________________________________
Am J Clin Nutr 1997;65:871-5 Impreso en los Estados Unidos de
América. © 1997 Sociedad Americana de Nutrición Clínica.
La Sociedad Americana para la Nutrición Clínica Inc. no respalda
ninguna empresa comercial.
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SUJETOS Y MÉTODOS
Doce mujeres premenopáusicas, saludables, con peso normal con
edades que oscilan entre 33.3  7.5 y (rango: 23 - 43 y ) fueron
seleccionadas para el estudio. Una persona no completó el estudio y
dos siguieron un calendario diferente al del grupo principal, así que sus
resultados no fueron incluidos en el análisis de datos. Todas las
personas vivieron en la unidad de investigación metabólica (MRU, por
sus siglas en inglés) del Departamento de Agricultura de los Estados
Unidos, el Centro de Investigación en Nutrición Humana de Occidente
(WHNRC en el Presidio de San Francisco, durante el estudio de 120
días. El protocolo de estudio fue aprobado por el Comité de Revisión
de Temas Humanos de la Universidad de California, Davis, y por el
Comité de Revisión del Departamento de Agricultura en la Universidad
de Tufts. Fue dirigido de acuerdo con la Declaración de Helsinki de
1975 revisada en 1983.
Diseño de la investigación
Los individuos consumieron una dieta baja en carotenos consistente en
alimentos familiares, comercialmente disponibles en ingestas de
energía proporcionales a 55%, 14% y 3% de carbohidratos, proteínas
y grasas, respectivamente, a lo largo del estudio de 120 días. La dieta
contenía  0.075 MG de -caroteno al día (alrededor de 90% del
consumo de carotenoides), que es  4.1% del consumo estimado de
1.8 mg/día por parte de las mujeres de Estados Unidos en edad
reproductiva (23). En los días 1 - 60 del estudio cinco personas
seleccionadas al azar recibieron 0.5 mg de -caroteno al día derivado
de caroteno seco (lote 14240; Hoffmann - La Roche Inc, Nutley, NJ) y
los cuatro sujetos restantes recibieron tomas libres de caroteno (lote
312581; Hoffman - La Roche Inc). Todas las personas recibieron 0.5
mg de -caroteno al día durante los días 61-120 del estudio, y en los
20 días finales (días 101 - 120) del estudio recibieron carotenoides
adicionales en tres cápsulas de carotenoides combinados por día (NeoLife Company of America, Fremont, CA) (Tabla 1). A todos los
individuos se les permitió hacer ejercicio en un determinado nivel de
actividad que no causara mayor cambio en el peso corporal, en la
composición corporal o en la proporción metabólica. El peso corporal
se mantuvo constante ( 1 kg) mediante ajustes en el consumo
energético. El plan del menú consistió en una rotación de 6 días
basado de alimentos familiares con reducida cantidad de frutas,
vegetales y jugos ricos en carotenos. A todas las personas se les
dieron vitaminas y minerales suplementarios al  100% de la dosis
dietética recomendada (RDA) de todos los micronutrientes
establecidos (25). El retinol y los carotenos de la dieta, suplementos
alimenticios y muestras de suero fueron extraídos y analizados
utilizando los métodos HPLC reportados anteriormente (26, 27).
Tomas de sangre para el análisis de linfocitos de sangre entera
A cada sujeto se le tomo una muestra de 3-mL de sangre en ayuno en
la vena antecubital que fue depositada en un tubo estéril evacuado
que contenía 45 U (Farmacopea de los Estados Unidos) de heparina
sódica (Becton Dickinson Co, Rutherford, NJ) para la proliferación de
linfocitos. La sangre fue enviada por vía aérea al Laboratorio
Inmunológico del Centro de Investigación en Nutrición Humana de
Beltsville (BHNRC, por sus siglas en inglés) en Beltsville, MD, a través
de un servicio de entrega de un día para otro. El periodo entre la toma
de la muestra y el procesamiento de la sangre para la proliferación de
linfocitos in vitro fue de  26 h por cada periodo.
