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BIOLOGÍA EN AGRONOMÍA Volumen 2, No. 2 Octubre de 2012 ISSN 1853-5216 ESTUDIO DE LA VARIABILIDAD GENÉTICA DE PLANTAS NATIVAS EN EL DISTRITO CHAQUEÑO ÁRIDO DE LA PROVINCIA DE CATAMARCA Stella Clérici1, Claudia Torchán1, Gabriela Di Barbaro2 y Sebastián Torchán1 1. Cátedra de Genética. 2. Cátedra de Microbiología Agrícola. Departamento de Biología. Facultad de Ciencia Agrarias. Universidad Nacional de Catamarca. Avda. Belgrano y Mtro. Quiroga. C.P.4700. Catamarca. Argentina. E-mail: stellaclerici44@hotmail.com Recibido: 25/09/2012 Aceptado: 17/10/2012 ______________________________________ RESUMEN Las plantas nativas son recursos naturales que constituyen un gran reservorio y patrimonio genético. Por ello hay que garantizar un estudio adecuado de las mismas, preliminar a su utilización, condición fundamental para asegurar la perpetuidad y sustentabilidad. En la provincia de Catamarca, con su diversidad de ecosistemas, se encuentra una gran variabilidad de especies nativas, herbáceas o leñosas, en donde el avance permanente de la actividad agrícola y minera fundamentalmente, van disminuyendo los territorios donde se encuentran, lo que va en desmedro de estas poblaciones naturales ricas en variabilidad genética, con la consiguiente pérdida de los recursos fitogenéticos. A través de este proyecto, por medio de los estudios citogenéticos, morfológicos y moleculares se pretende lograr identificar, evaluar y caracterizar la variabilidad genética de plantas nativas perteneciente al distrito Chaqueño Árido de la Provincia Fitogeográfica del Chaco en la provincia de Catamarca. Las especies en estudio, en una primera etapa, fueron: Justicia xylosteoides, Cordobia argentea, Jatropha excisa, Galactea texana var. texana y Nicotiana glauca, que se caracterizan principalmente por sus potencialidades agronómicas, industriales, medicinales, ornamentales, entre otras. Universidad Nacional de Catamarca Secretaría de Ciencia y Tecnología ‐ Editorial Científica Universitaria ISSN: 1853-5216 Clérici et al. BIOLOGÍA EN AGRONOMÍA 2 (2) :26-41. 2012 PALABRAS CLAVES: Justicia xylosteoides; Cordobia argéntea; Jatropha excisa; Galactea texana var. texana; Nicotiana glauca. STUDY OF THE GENETIC VARIABILITY OF NATIVE PLANTS IN THE ARID CHACO DISTRICT OF THE PROVINCE OF CATAMARCA. SUMMARY Native plants are natural resources that constitute a large reservoir and genetic heritage. We must therefore ensure their proper study, preliminary to their use, an essential condition to ensure the perpetuity and sustainability. In the province of Catamarca, with its diversity of ecosystems, there is a large variability of native species, herbaceous or woody, where the permanent advance of agriculture and mining primarily are decreasing the territories where they are, what's going on expense of these rich natural populations genetic variability, with consequent loss of plant genetic resources. Through this project, through cytogenetics, morphological and molecular aims to achieve identify, evaluate and characterize the genetic variability of native plants belonging to the district of the Province Chaco Arid Chaco phytogeographical province of Catamarca. The species under study, in a first stage, were: Justicia xylosteoides, Cordobia argentea, Jatropha excisa, Galactea texana var. texana and Nicotiana glauca, which are mainly characterized by their potential agronomic, industrial, medicinal, ornamental, among others. KEY WORDS: Justicia xylosteoides; Cordobia argéntea; Jatropha excisa; Galactea texana var. texana; Nicotiana glauca. ______________________________________ INTRODUCCIÓN La República Argentina es un país privilegiado por la diversidad de su biogeografía y sus ecosistemas permiten una amplia y variada riqueza de recursos vegetales. El Gran Chaco Árido ocupa una gran parte del territorio Argentino que posee características ambientales, productivas, económicas, sociales y culturales, que reclaman necesarias soluciones frente a problemáticas comunes que están 27 Clérici et al. BIOLOGÍA EN AGRONOMÍA 2 (2) :26-41. 