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UNIVERSIDAD DE SONORA DIVISIÓN DE CIENCIAS BIOLÓGICAS Y DE LA SALUD Formato para la Presentación de Proyectos Internos . CONCENTRADO DE INFORMACIÓN Tipo de Proyecto. Investigación Tiempo de Duración: 12 meses Individual Titulo del Proyecto: ―Evaluación del Calidad Proteica de Nuevas Variedades de Frijol (Phaseolus vulgaris) del Estado de Durango Mediante Bioensayos y Metodologías In-vitro‖ Director del Proyecto: Jesús Manuel Barrón Hoyos Grado: Doctorado en Ciencias Departamento: Departamento de Investigación y Posgrado en Alimentos Teléfono: (662) 2592207 Fax: (662) 2592208 E-Mail: jbarron@guaymas.uson.mx 1 UNIVERSIDAD DE SONORA DIVISIÓN DE CIENCIAS BIOLÓGICAS Y DE LA SALUD Formato para la Presentación de Proyectos Internos . Colaboradores — Utilizar mas hojas sí es necesario. Proporcionar el nombre, grado y departamento. Nombre: María del Refugio Falcón Villa Grado: Maestria en Ciencias Departamento: Departamento de Investigación y Posgrado en Alimentos Participará en el desarrollo de los bioensayos de calidad proteica, diseño de dietas, selección de animales de experimentación y supervisión del desarrollo de los bioensayos.. ___________________________________________________ Nombre: Rosario Anduaga Cota Grado: Químico Biólogo Departamento: Departamento de Investigación y Posgrado en Alimentos Participará en el establecimiento de los tiempos óptimos de remojo y cocimiento de las variedades de frijol. Además participa en las mediciones de dureza de los granos de frijol cocido por medio de celdas experimentales adaptadas al texturómetro Instron. _______________________________________________________ Nombre: José Luis Cárdenas López Grado: Doctorado en Ciencias Departamento: Departamento de Investigación y Posgrado en Alimentos Participará en el diseño de experimentos y en la asesoría del análsis de datos generados por el desarrollo del proyecto. _________________________________________________________ Nombre: Edgar Omar Rueda Puente Grado: Doctorado en Ciencias Participará en el establecimiento de las características agronómicas de las variedades de frijol empleadas en este estudio y en la asesoría sobre la relación entre atributos agronómicos y la calidad proteica de las variedades de frijol estudiadas. _________________________________________________________ Nombre: Francisco Javier Cinco Moroyoqui Grado: Doctorado en Ciencias Departamento: Departamento de Investigación y Posgrado en Alimentos Participará en la aplicación de metodologías alterantivas de calidad proteica (In-vitro) especificamente en la cuantificación de amino ácidos totales por cormatografía de HPLC. 2 UNIVERSIDAD DE SONORA DIVISIÓN DE CIENCIAS BIOLÓGICAS Y DE LA SALUD Formato para la Presentación de Proyectos Internos . APROBACIÓN DE LA ACADEMIA Y DEPARTAMENTO 1 Abril 2010 Fecha ___________________________________________ M.C. María Esther Orozco García Presidente de la Academia 1 Abril 2010 Fecha Academia de Nutrición y Toxicología ______________________________________ Academia ________________________________________ Dr. Armando Burgos Hernández Jefe del Departamento Departamento de Investigación y Posgrado en Alimentos ___________________________________________ Departamento 3 UNIVERSIDAD DE SONORA DIVISIÓN DE CIENCIAS BIOLÓGICAS Y DE LA SALUD Formato para la Presentación de Proyectos Internos . RESUMEN El frijol, en especial del género Phaseolus continúa siendo la fuente de proteína vegetal más importante en la dieta del Mexicano. Esta investigación está dirigida a evaluar la calidad proteica de 4 nuevas variedades de frijoles Phaseolus, provenientes de la estación experimental de mejoramiento de frijol de Durango, dependiente de INIFAP, de donde se van adquirir las muestras. Para la evaluación de calidad proteica se emplearán bioensayos de: % de digestibilidad, en sus tres versiones, y Razón Neta de Proteína (NPR). También se emplearán metodologías In-vitro, indicadoras de calidad proteica, con el propósito de seleccionar