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MICROPROPAGACIÓN CULTIVO IN VITRO DE EXPLANTES DE MOSTAZA Dentro de la familia Brassicaceae, antiguamente denominada Cruciferae, el género Brassica comprende un amplio grupo de especies que incluye el repollo, la berza, el nabo, la coliflor, la colza, la canola y la mostaza. Las mostazas son de gran interés económico debido a sus múltiples usos en la alimentación y en la producción de aceites y grasas vegetales. También son aprovechadas como abono verde en la fitoremediación. A fines de la década de 1980, la Universidad de Wisconsin seleccionó diversas variedades de Brassica rapa de crecimiento rápido (RCBr o Fast Plants). Estas plantas modelo se caracterizan por tener un ciclo de vida corto y requerir poco espacio, siempre que se cultiven en condiciones controladas (composición del suelo, luz, temperatura). En Estados Unidos, las semillas son comercializadas para la enseñanza y la investigación. Tuvimos acceso a esas plantas en 1992, dentro de una experiencia realizada en paralelo con otras escuelas. Nuestro objetivo era comparar el crecimiento de las Fast Plants y de las mostazas comunes. Lamentablemente, sin la posibilidad de controlar las variables ambientales y con una temperatura carioca de 40ºC, las Fast Plants murieron rápidamente. En función de dicho fracaso y de la imposibilidad de importar semillas RCBr, se tomó la decisión de desarrollar las actividades prácticas con semillas de Mostaza Lisa (Brassica juncea), vendida localmente. Estas plantas germinan en 5 a 7 días y tienen un ciclo de vida de 45 a 65 días. La altura es de 35 a 40 cm y el regado, diario. Una de las aplicaciones con mejores resultados fue el seguimiento del desarrollo de los plantines de mostaza a partir del epicótilo, configurando un tejido de órganos de fácil realización en el laboratorio de enseñanza. BIBLIOGRAFÍA SCIENCE AND PLANTS FOR SCHOOLS. Fast tissue culture with Sinapsis alba or rapid-cycling Brassica rapa. http://www.saps.org.uk/attachments/article/289/SAPS-StudentSheet2012-Fasttissueculture.pdf MALAJOVICH M.A. e MANN V.S. MALAJOVICH M.A. e MANN V.S. Micropropagación. Guía 80: El laboratorio de enseñanza Guía 101 María Antonia Malajovich / Guías de actividades Biotecnología: enseñanza y divulgación http://www.bteduc.bio.br MICROPROPAGACIÓN / CULTIVO IN VITRO DE EXPLANTES DE MOSTAZA ACTIVIDAD PRÁCTICA OBJETIVO Observar el crecimiento de explantes de mostaza. MATERIAL Semillas de mostaza, 1 placa de Petri con medio agar-agua (0,8%), 1 bisturí, 1 pinza, 1 rotulador indeleble, elementos para la germinación de semillas. PROCEDIMIENTO Germinación de las semillas Varios procedimientos se describen en la Guía 54: Cómo germinar semillas. Obtención y sembrado de los explantes 1. Cortar la parte superior de los plantines y colocar los explantes en medio con agar- agua, sin dejar que los cotiledones queden en contacto con el medio. 2. Incubar en presencia de luz y agregar agua cuando el medio se reseque y si fuera necesario, colocar un frasco alto invertido para conservar la humedad. 3. Observar semanalmente anotando el número de explantes que se desarrollan y registrar el desarrollo de las hojas y raíces, una vez que adquieren una altura de 3 mm. Guía 101 María Antonia Malajovich / Guías de actividades Biotecnología: enseñanza y divulgación http://www.bteduc.bio.br MICROPROPAGACIÓN / CULTIVO IN VITRO DE EXPLANTES DE MOSTAZA NUESTRO COMENTARIO El experimento muestra la importancia de los cotiledones que mediante su capacidad fotosintética aseguran la nutrición de la planta hasta el desarrollo de las hojas. Por otro lado, la regeneración de las raíces muestra la totipotencia de la planta. Desde el punto de vista docente, este experimento tiene la ventaja de no requerir condiciones asépticas ni medios complejos. Para el alumno, la dificultad reside en realizar un trabajo que exige concentración y minuciosidad. Las imágenes muestran el aspecto de las placas a lo largo del experimento. ¿CÓMO ARMAR UN PROYECTO? Comparar el desarrollo de las hojas y el crecimiento de las raíces en agar-agua y en un medio con agar, agua y sales minerales. Comparar el desarrollo de las hojas en agar-agua y en tierra. Realizar el experimento con otras plantas (rabanito, por ejemplo). Guía 101 María Antonia Malajovich / Guías de actividades Biotecnología: enseñanza y divulgación http://www.bteduc.bio.br