2012 produciendo la degradación de los recursos naturales productivos. La región del Chaco Árido es la porción más austral del Chaco Argentino, presenta un clima subtropical seco con precipitaciones medias anuales entre 300 y 500 mm con un régimen marcadamente estival concentrándose el 70 % de las lluvias en los cuatro meses más cálidos (Karlin et al., 1992). Históricamente en esta región, el uso de su territorio y de sus recursos naturales han conducido a procesos de deterioro ambiental generando la disminución de las posibilidades productivas de los sistemas y la pérdida de opciones ante las futuras generaciones (Jager, 2007). Los recursos de las zonas áridas están siendo cada vez más sobre explotados ya sea por necesidades económicas o por falta de información para su uso adecuado. Las extracciones desordenadas y repetidas de las especies han originado el empobrecimiento de los ecosistemas naturales y han ocasionado que los mismos vayan perdiendo su potencial de recuperación a corto plazo (López, 1988). Las especies nativas (autóctonas o indígenas): son aquellas que crecen en el área biogeográfica de donde son originarias. Son estas que durante miles de años fueron adaptándose a las condiciones químicas (salobridad, acidez, alcalinidad) del suelo, como así también a las condiciones físicas (temperatura, vientos, regímenes de lluvia) de una determinada región geográfica, considerándose así como indígenas las plantas propias de las zonas de origen, independientemente de los límites políticos de provincias y países. La biodiversidad se ve afectada por el creciente aprovechamiento de campos para cultivos tradicionales y por la expoliación de vegetaciones naturales por un manejo irracional. Entonces es necesario en primera instancia conocer el patrimonio en especies autóctonas de interés farmacológico, genético o industrial fundamentalmente y en consecuencia su preservación, su aprovechamiento debe ser racional y conservativo, lejos de la expoliación irracional debe planificarse su aprovechamiento en condiciones no de predación sino de favorecimiento de su desarrollo, con normas concretas de buenas prácticas de manufactura (Elechosa, 2012). El objetivo del presente trabajo es estimar la variabilidad genética mediante los estudios citogenéticos, morfológicos y moleculares de plantas nativas perteneciente al distrito Chaqueño Árido de la Provincia Fitogeográfica del Chaco en la provincia de Catamarca. Las especies en estudio, para una primera etapa de proyecto, fueron Justicia xylosteoides, Cordobia argentea, Jatropha excisa, Galactea texana var. texana y Nicotiana glauca, que se caracterizan principalmente por su importancia agronómica, industrial, medicinal, ornamental, entre otras, dentro del universo de la 28 Clérici et al. BIOLOGÍA EN AGRONOMÍA 2 (2) :26-41. 2012 vegetación nativa. Los resultados de este trabajo permitirán identificar las especies dentro del área de estudio y procurar el material necesario para los estudios citogenéticos posteriores. MATERIAL Y MÉTODO Se realizaron las siguientes actividades: 1º: Revisión bibliográfica de las especies nativas Justicia xylosteoides, Cordobia argentea, Jatropha excisa, Galactea texana var. texana y Nicotiana glauca. 2º: Recolección del material genético in situ, en función del ciclo biológico de cada uno de los géneros en estudio. 3º: Acondicionamiento de las muestras para realizar los estudios citogenéticos, herborización del material vegetal. 1º: Revisión bibliográfica: Se realizó la revisión crítica de numerosos artículos de investigación, de revistas científicas y de libros de actas de distintas reuniones científicas. 2º- Recolección del material genético. La recolección del material genético se lo realizó en 3 etapas: 1º Etapa: Se llevó a cabo en el mes de Marzo, en un campo de 110 ha, de estrato arbóreo abierto, muy explotado, intersectado entre el arroyo Tiorco y el Río Angolí (28º 29’ 42,1” LS; 65º 48’ 38” LO; 566 msnm), ambiente que se encuentra dentro de la Región Fitogeográfica Chaqueña, Distrito Chaco Árido, del Valle Central de Catamarca. Se recolectaron 5 especies: Justicia xylosteoides, Cordobia argéntea, Jatropha excisa, Galactea texana var. texana y Nicotiana glauca. 