aquellas más convenientes para su utilización a nivel estación experimental. Las 4 variedades a estudiar serán: Flor de Mayo, Negro San Luis, Pinto, Pinto Durango, todas del genero Phaseolus. La variedad Pinto Bill Z, obtenida del campo experimental Costa de Hermosillo, será empleada como variedad de referencia. Las muestras después de ser limpiadas de impurezas, serán analizadas en sus propiedades de absorción de agua, estableciendo su tiempo optimo de remojo (Barrón y col. (1992). Las muestras hidratadas recibirán un cocimiento por ebullición, investigando sus tiempos óptimos de cocimiento, de acuerdo a la metodología sugerida por Barrón y col. (1992). Las muestras cocidas serán deshidratadas en un secador tipo túnel (55 C) y posteriormente molidas a un tamaño de partícula de 60 mesh. Las harinas cocidas de frijol serán incorporadas en dietas experimentales a un nivel de proteína del 10%, para realizar los bioensayos con ratas. Los bioensayos con ratas serán por 14 días, midiendo el % de digestibilidad (materia seca, aparente y verdadera de N). Las muestras de fríjol cocido serán además analizadas en su % de digestibilidad in-vitro (Satterlee, 1982), contenido de amino ácidos totales, por cromatografía de HPLC, PDCAAS y métodos computarizados de C-PER y DC-PER. OBJETIVOS Y METAS Objetivo General Evaluar la calidad proteica por medio de bioensayos y por metodologías In-vitro de cuatro nuevas variedades de frijol del Estado de Durango Objetivos particulares Determinar los tiempos óptimos de remojo y cocimiento de las 4 nuevas variedades de frijol y de la variedad comercial (referencia), Incluyendo la medición de ―dureza‖ de manera objetiva por el texturómetro Instron, empleando una celda de extrusión por alambres. Obtener las harinas de frijol cocido, de las 4 nuevas variedades de frijol y la variedad comercial de referencia. Evaluar la calidad proteica de nuevas variedades de frijol mediante bioensayos de digestibilidad de materia seca, digestibilidad aparente, digestibilidad verdadera de nitrógeno y razón neta de proteína (NPR). Cuantificar los amino ácidos totales, por cromatografía de HPLC de las 4 nuevas variedades de frijol y la variedad de referencia. Evaluar la calidad proteica in-vitro de las 4 nuevas variedades de frijol y variedad de referencia, empleando inciadores como Score Químico, PDCAAS y metodos computarizados de C-PER y DC-PER. Metas: Establecer si existen diferencias significativas en calidad proteica entre estas variedades de frijol. 2. Seleccionar de las metodologías (In-vitro) empleadas, cuál(s) resultan factibles de proponer para su empleo a nivel estación experimental. 4 UNIVERSIDAD DE SONORA DIVISIÓN DE CIENCIAS BIOLÓGICAS Y DE LA SALUD Formato para la Presentación de Proyectos Internos . Protocolo del proyecto INTRODUCCION El frijol (Phaseolous vulgaris L.) constituye la principal fuente de proteína, además de carbohidratos, vitaminas del complejo B y minerales (hierro, magnesio, zinc) de la población de América Latina (Leterme y Muñoz, 2002; Quintana et al., 2000; Rehman et al., 2001; ReyesMoreno y Parédes-López, 1993). En México, la producción total de frijol fue de 1.38 millones de toneladas (SAGARPASONORA, 2007), siendo los principales estados productores, Zacatecas (26.8%), Sinaloa (16.9%), Durango (9.5%), Chiapas y Chihuahua con un 6.3 y 5.6%, respectivamente. El consumo de frijol forma parte de los hábitos alimentarios de la población, debido a su alto contenido de proteína (20 - 30%) y menor costo en relación con la proteína de origen animal (Quintana et al., 2000). Nutricionalmente hablando, el frijol se caracteriza por su deficiencia en aminoácidos azufrados y triptófano, por lo que complementa el valor nutricional de las proteínas de cereales (Champ, 2001), por su alto contenido de lisina. Sin embargo, el valor nutricional se encuentra afectado por la presencia de factores antinutricionales como inhibidores de tripsina, lectinas, taninos, fitatos, polifenoles, oligosacáridos, (Champ, 2001; Hughes, 1996; Stanley, 