TABLA 1
Concentración de carotenoides de una cápsula que contiene una
mezcla de carotenoides 1,2
___________________________________________________________
________________________________________________________
Carotenoide
Contenido de la cápsula
Consumo de
Suplemento
mg
mg/d
-Caroteno
0.466
1.398
-Caroteno
1.102
3.306
-Criptoxantina
0.039
0.117
Luteína/zeaxantina
0.497
1.491
Licopeno
0.221
0.663
________________________________________________________
1 Carotenoid Complex; Neo-Life Company of America, Fremont, CA.
2 Determinado por HPLC (24).
Los números de leucocitos
Los leucocitos totales y las cuentas diferenciales parciales fueron
determinados en la sangre en ayuno del grupo que fueron tomadas en
tubos evacuados tratados con K3EDTA durante los días 1, 60 y 120 del
estudio utilizando un Analizador de Sangre Coulter JT (Coulter Corp,
Miami) de acuerdo con procedimientos de operación estandarizados.
Los valores del día 100 del estudio no estuvieron disponibles.
Capacidad de respuesta de proliferación mitogénica
Una versión ligeramente modificada del método de sangre entera
previamente descrito (28) para el análisis de la capacidad de respuesta
proliferativa mitogénica de linfocitos sanguíneos in vitro a la PHA fue
usada en el presente estudio. En resumen, la sangre en ayunas
tomada en heparina fue diluida 1:4 con un medio de cultivo de tejido
RPMI-1640 (Sigma Chemic al Co, St. Louis) en tubos de poliestireno
(Falcom; Becton Dickinson Co) para la preparación de cultivos de
sangre entera. El RPMI-1640 contenía L-glutamina (Sigma Chemical
Co) al 2.0 mmol/L y penicilina-estreptomicina de 100 000 U/L y 100
mg/L respectivamente, referido aquí como RPMI-1640. La solución
estándar de la PHA fue preparada en RPMI-1640, esterilizada por
filtración, administrada como partes alícuotas y almacenada a -20C.
Los cultivos fueron preparados en triplicado con los siguientes
componentes adicionados en orden: 1) 50 L de sangre diluida 1:4, 2)
50 L RPMI-1640 solo o con PHA en las concentraciones designadas, y
3) 100 L RPMI-1640 por depósito de cultivo de tejido (Corning Galss
Works, Corning, NY). Los cultivos contenían un volumen final de 200
L con la dilución d sangre final al 1:16.
La incorporación de 3Htimidina actividad específica de 248 GBq (6.7
Ci/mmol); Dupont NEN Products, Boston en la síntesis de ADN fue
usada como un estimado de la actividad proliferativa de la capacidad
de los linfocitos en sangre con capacidad de respuesta a la PHA en
cultivos sin (antecedente) y con PHA. Ocho series de cultivos de
sangre entera triplicados recibieron PHA (Sigma Chemical Co) al 0.0
(sin ser estimulados), 0.125, 0.25, 0.5, 1, 2, 4 u 8 g/cultivo y fueron
incubados por 72 horas a 37C en una incubadora con 5% de CO2 y
95% de aire húmedo. Veinte horas antes de terminar la incubación, 37
Kbq (1.0 Ci) se agregó 3Htimidina en cada cultivo. Al concluir la
incubación, los cultivos celulares fueron recolectados (Skratron Inc,
Sterling, VA) en filtros de fibra de vidrio. Los discos individuales de
ADN etiquetado con 3Htimidina (Ready Safe; Beckman, Palo Alto, CA)
fueron registrados en un contador de centelleo utilizando un programa
dpm de etiquetado sencillo con la actividad reportada como
dpm/cultivo. La capacidad de respuesta proliferativa mitogénica
máxima de los linfocitos sanguíneos in vitro a la PHA fue establecida
por la identificación del valor medio más alto de las series de cultivos
triplicados. La actividad máxima fue observada con más frecuencia en
las dosis de PHA de 2.0 y 4.0 g/cultivo de sangre entera. La
capacidad de respuesta proliferativa está expresada como
radioactividad (en Bq) media (SEM).
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Estadísticas
Cada variable fue analizada mediante el ajuste de un modelo
combinado de dos días. La variable de efecto fijo fueron los días de
estudio y la variable de efectos aleatorios fue el sujeto.
Adicionalmente, una estructura de discrepancia fue considerada para
explicar la correlación entre las mediciones repetidas en un sujeto
dado. Por cada variable, la media en cada día de estudio fue
comparada con la línea de base utilizando el procedimiento de
comparación múltiple de Turkey (29). El valor crítico fue seleccionado
de tal forma que la probabilidad de al menos un resultado falsopositivo (error tipo 1) fuera  5%.
