Download Sistema ABO

Grupos sanguíneos
eritrocitarios. ABO-Rh
Dra. Virginia
Callao Molina
Webinar
GCIAMT
27/10/2016
Los glóbulos rojos
Los globulos rojos son células
especiales con una función
básica para el organismo
Tienen un metabolismo muy
complejo
En su membrana existen
moleculas que tiene distintas
funciones:
-Transporte de sustancias
-Mantenimiento de la flexibilidad
de la membrana
-Protección frente a infecciones
-Etc…
Los grupos sanguíneos
Estas moléculas son la base de los grupos sanguíneos.
Hay mas de 250 descritos con diferentes estructuras
(proteinas, lipidos, glucidos) y diferentes funciones,
muchas de ellas desconocidas .
Los grupos sanguíneos
Las estructuras de grupos sanguíneos de los hematíes transfundidos
pueden ser reconocidos como extraños por el sistema inmunitario del
receptor, convirtiéndose en ANTíGENOS:
se implica la inmunidad humoral
Cada antígeno está
definido por un anticuerpo
específico que reacciona
contra él.
Los grupos sanguíneos
Antígenos eritrocitarios
Anticuerpos eritrocitarios
-
Naturales
Irregulares
Antígenos
Anticuerpos naturales
Anticuerpos irregulares
Se denominan así los anticuerpos eritrocitarios
diferentes de los anticuerpos naturales anti-A y anti-B
Aparecen en los pacientes después
de una aloinmunización:
- Transfusión
- Gestación
- Trasplante de progenitores
Incidencia en nuestro medio: muy variable (0,2-40%)
Su estudio es importante en:
- receptores de transfusión: para evitar reacciones hemolíticas
- gestantes: evitar EHFRN
- donantes: evitar reacciones hemolíticas
Los grupos sanguíneos
La importancia de los grupos sanguíneos
en el paciente, viene determinada por el
significado clínico de los anticuerpos
correspondientes
¿Qué significa que un anticuerpo es
clínicamente significativo?
Acorta la supervivencia in vivo
de los hematíes incompatibles
transfundidos
Problemas inmunes en la
gestación
Cómo se estudian los grupos
sanguíneos en el laboratorio??
Estudio de la unión
antígeno- anticuerpo “in vitro”
Estudio del antígeno:
fenotipo eritrocitario
Estudio del anticuerpo:
estudio de acs. irregulares
HEMATIES
SUERO
Ac. completos
Ac. incompletos
Estudio de la unión
antígeno-anticuerpo “in vitro”
Estudio de la unión
antígeno-anticuerpo “in vitro”
aglutinación
Estudio de la unión
antígeno-anticuerpo “in vitro”
aglutinación
Reactivos REACTIVOS
Equipos
IHM
Automatización
Sistema
ABO
Sistema ABO
(Landsteiner, 1900)
Sistema ABO
Formado por los antígenos A y B y los anticuerpos
naturales frente a ellos
Sistema ABO
Sistema ABO: antígenos
Sistema ABO: antígenos
- Resultan de la unión de azúcares a oligosacáridos precursores
- No son el producto directo de un gen. El gen codifica una
proteína (transferasa) encargada de unir el azúcar específico
Sistema ABO: antígenos
Sistema ABO: genes
Gen ABO
Cromosoma 9, q34
Transferasa A
Cada alelo codifica
Transferasa
no funcionante
una
transferasa
Transferasa B
Cada alelo codifica una transferasa
Sistema ABO: genes y antígenos
Sistema ABO: herencia medeliana
Transmisión con herencia mendeliana.