1992). Las variedades comerciales de frijol son producto de programas de mejoramiento de variedades en estaciones experimentales, comúnmente asociadas al sector público gubernamental. En estos programas de mejoramiento se estudian y producen nuevas variedades que se seleccionan generalmente basándose en sus atributos agronómicos como: comportamiento del cultivo, eficiencia en el uso de aguas y nutrientes, resistencia a enfermedades y plagas, rendimiento, por mencionar los más importantes. Sin embargo, otras características importantes como comportamiento en el procesado, preferencias del consumidor, atributos tecnológicos y principalmente el aspecto nutricional no son considerados para finalmente, liberar esas variedades mejoradas para su explotación comercial y consumo. De lo anterior, resulta muy importante evaluar la calidad nutricional del frijol, con el propósito de complementar los resultados de los estudios de mejoramiento agronómicos y contar con nuevas variedades de frijol de mayor importancia nutricional, teniendo en cuenta, que cobra relevancia en estratos sociales donde el frijol es ampliamente consumido y este alimento significa su más importante aporte de proteína. Por ello, resulta muy importante evaluar la calidad proteica de nuevas variedades de frijol, ya sea por la necesidad de informar al consumidor y o bien para aportar mayor información sobre el valor nutricional y calidad de proteína de estas variedades, donde el fitomejorador en estaciones experimentales necesita esta información de carácter nutricional, que complemente sus investigaciones que se restringen al aspecto agronómico; con el propósito de llevar a cabo una mejor selección de variedades de frijol. . 5 UNIVERSIDAD DE SONORA DIVISIÓN DE CIENCIAS BIOLÓGICAS Y DE LA SALUD Formato para la Presentación de Proyectos Internos . ANTECEDENTES Importancia de las Leguminosas Las leguminosas son un grupo de plantas perteneciente a la familia Leguminoseae (Belitz, 1978), las cuales representan una alternativa importante en la dieta, debido a sus propiedades nutriticionales y a su costo relativamente bajo, características que las convierten en un producto básico (Tharanathan y Mahadevamma, 2003; Hedley, 2001) . Las leguminosas son una fuente excelente de proteína (Khatoon y Prakash, 2004; Lee et al., 2007) especialmente en países en desarrollo, además contiene carbohidratos, vitaminas, minerales y dependiendo de la especie una baja proporción de lípidos (1-3 %) (Lee et al., 2007). Existe una gran variedad de géneros y especies de leguminosas, sin embargo, aproximadamente 12 tienen importancia económica y se consumen en forma de semilla inmadura o seca, (Castañeda, 2000) entre las principales se encuentra el frijol, soya, lenteja y garbanzo (ILDS, 2004). Origen del Frijol Desde la prehistoria, el frijol Phaseolus vulgaris L. ha sido considerado una de las leguminosas de mayor importancia, debido principalmente a su adaptación a diferentes tipos de suelo y condiciones climáticas (Sangronis et al., 2006; Schoonhoven y Voysest, 1991), sin embargo, el cultivo tiene su origen en el Nuevo Mundo, específicamente en México, América Central y el área del norte de América del Sur (Kaplan, 1996; Singh, 2001). Las especies del frijol común, pertenecen a la familia Leguminoseae, tribu Phaseoleae, subfamilia Papilionoideae. Existe evidencia de que el frijol común, es un cultivo altamente polimórfico que incluye cerca de 150 a 200 especies, con aproximadamente 14 000 variedades. El género Phaseolus incluye 50 especies de las zonas cálidas y templadas del Nuevo Mundo, principalmente en las regiones montañosas de México (Delgado-Salinas, 1985; Delgado-Salinas, 2001); sin embargo, entre las especies más cultivadas se encuentran P. vulgaris, P. acutifolius, P. coccineus, y P. polyanthus y P. lunatus (Delgado-Salinas 1985). Composición Química Proteína. Los frijoles contienen un alto contenido de proteína (20 -30%) (Quintana et al., 2000; Rehman et al., 2001). Generalmente, se ha encontrado una mayor proporción