Algunas variables fueron transformadas antes de ser analizadas (con
una transformación de log10 o raíz cuadrada) como corrección a la
heterogeneidad de discrepancia y problemas de distribución. La
transformación de los promedios hacia la escala original brinda un
estimado de la media de la población original. La transformación
adecuada fue seleccionada sobre la base del método de transformación
de poder Box-Cox (30). El programa software de computadora SAS
(SAS Institute Inc. Cary, NC) fue utilizado para análisis.
En el día 60 del estudio, los cinco sujetos suplementados con 0.5 mg
de -caroteno/día y los cuatro que fueron suplementados con placebo
durante los días 1 - 60 no mostraron diferencia (P  0.05) en la
proliferación de linfocitos en sangre. Debido a esta falta de diferencia,
los dos subgrupos fueron combinados para formar un solo grupo para
todos los análisis estadísticos presentados en este reporte.
RESULTADOS
-caroteno en suero
Las concentraciones promedio ( SEM) de -caroteno en suero para el
grupo combinado (n - 9) no tuvieron un decremento significativo con
respecto a la línea de base (día 1; 1.27  0.24 mol/L) en los días de
estudio 60 (0.66  0.14 mol/L) y 100 (0.91  0.38 mol/L). En el día
120 del estudio (3.39  0.44 mol/L) después de 20 días de
suplementación con tres cápsulas de carotenoides mixto por día, el
grupo mostró una concentración promedio significativamente más alta
(P  0.05) de -caroteno en suero que en los días 1, 60 y 100 del
estudio. Más resultados de este estudio sobre las concentraciones de
-caroteno en suero y otros carotenoides serán reportadas en otras
partes.
Cifras de leucocitos
El grupo no mostró un cambio significativo (P  0.05) en números
absolutos de leucocitos, predominando monocitos y linfocitos largos, a
lo largo del estudio. En los días 1, 60 y 120 del estudio,
respectivamente las cifras absolutas promedio de linfocitos y leucocitos
mononucleares de tamaño medio fueron 2.1, 1.9 y 2.0 X 109/L, y 0.4,
0.3 y 0.3 X 109/L, respectivamente.
Respuesta de proliferación mito génica
En la Figura 1 se presenta el promedio máximo y las respuestas
individuales de proliferación mitogénica de linfocitos en sangre en
cultivos de sangre entera en concentraciones (g/cultivo) de PHA
subóptimas (0.125, 0.25, 0.5 y 1.0 g PHA), óptimas (2.0 y 4.0 g
PHA) y post-óptimas (8.0 g PHA) para la actividad máxima del grupo
en los días 1, 60, 100 y 120. En comparación con la línea de base (día
1), el grupo mostró una dosis óptima individual y máxima
significativamente reducida (2.0 y 4.0 g PHA) en la respuesta de
proliferación mitogénica de linfocitos en sangre in vitro a la PHA en los
días de estudio 60 y 100. La suplementación del grupo en los días de
estudio 101-120 con tres cápsulas de carotenoides mezclados por día
corrigió las respuestas de proliferación de linfocitos contenidas que
fueron observadas en los días 60 y 100 del estudio, y aumentó en
forma significativa la respuesta en el día 120 del estudio por encima
de la de los días 1, 60 y 100. Con excepción del 0.25 g PHA/cultivo
en el día 100 del estudio, la respuesta de proliferación mitogénica
promedio de linfocitos en sangre in vitro en dosis subóptimas de PHA
(0.125, 0.25 y 0.5 g) para la actividad máxima no mostró diferencias
en la proliferación de linfocitos para el grupo durante el estudio. En la
dosis pre-óptima inmediata (1.0 g) de PHA para la respuesta de
proliferación mitogénica máxima de linfocitos en sangre in vitro, el
grupo mostró una tendencia hacia una proliferación de linfocitos
reducida en el día 100 del estudio y una actividad significativamente
mayor en el día 120 del estudio con respecto a los días 1 y 100. En la
dosis post-óptima (8.0 g) de PHA para la máxima respuesta de
proliferación mitogénica de linfocitos en sangre in vitro, el grupo
mostró una proliferación de linfocitos significativamente reducida en
los días 60 y 100 del estudio en comparación con los días 1 y 120 del
estudio, pero ya no mostraron diferencia entre los días 1 y 120 del
estudio.
Los CVs para las respuestas de proliferación mitogénica promedio de
linfocitos en sangre in vitro a la PHA fueron menores para las
respuestas de dosis máximas óptimas (2.0 y 4.0 g/cultivo) y postóptimas (8.0 g/cultivo), intermedias para las respuestas de dosis
inmediatas pre-óptimas (1.0 g/cultivos) y las más altas para las
respuestas de dosis subóptimas (0.125, 0.25 y 0.5 g/cultivo).