Los alelos A y B son codominantes y el O es recesivo
Otros genes ligados con el gen ABO
Gen H
-Cromosoma 19,q13.3
-Alelos:
- H: Codifica la fucosil-transferasa 1→ Sustancia -H
- h: Amorfo (raro)
Genotipo HH ó Hh: Sustancia H (sobre la que actúan las
…………………….transferasas A y B)
Genotipo hh: Fenotipo Bombay: No sustancia H
No Ags A y B
Distribución: Hematíes, endotelio vascular, neuronas
sensitivas
Sistema ABO
Otros genes ligados con el gen ABO
Gen Sese
-Cromosoma 9
-Alelos: Se (80%): Codifica la fucosil-transferasa 2→
Sustancia H en secreciones corporales
se: Amorfo
Herencia Mendeliana: SeSe, Sese, sese
Sistema ABO
Distribución de sitios antigénicos
• Existe relación recíproca entre la sustancia H y la
síntesis de Ags A y B
• Todos los subgrupos A y B débiles tienen ↑ expresión de
sustancia H
• La cantidad de Ag H es en orden decreciente:
O >>A2 >>B >>A2B >>A1 >>A1B
Sistema ABO
Grupo
Subgrupos A y B
Reacción de hematíes con reactivos
Reacción de suero con hematíes
Secretores
Sanguíneo
Anti-A
Anti-B
Anti-AB
Anti-H
anti-A1
Hties A1
Hties A2
Hties B
Htíes O
Saliva contiene
A1
4+
O
4+
O
4+
O
O
4+
O
Aint
4+
O
4+
3+
2+
O
O
4+
O
AyH
A2
4+
O
4+
2+
O
A veces
O
4+
O
AyH
A3
2+ cm
O
2+ cm
3+
O
A veces
O
4+
O
AyH
Am
O/+-
O
O/+-
4+
O
O
O
4+
O
AyH
Ax
O/+-
O
1+/2+
4+
O
2+/O
O/1+
4+
O
H
Ael
O
O
O/+-
4+
O
2+/O
O
4+
O
H
B
O
4+
4+
O
4+
4+
O
O
ByH
B3
O
1+ cm
2+ cm
4+
4+
4+
O
O
ByH
Bm
O
O
O/+-
4+
4+
4+
O
O
ByH
Bx
O
O/+-
O/2+
4+
4+
4+
O
O
H
Sistema ABO
Distribución en caucásicos
ABO GROUP
% (Caucasians)
A
43
B
9
AB
4
O
44
Sistema ABO: Anticuerpos
Anti-A, Anti-B, Anti-A,B
-Anticuerpos naturales (pueden ser inmunes)
-Tipo IgM (pueden ser IgG)
-Están en los individuos que carecen de los
antígenos correspondientes
-Importancia clínica:
* Reacciones transfusionales intra y extravasculares
* Enfermedad hemolítica de RN
-Rango térmico: 4-37ºC
-Pueden activar el complemento
Anticuerpos del sistema ABO
Otros anticuerpos frente al sistema ABO
Anti-AB
Presente en grupo O
Reacciona con hematíes A y B
No puede separarse por adsorción-elución
Anti-A1
Presente en suero de ciertos subgrupos de A
Ocasiona discrepancias en el estudio del ABO
Otros anticuerpos frente al sistema ABO
Otros anticuerpos frente al sistema ABO
Sistema ABO
Sistema ABO: estudio
Sistema ABO
Hematíes problema
Antisueros comerciales
-Anti-A
-Anti-B
-Anti-AB
Sistema ABO: estudio
Sistema ABO
-Suero /plasma problema
-Hematíes comerciales
-Hematíes A
-Hematíes B
Sistema ABO: estudio
Sistema ABO. Discrepancias
Discrepancias ABO
Problemas en la prueba sérica
1. Resultado inesperadamente negativo: Faltan anticuerpos
2. Resultado inesperadamente positivo: Sobran anticuerpos
Problemas en la prueba globular
1. Resultado inesperadamente negativo. Faltan antígenos
2. Resultado inesperadamente positivo. Sobran antígenos
Causas de discrepancia
1.
Errores de identificación
Errores del personal administrativo
Errores durante la extracción de la muestra
2.
Errores de técnica
No seguir instrucciones del fabricante
Reactivos en mal estado
Tubo ó placas sucias
Burbujas de aire en el gel
Concentración inadecuada de hematíes ó suero
Centrifugación incorrecta
3.