de globulinas (54/79%), mientras que las albuminas se encuentran en menor cantidad. La principal globlulina de frijol es la fracción 7S, la cual representa 40-50% del nitrógeno total en la semilla; mientras que la fracción 11S únicamente el 10% % (Derbyshire et al., 1976; Ma y Bliss, 1978). De acuerdo a estudios realizado por Osborne (1988), la proporción de albuminasglobulinas depende del tipo y variedad de frijol. Por otra parte, se ha relacionado a la faseolina como la responsable de características de calidad en semillas de frijol (Gepts y Bliss, 1984; Ma y Bliss, 1978); sin embargo, es importante mencionar que la proteína de frijol se considera deficiente en los aminoácidos azufrados, metionina, cisteína, valina, triptófano y treonina; en comparación con la proteína de referencia (FAO, 2007). 6 UNIVERSIDAD DE SONORA DIVISIÓN DE CIENCIAS BIOLÓGICAS Y DE LA SALUD Formato para la Presentación de Proyectos Internos . ANTECEDENTES (Continuación) Carbohidratos. Son los componentes mayoritarios presentes en la leguminosa, encontrándose en cantidades desde 47.7 a 71.0 % (Elias et al., 1976). Se ha reportado que la mayor parte corresponde a carbohidratos complejos, almidón y fibra dietética; mientras que los azúcares (mono, di y oligosacáridos) representan una menor cantidad (Serrano y Goni, 2004). Se encuentran también componentes hidrocarbonados no glicémicos, como almidón resistente, polisacáridos de la fracción de fibra dietética (Serrano y Goni, 2004) y oligosacáridos no digestibles (verbascosa, rafinosa y estaquiosa) (Kigel, 1999). Importancia del Frijol en la Alimentación El frijol común (Phaseolus vulgaris L.) denominado comúnmente como judías, cariotas, alubias, frijoles, entre otros, es considerado una de las leguminosas más ampliamente cultivadas en el mundo, ocupando más de 27 millones de hectáreas de la tierra agrícola tropical y templada en América, Europa, Africa y Asia (FAO, 2007). En Latinoamérica, el frijol común, (P. vulgaris) forma parte de los hábitos alimenticios de diversas poblaciones, debido principalmente a su costo relativamente bajo, aceptabilidad y a su alto contenido de proteína (20 -30%) (Messina, 1999; Quintana et al., 2000; Rehman et al., 2001) razón por la que se ha denominado la carne de los pobres (Deshpande and Damodaran, 1989; Messina, 1999; León et al., 1989). El frijol común Phaseolus vulgaris, representa una importante fuente de proteína y carbohidratos complejos (Bressani, 2002; Lajolo y Genovese, 2002; Rehman et al., 2001) cuya calidad, puede compararse con la proteina de origen animal, si se combina en proporciones adecuadas con cereales (Bressani, 2002). 7 UNIVERSIDAD DE SONORA DIVISIÓN DE CIENCIAS BIOLÓGICAS Y DE LA SALUD Formato para la Presentación de Proyectos Internos . METODOLOGIA Descripción de la Muestra Muestras de Frijol Se analizarán cuatro nuevas variedades de frijol (Phaseolus vulgaris L.) Flor de Mayo, Pinto, Pinto Durango y Negro San Luis, provenientes de INIFAP, Campo Experimental Durango cosechadas durante el ciclo 2008-2009. Se utilizára una variedad de referencia correspondiente a la variedad comercial Bill zeta. Las determinaciones se llevarán a cabo en el Laboratorio de Bioquímica y Experimentación Animal (Bioterio) del Departamento de Investigación y Posgrado en Alimentos (DIPA) de la Universidad de Sonora. La cuantificación de aminoácidos se realizará en el Centro de Investigación en Alimentación y Desarrollo (CIAD), A. C. Preparación de la Harina de Frijol Las muestras de frijol se limpiarán de forma manual con el propósito de eliminar el material extraño y se almacenarán en bolsas de plástico a temperatura de refrigeración para su posterior estudio. Cada una de las variedades se someterán a un tratamiento de remojo en relación grano-agua (1:5) a temperatura ambiente (25°C), hasta obtener un 100 % de absorción de agua, el cual se determinará por diferencia de peso del grano húmedo y el grano seco; siguiendo la metodología sugerida por Barrón, 1984; esto con el objetivo de establecer el