Basados en los datos que fueron transformados en log10 o raíz
cuadrada para la normalización en la distribución de la información, el
promedio de CVs durante el estudio para las dosis de PHA de 0.125,
0.25, 0.5, 1.0, 2.0, 4.0, 8.0 g/cultivo, y las respuestas máximas
fueron de 13.9, 19.3, 11.7, 6.5, 3.5, 3.4, 3.3 y 3.0 g/cultivo,
respectivamente.
DISCUSIÓN
Utilizando los cultivos de sangre entera, que contienen células
linfoideas adherentes y no adherentes, y plasma autólogo,
encontramos respuestas de proliferación mitogénica máxima de
linfocitos de sangre humana in vitro a la PHA en dosis óptimas en
mujeres adultas alimentadas con una dieta baja en carotenos, 90% de
los cuales fueron -carotenos (Figura 1). Encontramos que la
respuesta contenida no fue corregida por la suplementación en los
individuos con baja dosis de -caroteno (0.5 mg/d) pero fue corregida
con la suplementación de 20 días con concentrados de carotenoides
combinados. Estos descubrimientos no coinciden con los obtenidos en
un estudio comparativamente similar realizado por Daudu et al (18)
que utilizó PBMCs preparados por gradiente de densidad que también
contienen células linfoides adherentes y no adherentes cultivadas en
suero humano no autólogo tipo AB. Aunque había muchas similitudes
entre los dos estudios, hubo dos diferencias técnicas importantes que
pueden haber sido provocadas por la falta de coincidencia. Los
resultados reportados por Daudu et al (18) se refieren a las muestras
de sangre recolectadas y procesadas el mismo día en el WHNRC para
la proliferación de linfocitos in vitro. En el presente estudio, la sangre
fue recolectada en el WHNRC y mandada por vía aérea en un servicio
rápido de mensajería al BHNRC para el análisis de proliferación de
linfocitos en los cultivos de sangre entera. Por lo tanto, las muestras
en el presente estudio fueron procesadas 26 horas después de la
recolección. No está claro en el presente estudio qué efecto pudo tener
en los resultados el envío de un día para otro y la demora de 24 horas
en el procesamiento de muestras de sangre para determinar la
respuesta de proliferación mitogénica de linfocitos in vitro.
La respuesta de proliferación mitogénica máxima y promedio ( SEM)
de linfocitos en sangre en cultivos de sangre entera en
concentraciones subóptimas (0.125, 0.25, 0.5 y 1.0 g/cultivo) y postóptimas (8.0 g/cultivo) de fitohemaglutinina (PHA) in vitro en
mujeres postmenopáusicas con una dieta baja en carotenos por 120
días mediante una suplementación con carotenos mezclados durante
los 20 días finales (n  9). Los valores para los diferentes días del
estudio en cada concentración de PHA son significativamente
diferentes, P  0.05 (análisis estadístico descrito en Métodos)
Sin embargo, en experimentos que han sido completados
recientemente, encontramos que ese envío de un día para otro
realizado por vía aérea y la demora de 24 horas sufrida por los cultivos
de sangre entera, tuvieron un leve efecto en el promedio máximo de
respuesta de proliferación mitogénica de linfocitos de sangre in vitro
en dosis óptimas de PHA ( 4% reducido) y en el CV interindividual
promedio ( 4% incrementado). El envío y el proceso demorado sí
tuvieron, sin embargo, grandes efectos en la respuesta de proliferación
mitogénica promedio de linfocitos en sangre in vitro a una dosis
subóptima de PHA (el promedio se reduce 45% y 7% en los
experimentos 1 y 2 respectivamente con 0.25 g PHA/cultivo) y en los
CVs interindividuales (el promedio aumenta 52% y 13% en los
experimentos 1 y 2 respectivamente). Estos descubrimientos coinciden
con nuestra observación en el presente estudio de mayores valores CV
interindividuales para la respuesta de proliferación mitogénica de
linfocitos en sangre en dosis subóptimas en comparación con las dosis
óptimas de PHA. Los resultados de estos dos experimentos sugieren
que el envío de las muestras de sangre por vía aérea y la demora de
24 horas en el procesamiento de las muestras tuvo un pequeño efecto
en el presente estudio sobre la respuesta de proliferación mitogénica
máxima de linfocitos en sangre in vitro a dosis óptimas de PHA, pero
tuvo un efecto en la respuesta de la dosis subóptima. Los resultados
de los dos experimentos también demostraron la necesidad de
establecer curvas de respuesta de dosis cuando se determina la
respuesta de proliferación mitogénica máxima de linfocitos en sangre
en cultivos de sangre entera in vitro a la PHA cuando las muestras de
sangre son programadas para una demora de 24 horas en el proceso.