2º Etapa: Se realizó en el mes de Abril en un sitio cerrado con alambrado perimetral lo que permitió la conservación de la vegetación, ubicado en las coordenadas 29º 27’ 41,3” LS; 67º 47’ 53” LO; 584 msnm), correspondiendo a la Región Fitogeográfica Chaqueña, Distrito Chaco Árido. Las especies recolectadas fueron: Galactea texana var. texana y Nicotiana glauca. 29 Clérici et al. BIOLOGÍA EN AGRONOMÍA 2 (2) :26-41. 2012 Recolección de muestras IMAGEN 1: Puntos de recolección de muestras. (Fuente: (Fuente: Google Earth). Earth) Para la recolección se consideró el estado ado fisiológico de las plantas, preferentemente rentemente inicio de floración. Posteriormente se realizó la identificación y acondicionamiento del material en laboratorio. FOTO 1: Vista general del sitio de muestreo. (Gentileza: Cátedra de Ecología Agraria, FCA-UNCa.) 3º: Acondicionamiento de las muestras: 3.1. Acondicionamiento de las muestras para estudios citogenéticos: Para el estudio de la meiosis y viabilidad del grano de polen, se colocaron en frascos con alcohol etílico y ácido acético en una proporción 3:1, primordios primor florales, 30 Clérici et al. BIOLOGÍA EN AGRONOMÍA 2 (2) :26-41. 2012 pimpollos y flores abierta, se etiquetaron con la identificación correspondiente y se llevaron a refrigeración (0 ± 3 º C), hasta el momento m de su análisis. FOTOS 2 y 3: Acondicionamiento de flores de Nicotiana glauca para estudios citogenéticos. FOTOS 4 y 5: Acondicionamiento de flores de Jatropha excisa para estudios citogenéticos. FOTOS 6 y 7: Acondicionamiento de flores de Galactea texana var. texana para estudios citogenéticos. 31 Clérici et al. BIOLOGÍA EN AGRONOMÍA 2 (2) :26-41. 2012 FOTO 8: Muestras en ácido acético y alcohol (1:3). 3.2. Herborización: Se herborizaron vástagos, flores y frutos de las especies recolectadas. FOTOS 9, 10, 11, 12 y 13: Material herborizado. 32 Clérici et al. BIOLOGÍA EN AGRONOMÍA 2 (2) :26-41. 2012 RESULTADOS Y DISCUSIÓN 1º- Revisión Bibliográfica: 1.1. Justicia xylosteoides, especie xerófila que pertenece al orden Lamiales, familia Acanthaceae;; en nuestro país se encuentra distribuida en la Provincia Fitogeográfica del Chaco de las provincias de Catamarca, Córdoba, La Rioja, Salta, Santiago del Estero y Tucumán, entre los 0 y 2.300 msnm. Arbustiva de 1-2m m altura, perenne, con ramas erectas, tetrasulcadas en su juventud, generalmente glabras; ramitas laterales con entrenudos cortos en la base, alargados superiormente. Hojas subsésiles o muy cortamente pecioladas, con lámina angostamente te elíptica, ovada, obovada u oblonga glabra o muy levemente pubérula, glanduloso punteada, obtusa a redondeada en el ápice, cuneada en la base. Espigas sésiles, densas, terminales o axilares, con las brácteas lanceoladas, de 2 a 6cm longitud, opuestas y decusadas, decusadas, a veces alternas por desplazamiento y concaulescencia, siempre una fértil y la otra estéril en cada par, las fértiles mayores, de 1 a 2cm cm longitud, las estériles menores, el raquis arqueado; bractéolas de 2 a 3mm longitud, escabroso-pubérula. pubérula. Cáliz Cál de 3 a 4mm mm longitud, con los 5 segmentos ovados, agudos, glabros. Corola roja, de 3 a 4,5cm longitud, con tubo de 2 a 2,5cm longitud y labios de 1,3 a 1,8cm longitud, el posterior apenas bidentado, el anterior profundamente trilobado. Estambres con filamentos fila de 1,3 a 1,7cm cm longitud y anteras con las tecas a distinta altura, la inferior oblicua y apediculada apediculada en la base. Cápsula de 1,3cm longitud por 0,5cm cm diámetro, sólida y lateralmente estrechada en la base, superiormente inflada y tetraseminada. tetraseminada Semillas suborbiculares, borbiculares, aplanadas, de 3-4mm 3 diámetro, pardas y tuberculado-rugosas. tuberculado Recurso ecurso forrajero de emergencia para el ganado ganado en épocas críticas. críticas Se encuentra en lugares de difícil acceso o protegidas entre arbustos espinosos. xylosteoides FOTOS 14 y 15: Justicia xylosteoides. 