tiempo óptimo de remojo para cada una de las variedades. Los análisis se harán por triplicado. Cocimiento. Las muestras de frijol previamente remojadas al 100% de absorción de agua, serán sometidas a un proceso de cocimiento de ebullición, con una relación grano hidratado: agua de 1:10, probándose varios tiempos de cocimiento, por triplicado. Dureza o textura objetiva Las variedades de frijol estudiadas, una vez hidratadas a su 100% de absorción de agua, serán sometidas a varios tiempos de cocimiento. En cada tiempo de cocimiento, se evaluará la textura de los granos de frijol cocido empleando una celda de extrusión por alambres (CEA), adaptada a un texturómetro Instron universal, Md. 4465, de donde se obtiene la dureza como fuerza máxima (KgF) al 80% del recorrido de la carta, necesaria para comprimir, compactar y extrudir una muestra de 25 kg de frijol cocido. Dicha evaluación será realizada por triplicado, siguiendo las recomendaciones de condiciones operacionales de la celda de acuerdo a Anduaga et al., 2002. Las muestras hidratadas recibirán un cocimiento a temperatura de ebullición y se someterán a un proceso de secado en un secador tipo túnel con circulación de aire a contracorriente y temperatura de 55±5°C por un periodo de seis horas. Posteriormente, se efectuará la molienda de las muestras de frijol cocido en un molino Experimental (Laboratory Mill, modelo 3100) obteniéndose un tamaño de partícula de 60 mesh. Después, las muestras de harina de frijol serán empacadas en bolsas de polietileno y almacenadas a temperatura de refrigeración (<5°C) hasta su posterior análisis. Composición Química Las muestras de frijol crudo molidas y muestras de frijol cocido se les realizará las determinaciones químicas de acuerdo a los métodos oficiales de A.A.C.C., (2000); contenido de humedad (44-40), contenido de cenizas (08-03), contenido de proteína (46-13) por el método de Kjeldahl, utilizando como factor de conversión de nitrógeno a proteína (6.25). 8 UNIVERSIDAD DE SONORA DIVISIÓN DE CIENCIAS BIOLÓGICAS Y DE LA SALUD Formato para la Presentación de Proyectos Internos . METODOLOGIA (Continuación) Elaboración de Dietas Para la realización de los bioensayos de calidad proteica se elaborarán dietas de acuerdo de acuerdo al método oficial de A.O.A.C. (1990). Las dietas experimentales se elaborarán en función del contenido de nitrógeno de las muestras de frijol cocido realizándose los ajustes para la obtención de 10% de proteína final en las dietas. Además, se preparará una dieta libre de nitrógeno y a base de caseína (control) A.O.A.C. (1990). Análisis Químico de las Dietas Para confirmar el contenido proteína final en las dietas, se llevará a cabo el análisis de las dietas en su contenido de humedad (44-40) y proteína (46-13) según los métodos propuestos por A. A. C. C. (2000). Bioensayos de Calidad Proteica Las determinaciones de digestibilidad se utilizan como indicador de calidad de proteína y representa la proporción de proteína digerida y absorbida por el animal de experimentación. Animal de experimentación Se utilizarán ratas Sprague Dawley recién destetadas con un peso de 45-65 gramos, las cuales se mantendrán a temperatura aproximada de 25 °C y ciclos de 12 horas de luzoscuridad. Se formaron grupos para cada una de las dietas experimentales de cuatro ratas para cada dieta (dos hembras y dos machos) con una variación en peso no mayor de ±1.0 g entre grupos. Condiciones de Bioensayo Los animales serán colocados en jaulas de acero inoxidable individuales y se les proporcionará agua y alimento ad libitum durante el periodo de experimentación. Posteriormente, se someterán a un proceso de adaptación durante dos días a la dieta y jaula. Se registrará el peso de los animales, alimento consumido y recolección de heces cada tercer día por un periodo de 14 días. Las heces colectadas se pesarán y se secarán en una estufa de convección (50-55 °C) durante 12 horas. Después, se molerán y se les determinará el contenido de proteína (Factor 6.25). La información obtenida se utilizará para determinar los indicadores de calidad proteica, digestibilidad de materia seca, digestibilidad aparente de nitrógeno y digestibilidad verdadera de nitrógeno. 