Una segunda diferencia metodológica entre el presente estudio y el de
Daudu et al (18) fue el tipo de sistema de cultivo celular utilizado para
medir la respuesta de proliferación mitogénica de linfocitos en sangre
in vitro. Daudá et al (18) usó PBMCs preparados por gradiente de
densidad cultivados en suero humano no autólogo tipo AB como el
sistema de cultivo celular. La respuesta de proliferación mito génica de
linfocitos en sangre en el presente estudio fue determinada en cultivos
de sangre entera, los cuales contienen su propio entorno natural de
componentes sanguíneos no separados.
Los resultados en el presente estudio y aquellos de van Poppel et al
(16) sugieren una posible relación entre el plasma autólogo y la
proliferación de linfocitos modulados con carotenos in vitro. Van Poppel
e al (16) reportó una mejor respuesta mito génica de linfocitos
cultivados in vitro en preparaciones de PBMC que contienen tanto
células adherentes como no adherentes en plasma autólogo de
hombres fumadores adultos saludables que fueron suplementados con
20 mg de -caroteno al día durante 14 semanas. Cuando el plasma
autólogo fue reemplazado por suero bovino fetal heterólogo…
no se observó mejoría. Los resultados del presente estudio y de otro
no publicado que involucran el consumo de alimentos ricos en
carotenoides en adultos saludables sugieren una asociación entre las
concentraciones de -caroteno y la respuesta de proliferación
mitogénica de linfocitos en sangre en cultivos de sangre entera frente
a la PHA; sin embargo, de acuerdo con los análisis de coeficiente de
correlación Pearson, ningún estudio mostró una relación significativa.
Los estudios están en proceso de determinar si la asociación está
relacionada con el contenido de carotenos de los PBMCs.
Utilizando PBLs no adherentes, después de la remoción de células
linfoides adherentes de la preparación PBMC a través de la adherencia
al plástico, Moriguchi et al (17) demostró una mayor respuesta de
proliferación mitogénica de linfocitos in vitro a la dosis óptima de PHA
(10 mg/L) en hombres jóvenes saludables no fumadores que fueron
suplementados con 30 mg de -caroteno durante 30 días. Sus
resultados pueden sugerir que la dependencia de células adherentes
requerida para la respuesta mitogénica de linfocitos in vitro a la dosis
óptima de PHA es reducida en hombres adultos suplementados con caroteno. El uso de cultivos de sangre entera en el presente estudio
para la proliferación de linfocitos in vitro nos previno de establecer el
rol de las células adherentes en la respuesta de proliferación
mitogénica modulada por caroteno. Los estudios futuros requieren
examinar esta posible relación. Los resultados del presente estudio
demuestran que una dieta baja en carotenos tiene un efecto
sorpresivo en la respuesta de proliferación mitogénica máxima de los
linfocitos en sangre del sistema inmune in vitro a una dosis óptima de
PHA. También demostramos que la supresión no es corregida con la
suplementación basada en una dosis baja de caroteno, pero sí es
corregida con concentraciones derivadas de vegetales ricos en
carotenoides, aun cuando la cantidad de -caroteno recibido por los
concentrados de carotenoides mezclados es relativamente pequeña
comparada con la mayoría de los estudios que involucran
suplementación de humanos con -caroteno aislado. Debido a esto y a
la falta observada de una relación significativa entre las
concentraciones de -caroteno en suero y la proliferación de linfocitos
in vitro, los estudios futuros deben evaluar el papel de otros
fitonutrientes que están ausentes en una dieta baja en carotenos o
presentes en concentrados de vegetales, que pudiera tener un efecto
modulador en la función de los linfocitos de las células inmunes.
Estamos agradecidos por la asistencia técnica de Mary Pat Howard y
de Terry R Neidlinger por el análisis de carotenoides de la cápsula de
carotenoides mezclados hecha de CMM Smith, y por los conocimientos
estadísticos de Jesse Chittman.
REFERENCIAS
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dietéticas y nutricionales en el cáncer; una revisión de la información
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