33 Clérici et al. BIOLOGÍA EN AGRONOMÍA 2 (2) :26-41. 2012 1.2. Cordobia argéntea, argéntea pertenece al orden Malpighiales, familia Malpighiaceae; se encuentra distribuida en la Provincia Fitogeográfica del Chaco de las provincias de Catamarca, Córdoba, La Rioja, Salta, Santiago del Estero y San Luis. De acuerdo a sus antecedentes genéticos, en en esta familia, el número gamético más bajo conocido es n=6, y que bien puede ser el número ancestral, ya que se produce en tres géneros, tales como, Tempazcolole, Lophanthera, y Verrucularia, Verrucularia cerca de la base del árbol filogenético (Davis et al., 2.002 [pdf]). La mayoría de los números en la familia son n=10 o n=12 o múltiplos de esos números, o números que son presumiblemente sumiblemente derivados aneuploides de los números, por ejemplo, n=8 en Ectopopterys, n = 9 en Cordobia, Cordobia y n = 17 en Camarea (Anderson, 1993). 1993 Es una especie arbustiva, trepadora, serícea cuando joven. Hojas lineares o angostamente ovadas, con glándulas en la cara inferior. Sépalos glandulosos. Pétalos amarillos y desiguales. Mericarpios con ala dorsal bien desarrollada y pequeñas alas en el borde superior de la porción seminífera. Esta especie hace una importante contribución a la calidad de la dieta de bovinos en diciembre y marzo (Ferrando ( et al., ?). FOTO 16: Cordobia argéntea. argéntea (Gentileza: Cátedra de Ecología Agraria, FCA-UNCa.). FCA 1.3. Jatropha excisa pertenece a la familia de las Euforbiáceas, Euforbiáceas subfamilia Crotonoideae, tribu jatropheae (Alvez, 2008; Souza y Lorenzi, 2008); se encuentra distribuida en el noroeste argentino de la Provincia Fitogeografica del Chaco, Distrito Árido Chaqueño de Catamarca, en donde actualmente crece en los piedemontes del Valle Central. La caracterización citogenética del genero Jatropha ha demostrado que posee un numero básico X=11 posee variaciones entre especies e híbridos. La mayoría de 34 Clérici et al. BIOLOGÍA EN AGRONOMÍA 2 (2) :26-41. 2012 las especies presentan 2n=2x=22 cromosomas, cr incluyendo J.curcas L. L (Federov, 1969; Soontornchainaksaeng y Jenjittikul de 2003; Carvalho et al, 2008; IPCN, 2009; Dahmer et al., 2009). Las especies J. cuneata Wiggins & Rollins, J. dioica Sesse y muchas poblaciones de J. heterophylla Heyne son tetraploides (2n=4x=44) y J. tirucalli L. tiene 2n=20 cromosomas (IPCN, 2009; Federov, 1969). Además de los híbridos artificiales triploides (2n= 3x = 33) obtenidos de cruzamientos de J. curcas x J. cathartica Teran & Berlan e J. curcas x J. podagrica (Hook Hook indica Dehgan; 1984). Se caracterizan por su rusticidad, siendo poco susceptibles a plagas y enfermedades; son plantas herbáceas, de porte arbustivo, comúnmente con látex; hojas alternas, simples y 5-partidas. 5 partidas. Las inflorescencias son apicales, presentan pre flores hermafroditas y estaminadas, de color morado. El caudex es leñoso-suculento, leñoso con función de acumulación de reservas (Dehgan y Webster, Webster 1979). La semilla tiene forma oblonga y posee una testa dura y variegada, con una coloración desde castaño ño rojiza a pardo oscura.. El fruto es un esquizocarpo de dehiscencia explosiva, está formado por tres carpelos, cada uno conteniendo una semilla. En la Familia Euphorbiaceae, Euphorbiaceae, el eleosoma se forma en la región micropilar del tegumento externo del ovulo, donde constituye la llamada carúncula. En esta especie la carúncula es carnosa, de color blanquecino, y se encuentra firmemente unida al cuerpo de la semilla. Las plantas adultas alcanzan una altura de hasta 1.5m, y de diámetro o de su canopia es de hasta 1.5m. 1.5 En cuanto a sus aptitudes agrícolas, se la puede emplear como abono orgánico por su importante contenido en nitrógeno (Perry, 1980), posee un posible uso para biodiesel por su alto contenido en aceites, aplicaciones como leve insecticida y un posible uso como melífera y ornamental; se estima que no posee aptitudes ganaderas porque sus hojas no son consumidas por el ganado vacuno y por el uso popular de sus semillas como purgante (Quiroga, A; comunicación personal). excisa FOTO 17 y 18: Jatropha excisa. 