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Foro CYTED-IBEROEKA: INNOVACIONES EN QUÍMICA SOSTENIBLE
Barcelona, Noviembre de 2011
EthnoPharma S.R.L.
- Investigación, desarrollo y producción de fitofármacos –
Instituto SELADIS, UMSA
Determinación de la Actividad de la
PLA2 mediante un ensayo con micelas
inmovililizadas de Fosfatidil-colina,
para la detección rápida de inhibidores
específicos de origen natural.
Roger Carvajal Ph.D.
• La Fosfolipasa A2 (PLA2) es
una enzima de gran
importancia en múltiples
sistemas biológicos:
La PLA2 secretora cumple
papeles digestivos (veneno de
serpientes, jugo pancreático,
etc.) y de remodelación tisular.
La PLA intracelular (dependiente
de Ca++) remodela la
membrana y libera ácidos
grasos (Ac. Aroquidónico)
como mediador de la
inflamación y la señalización
celular.
Fuente: Sun et al. Nueuromol. Med. June.12(2),2010
• Su activación no regulada
es responsable de daño
tisular en diferentes
patologías:
– Enfermedad de Alzheimer
– Artritis y Artrosis
– Pancreatitis Aguda
• También es la responsable
del daño local y sistémico
en las mordeduras de
serpientes venenosas.
• Con el propósito de
neutralizar los efectos
deletéreos de la PLA2 se
han buscado intensamente
contar con inhibidores
específicos de su actividad.
• Existen diferentes
productos químicos de
síntesis y semisíntesis que
tienen esta actividad, pero
también importantes
efectos colaterales.
Genisteina
Procaina
• Lo anterior ha conducido a
buscar entre los productos
naturales (plantas, hongos,
líquenes, esponjas)
moléculas con actividad
anti-PLA2 para su posible
uso como fármaco.
• Una fuente importante está
en la flora de los bosques
tropicales en la que existen
especies que las etnias
locales utilizan con éxito
para neutralizar la
mordedura de serpientes
sin efectos colaterales
apreciables
• Sin embargo, los procedimientos
para determinar la actividad de
PLA2 en general requieren el uso de
equipos caros y de alta tecnología:
Contador de Centelleo Líquido (3H)
para sustratos radiactivos,
Espectrofo-tómetro para Detección
de Cambios de Color y Condiciones
especiales de laboratorio
• Por tanto, ninguno de los ensayos
conocidos pueden ser ejecutados en
estudios de bioprospección en las
áreas en las que viven las etnias
que proveen el conocimiento y
donde existen los recursos de la
biodiversidad.
Para identificar
extractos
vegetales con
actividad
inhibidora de PLA2
en zonas en las
que no exis-ten
equipos de
laboratorio de alta
tecnología se requieren
procedimientos
sensibles y
• La innovación que
presentamos consiste en
un procedimiento que
permite evidenciar de
manera cuantitativa la
actividad de PLA2 y sus
modificaciones a través de
la medición visual de un
halo de lisis en un gel
preparado en una caja de
Petri.
• El gel contiene el sustrato que consiste
en micelas de fosfatidil-colina
suspendidas en solución Tris- Ca Cl e
inmovilizadas en agar. La PLA2
obtenida de veneno de serpiente o de
páncreas porcino en diferentes dosis,
se mezcla con el inhibidor y se
adiciona a horadaciones en el gel para
su difusión radial. El halo de lisis
producido por la enzima al actuar
sobre las micelas que se destruyen, se
mide en mm para examinar la cinética
de inhibición.
Fuente: Gelb, et al. The FASEB Journal, Set. 1994
Fuente: Gelb, et al. The FASEB Journal, Set. 1994
Actividad Inhibitoria encontrada en algunas
Actividad Inhibitoria encontrada en algunas
Especies Vegetales examinadas
Especies Vegetales examinadas
Actividad Inhibitoria de PLA2
encontrada en algunas especies
vegetales
Especie Vegetal
Humanpteria ampla
Actividad
inhibitoria
64.0
Erytroxilum coca
124.2
Tea sinensis
2,3
Achirocline saturioides
3.5
Determinación de actividad proteolítica* de veneno de
Bothrops niewiedii en Gel de Colagena tipò II
PERSPECTIVAS
Los estudios fitoquímicos, la elucidación de la estructura, y los
mecanismos íntimos de la interacción enzima–inhibidor(incluyendo
la validación por otros métodos) están en curso, pero la empresa se
abre a propuestas para realizar estos estudios de manera conjunta.
Los estudios clínicos preliminares como fitofármaco están en curso
pero la empresa estima la posibilidad de emprendimientos
conjuntos
El desarrollo de un fármaco a partir de las moléculas encontradas,
está en la propuesta de trabajo de ETHNO PHARMA
GRACIAS
rogercarvajal@acelerate.com