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Division 3 - Germplasm Enhancement and Crop Improvement
Principal activities
Enhancing potato germplasm and crop improvement
Enhancing sweetpotato germplasm and crop improvement
Improving root and tuber crops through transgenics
Improving adaptation and variety use
Karin Cruzado Gutiérrez
IDENTIFICACIÓN DE LA PROTEÍNA RESPONSABLE
DEL SINERGISMO DEL COMPLEJO VIRAL DE CAMOTE (SPVD)
SPCSV (Sweetpotato chlorotic stunt virus)
SPVD
SPFMV (Sweetpotato feathery mottle virus)
SPFMV + SPCSV
Potyvirus
Crinivirus
Mosca blanca
Afidos
Sano
SPVD
Sano
Reducción en el rendimiento hasta 98%
SPFMV
SPCSV SPVD
Sinergismo viral en SPVD
SPCSV: RNA1 (9406 bp)
P-Pro
P-Pro
MTR
MTR
HEL
HEL
RdRp
RdRp
RNAse3
RNAe3
p7
p22
aislamientos Tug2 y Ug
(Uganda)
p7
La mayoria de aislamientos:
Mis1, Ung2, m2-47,Is
(ampliamente difundidos)
Sinergismo en SPVD: SPFMV (Potyvirus) aumenta su concentración hasta 600veces y
SPCSV (Crinivirus) , mantiene su concentración.
Objetivo
Identificar la proteína(s) responsable(s) del sinergismo del complejo viral
de camote (SPVD).
Metodologia
Transformación genética de Ipomoea batatas cv. Huachano
con Agrobacterium tumefaciens: cepa EHA105
Evaluación de las regenerantes
transgénicos : genes p22 y RNase3
del SPCSV
Prueba de resistencia
a Kanamicina
Caracterizacion Molecular
PCR - Verificación del transgen
Pruebas de infección
invernadero: SPCSV M2-47 EA
y SPFMV -Piu
Southern Blot –Verificación del transgen
Western Blot –Expresión de proteínas
Evaluación serológica:
DAS ELISA para SPFMV
Transformación Genética y Regeneración
Regeneración de líneas transgénicas
Regenerantes
Explantes Transformados
Callo embriogénico
•Auxina+Citoquinina (desorganización
de tejido)
•Citoquinina (Inducción de callos)
•Auxina (Regeneración)
Prueba de resistencia a kanamicina
Kanamicina
100ppm
Pruebas de infección
RNase3 no
infectado
No transgénica-no
infectado
RNAse3-
No transgénicainfectado con SPVD
SPFMV
NT-sano
NT
NT
RNase3
RNase3
SPFMV
SPVD
SPFMV
sano
Valores de absorbancia de SPFMV (405nm)
2.5
2
1.5
Sano
SPFMV
SPVD
1
0.5
0
p22
p22
No Transgénico
No
Transgenico
Rnase3
RNase3
CONCLUSIONES
El sinergismo viral en SPVD seria debido a la acción del gen RNase3.
El gen RNase3 estaría actuando como un potente supresor de la defensa antiviral
y por si solo es capaz de crear vulnerabilidad a SPFMV
Perspectivas
Desarrollo de estrategias en programas de mejoramiento genéticos destinados
a generar resistencia contra SPVD.
Evaluar el efecto de RNase3 en otras interacciones sinérgicas donde esta
involucrado SPCSV,
Publication: Elimination of antiviral defense by viral RNase III (2009) . PNAS: 106(24).
GRACIAS