35 Clérici et al. BIOLOGÍA EN AGRONOMÍA 2 (2) :26-41. 2012 1.4. Galactea texana var. texana, texana pertenece al orden Fabales, Fabales familia Fabaceae; se encuentra distribuida en el noroeste de nuestro país, llegando hasta San Luis (Dpto.. Valle Fértil) y Córdoba (Gómez-Sosa, ?), ), pertenece a la Provincia Fitogeografica del Chaco, Distrito Árido Chaqueño. Según sus antecedentes genéticos, esta especie posee un número cromosómico 2n=20, fórmula cariotípica 16m+4m–sm, 16m+4m sm, tamaño cromosómico ATC: 38,73±5,84 ab – LTC: 34,07±7,36 a – rango de longitud: 1,34±0,27 a – 2,45±0,65 a e índices de asimetría 0,26±0,04 abc – 0,19±0,04 (Sede, 2005). FOTO 19: Metafase mitótica de Galactea-camptosema-collaea. Galactea (Fuente: Fuente: Sede, 2005). 2 Es una planta perenne, forma matas hasta 70cm de altura hacia el ápice, tenues y volubles, de follaje verde ceniciento, seríceo en partes jóvenes; sus raíces son axonomorfa, únicas y leñosa; posee po hojas con peciolo de 7 a 11mm mm de longitud, foliolos laterales de 1,9 ,9 a 5cm 5cm longitud, el apical es de mayor tamaño, siempre acuminados, algo recurvos; presenta presenta racimos con pedúnculo de 2,5mm 2,5 longitud, pedicelo de 3 a 3,5mm mm longitud, longit con 2 a 3 flores de 1 a 1,5cm cm longitud; cáliz con dientes de 3 veces mayor que el tubo; ovario ov seríceo-pubescente, pubescente, sésil, con un pequeño disco basal-anular. anular. Legumbres densamente pubescentes, relación largolargo ancho 1:10; semillas ovoides, marmoladas, dehiscencia bivalva, elástica. Florece desde noviembre a enero y fructifica desde enero a marzo (Gómez-Sosa Sosa, ?). Es una especie promisoria para sembrarse como forrajera en consociación con gramíneas. (Quiroga et al, ?). 1.5. Nicotiana glauca pertenece a la familia de las Solanaceaeceas, Solanaceaeceas género Nicotiana, (SIIT); ess una especie nativa del noroeste argentino y el sur de Bolivia, que se ha expandido en toda América y Europa, de manera invasora, en especial en 36 Clérici et al. BIOLOGÍA EN AGRONOMÍA 2 (2) :26-41. 2012 grietas de muros antiguos en las ciudades y poblados. Actualmente se lo halla en las provincias de Buenos Aires, Catamarca, Córdoba, Corrientes, Distrito Federal, Entre Ríos, Formosa, Jujuy, La Pampa, La Rioja, Mendoza, Misiones, Salta, Santiago del Estero, Santa Fe, San Luís y Tucumán. Se trata de una planta de clima templado que no resiste heladas aunque si sequías y altas temperaturas. Pareciera ser indiferente a la naturaleza mineralógica del sustrato aunque no soporta bien la salinidad en el suelo, aunque si la ambiental, por lo que puede habitar muy bien cerca del mar. La caracterización citogenética de la especie ha demostrado que posee un numero básico X=12, número cromosómico 2n=24, con un grado de ploidía diploide. Arbusto cuya altura oscila entre 1,5 y 7 metros de altura. De tallo glabro de un color verdoso o azul-púrpura, presenta hojas glaucas, cordado-ovadas, elípticas o lanceoladas, con lámina de 3 a 25cm de largo, generalmente 2 veces más larga que el peciolo, por 1 a 8cm de ancho, cuyo ápice es agudo, siendo su base obtusa. La inflorescencia es una panícula terminal, con cáliz de 5 a 15mm de largo, cilíndrico, sin pelos o escasamente pubescente, sus dientes triangulares, mucho más cortos que el tubo; corola en forma de trompeta, de 3 a 4cm de largo por 4 a 7mm de ancho, generalmente amarilla, sin pelos o escasamente pubescente, limbo casi circular, de 3 a 7mm de diámetro, verde en el botón, más tarde verdoso o amarillo; estambres subyúgales, extendiéndose casi hasta el borde superior del tubo de la corola, filamentos sin pelos, doblados inmediatamente arriba de su inserción en el tubo de la corola. El fruto