9 UNIVERSIDAD DE SONORA DIVISIÓN DE CIENCIAS BIOLÓGICAS Y DE LA SALUD Formato para la Presentación de Proyectos Internos . METODOLOGIA (Continuación) Indicadores de Calidad Proteica Digestibilidad de Materia Seca (DMS) La digestibilidad de la materia seca se obtiene de la relación del alimento total consumido menos el peso de las heces excretadas con respecto al alimento total consumido. El cálculo de este indicador se realiza mediante la ecuación propuesta por Church y Pond, 1974: DMS(%)= Alimento consumido (g) – Heces excretadas (g) X 100 Alimento consumido (g) Digestibilidad Aparente de Nitrógeno (DAN) Se obtiene de la determinación del nitrógeno del alimento menos el nitrógeno de heces con respecto al nitrógeno del alimento expresado en porcentaje. La técnica asume que del total de nitrógeno de la dieta, lo que no se aprovecha por el organismo queda en las heces. Para evaluar la digestibilidad aparente se requiere calcular el contenido de nitrógeno del alimento; el alimento consumido, el nitrógeno en heces y el peso total de las heces (Pellet, 1978). Por lo que el cálculo de digestibilidad aparente de nitrógeno se expresa de acuerdo a la ecuación: DAN(%)= Nitrógeno consumido (g) – Nitrógeno en heces (g) X 100 Nitrógeno consumido (g) Digestibilidad Verdadera de Nitrógeno (DVN) Este indicador considera que no todo el nitrógeno presente en heces proviene de la dieta, sino que parte es proveniente de la microflora (bacterias) del tracto digestivo y demás enzimas usadas en las diferentes funciones metabólicas del organismo, se utiliza un grupo con dieta libre de nitrógeno para el cálculo de digestibilidad verdadera de nitrógeno (Pellet, 1978). El porcentaje de digestibilidad se calcula mediante la siguiente ecuación: DVN(%)= Nitrógeno consumido (g) GP – (Nitrogéno fecal (g) GP- Nitrógeno (g) GLN)X100 Nitrógeno consumido (g) Razón Neta de Proteína (NPR) El método de razón neta de proteína (NPR) se fundamenta en que existe una relación lineal para el incremento de peso del animal en función de la ingesta de nitrógeno, desde un punto de dosificación nula hasta un punto donde el incremento en peso empieza a decaer. Se requiere el uso de un grupo de animales en experimentación con dieta libre de nitrógeno para la corrección de incremento en peso debido a que no toda la proteína que se consume se destina a crecimiento, sino que parte de ella se va a mantenimiento del balance cero (Bender y Doell, 1975). La razón neta de proteína se determina a través de la ecuación: NPR= Ganancia en peso(g)+ Pérdida en peso del grupo libre de nitrógeno (g) Proteína consumida (g) 10 UNIVERSIDAD DE SONORA DIVISIÓN DE CIENCIAS BIOLÓGICAS Y DE LA SALUD Formato para la Presentación de Proyectos Internos . METODOLOGIA (Continuación) Análisis de Aminoácidos Totales por Cromatografía Líquida de Alta Resolución Preparación de la Muestra Se utilizará el procedimiento de cuantificación de aminoácidos propuesto por Vazquez et al. 1997, con ligeras modificaciones. A tres mg de muestra se adicionará 3 ml de HCl 6 M y tioglicolato de sodio en una relación (1:1). Después, se hace una hidrólisis durante 6 horas a 150°C y se secarán en un evaporador. Las muestras hidrolizadas se disolverán en un buffer de citratos 0.5 M y se colocarán en tubos Eppendorf. Posteriormente, la muestra se filtrará para su posterior análisis mediante cromatografía líquida de alta resolución. Se utilizará como compuesto derivatizador O-phtaldialdehido (OPA) el cual consiste en 10 mg de OPA + 250 l de soln. Brij35 + 25 l B-mercaptoetanol aforado a 10 ml con buffer de borato de potasio durante dos minutos a temperatura ambiente. Columna Se utilizará una columna en fase reversa C18 octa-decil dimetilsilano (10 cm x 4.6 mm ID) con un tamaño de 300 x 7.8 mm y un tamaño de partícula de 3m (Varian). Equipo La cuantificación de aminoácidos será determinada en un cromatógrafo líquido de alta resolución (HPLC) Hewlett Packard Modelo GmbH (Hewlett Packard Co. Waldbrom, Germany), conectado a una bomba (modelo), equipada con un automuestreador y un detector de fluorescencia (Variant fluorichrom). Fase Móvil Para la separación cromatográfica se utilizará un gradiente de flujo de 1.0 ml/min de dos eluyentes (A: metanol al 100% y B: metanol al 10% en buffer de acetato pH 7.23). Para la cuantificación de amino ácidos se realizará la integración del área producida por fluorescencia, mediante el programa CHEM Station (Agilent Technologies Inc. USA). Los aminoácidos se identificarán y se cuantificarán de acuerdo al tiempo de retención y área comparadas con un estándar de aminoácidos. Las determinaciones se realizarán por duplicado. % Digestibilidad In-vitro La técnica propuesta por Satterlee y col. 1982, con las modificaciones sugeridas por Barrón, 1984 será utilizada. La técnica se hará por duplicado en las muestras de frijol cocido y se utilizará caseinato de sodio como proteina de referencia. PDCAAS Esta tecnica indicadora de calidad proteica será analizada utilizando el % de digestibilidad invitro por el método multienzimático (Satterlee y col. , 1982) y el amino ácido limitante determinado por coromatografía de HPLC (Schaafsma, 2005). 11 UNIVERSIDAD DE SONORA DIVISIÓN DE CIENCIAS BIOLÓGICAS Y DE LA SALUD Formato para la Presentación de Proyectos Internos . BIBLIOGRAFIA AAAC. 2000. Approved Methods for Analysis. American Association of Cereal Chemistry. St. Paul Minnesota, USA. Anduaga-Cota, R., Cota-Gastélum, A. G., Falcón-Villa, M.R., Yañez-Farías, G. A. y BarrónHoyos, J. M. 2002. Medición de dureza en frijol cocido con una celda de extrusión por alambres: Propuesta de una celda menor. IV Congreso del Noroeste en Ciencias Alimentarias y Biotecnología.13-16 de noviembre de 2002. Hermosillo, Sonora. AOAC. 1990. Official Methods of Analysis. 14 th. Ed. Association of Official Analytical Chemists. Washington, D. C. Barrón, H. J. M. 1984. Textural, Nutritional and Toxicological Qualities of Pinto Bean Phaseolus vulgaris (UI-III). Ph.D. Thesis. Queen Elizabeth Collage. University of London, London, UK. Belitz, H. D. 1978. Vegetable proteins as human food. FEBS 11th Meeting Copenhage. Vol. 44. Symposium A3, Pergamon Press. Oxford–New York. Bressani, R. 2002. 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Es una estudiante del Programa de Maestría en Ciencias del DIPA. PRODUCTOS ESPERADOS Difundir los resultados mediante la presentación de un trabajo en congreso internacional, en el Annual Meeting of the American Association of Cereal Chemists (AACC) durante 2010. Presentación de un examen de grado de maestría y un documento de tesis de maestría de la alumna Leslie Denise Cháidez Laguna, durante 2010. Elaboración de un informe técnico final sobre el proyecto. Elaboración de un artículo para su publicación en un journal de circulación nacional o internacional. 14 UNIVERSIDAD DE SONORA DIVISIÓN DE CIENCIAS BIOLÓGICAS Y DE LA SALUD Formato para la Presentación de Proyectos Internos . CALENDARIZACION (Periodo y Actividades) Meses 2010 No. E F M A M J J A SO N D Revisión en diversas fuentes bibliográficas X X X X X X X X XX X X Recopilación de la información necesaria X X X X X X X X XX X X Presentación de propuesta de tesis X Adquisición y preparación de muestras X X X Descripción de Actividades Elaboración de harinas de frijol X X X X Realización de análisis químico proximal X X Preparación de dietas X Análisis de digestibilidad in vitro X X Análisis de digestibilidad in vivo X X Elaboración de reporte parcial Determinación de aminoácidos X Realización de PDCAAS, DC-PER, C-PER Presentación de trabajo en X X congreso (Octubre) Análisis de resultados y discusión X X Presentación de seminario de avances Presentación de examen de X grado Elaboración de Informe Final (Diciembre) Elaboración de Artículo para publicación (Diciembre). Fecha de inicio: Enero de 2010. Fecha de terminación: Diciembre, 2010. 15 X XX X X