es una cápsula ovoide o helicoidal de 7 a 15mm de largo, cubierta por el cáliz persistente. Semillas de color negro, lateralmente comprimidas, de aproximadamente 0.5mm de largo, café, superficie reticulada. Florece desde primavera hasta el verano, aunque en zonas templadas puede florecer todo el año. Tiene varios usos útiles, en los que se destaca en primer lugar su uso medicinal; las hojas frescas se aplican externamente en tratamiento de dolores de cabeza, cataplasmas en dolores reumáticos, heridas y úlceras, baños de asiento en hemorroides, etc. y además, contiene cantidades significativas de anabasina, que se la está investigando como posible cura para la adicción a la nicotina. No se recomienda su ingesta, por poseer componentes tóxicos (altamente tóxica para animales domésticos). También se utiliza como cultivo energético para la producción de biocombustible. 37 Clérici et al. BIOLOGÍA EN AGRONOMÍA 2 (2) :26-41. 2012 FOTO 21: Palan palán (Nicotiana Nicotiana glauca) glauca (Fuente: Carrere, 2007). El análisis de estos géneros a través de la citogenética nos brindará valiosos aportes para la resolución de problemas taxonómicos, evolutivos o aplicados. Aunque estos aportes deben ser complementados con estudios provenientes de otras áreas de investigación, trabajar en genética de eucariontes desconociendo las características y el comportamiento de sus cromosomas, lleva a errores en la interpretación de causa y efecto de muchos fenómenos (Poggio, 1996). Las características estructurales y cuantitativas del cariotipo son importantes en investigaciones taxonómicas y evolutivas. Los números cromosómicos proveen información útil respecto al número mínimo de grupos de ligamiento y cuantas veces estos se repiten. El número cromosómico puede ser muy variable entre y dentro de distintos grupos taxonómicos. Estos números son constantes en muchos géneros y aún en algunas tribus por lo tanto, cuando han sido usados en conjunto con otros datos, han provisto evidencia para el establecimiento de afinidades entre distintos taxones (Goldblatt, 1981). Como así también, el comportamiento meiótico, observado en células madres del polen, nos permitirá detectar la existencia de cambios estructurales (inversiones, translocaciones, etc.) o anormalidades en el cariotipo, ya que la presencia de configuraciones meióticas no usuales, señalan la existencia de heterocigosis para determinados rearregloss cromosómicos que afectan el normal desarrollo de la meiosis. Estos cambios pueden estar relacionados con polimorfismos o eventos especiogénicos y aislamiento reproductivo (Poggio, 1996) CONCLUSIÓN A través del desarrollo de la metodología se obtuvo el material vegetal de las especies nativas propuestas en la Región Fitogeográfica del Chaco Distrito Chaqueño. 38 Clérici et al. BIOLOGÍA EN AGRONOMÍA 2 (2) :26-41. 2012 Se pudo recolectar las distintas muestras en relación de su ciclo biológico y se acondicionaron las mismas para sus posteriores estudios citogenéticos y herborización. AGRADECIMIENTOS Se agradece al Ingeniero Agrónomo Sr. Alejandro Quiroga de la Cátedra de Ecología Agraria de la Facultad de Ciencias Agrarias de la Universidad Nacional de Catamarca, por su aporte permanente en la identificación y recolección del material de las especies nativas en estudio. BIBLIOGRAFÍA - Alves, J.M.A. et al. 2008. Pinhão-Manso: Uma Alternativa para a Produção de Biodisel na agricultura familiar da Amazônia Brasileira. Agroambiente On-line, v.2, n. 1. - Andrada, B., Boggiatto, A.J., Auad, L.G. y Collado M. 1975. Estudios citogenéticos en el hibrido intergenetico Euchlaena perennis Hitch. Por Zea mays L. I. Análisis mitótico en plantas de dos generaciones R.A.N.A 12 (3-4): 323-330. - Azevedo, H. 2006. Pinhão manso é lançado pelo presidente Lula como opção para o biodiesel – Vegetal é de fácil cultivo. Hoje em Dia. Disponível em: http:// www.biodiesel.gov.br/docs/congresso. Acesso em: 12 set. 2009. - Carrere, Ricardo. 2007. 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