Problemas derivados del plasma / hematíes
Dicrepancias ABO: medidas iniciales
 Repetir la prueba con hematíes lavados
incluyendo controles auto, alo, AB
 Extraer nueva muestra
 Datos de filiación e historia clínica
Medicación, patología, antecedentes de
transfusión, TMO,…
Discrepancia sérico-globular
SÉRICA
Falta de
anticuerpos
1- Neonato
2- Ancianos
3- Inmunodepresión
4- Hipoproteinemia
** Incubación 22-4ºC
30-60 min + control
Exceso de
anticuerpos
1- Grupo A2 con anti A1
** Htíes-anti A1/Suero-A1/A2
2- Aloanticuerpos
** Panel/Fenotipo htíes reactivo
3- Autoaglutinina fría. ** 37 ºC
4- Rouleaux: ** SF
Discrepancia sérico-globular
GLOBULAR
Falta de
antígenos
1- Debilidad antigénica
Congénita/adquirida
** Incubación 22- 4ºC
2- Exceso de sustancias
solubles.
** Hematíes lavados
Exceso de
antígenos
1- Doble población
2- B adquirido:
** Acidificar el reactivo
3- Poliaglutinabilidad
Aglutinación inespecífica: ** lavado
Tipificación ABO
No asignar un resultado de grupo sanguíneo si tipificación
hemática y sérica no coinciden
DETERMINACIÓN DEL GS ABO
P. GLOBULAR
Anti-A Anti-B
AntiAB
Control
P. SÉRICA
GS
Htíes A1 Htíes B
GS
0
0
0
0
4+
4+
0
4+
0
4+
0
0
4+
A
0
4+
4+
0
4+
0
B
4+
4+
4+
0
0
0
AB
Sistema
Rh
Sistema de
grupo sanguíneo
mas importante
en transfusión
tras el ABO
Sistema Rh
(Landsteiner y Wiener. 1940)
-Sistema polimórfico y complejo: compuesto por mas
de 50 antígenos distintos, exclusivos de los hematíes
-El término “Rh positivo” y “Rh negativo” define la
presencia o ausencia del antígeno D en un individuo
Tras el antígeno D se
identificaron 2 pares de
antígenos antitéticos (E/e, C/c)
estrechamente relacionados
entre si y con el antígeno D.
Sistema Rh
Los antígenos del
sistema Rh se
localizan en 2 proteínas
de la membrana
eritrocitaria,
la proteína RhD y
la proteína RhCE,
altamente homólogas
entre si.
Proteínas del sistema Rh
Fenotipos Rh
La expresión de los fenotipos del Rh depende del tipo de proteína que se
expresa en la membrana del hematíe
-
La proteína RHCE está fomada por 417 aminoacidos y puede
expresar los antígenos Ce, CE, cE, o ce
-
La proteína del antígeno C difiere del antígeno c en 4 aa y la
proteína del antígeno E difiere del antígeno e en 1 aa
COMPLEJO Rh
SISTEMA Rh. Nomenclatura
SISTEMA Rh. Nomenclatura
70%
asiáticos
44%
raza negra
SISTEMA Rh. Nomenclatura ISBT
Sistema Rh: 004
•
•
•
•
•
D--- 001
C--- 002
E--- 003
c--- 004
e--- 005
Antígenos: Letras D,C,E,e,c
Genes: RHD y RHCE
Proteínas: RhD, RhCE, Rhce…
SISTEMA Rh. Anticuerpos
El más
frecuente
Anti-D
Inmunes
No activan el
complemento
Genética del sistema Rh: locus Rh
En 1990 se clona el gen RHD...
(Avent N, Biochem J & Chèrif-Zahar B, Proc Natl Acad Sci USA)
2 genes homólogos
10 exones cada uno
Tandem con orientación
distinta 5´y 3´
Cada uno de los exones codifica para un fragmento de la proteína
Los 10 exones conforman una proteína completa
49
103
112
226
162
RhCE
358
211
384
(Rh 30.000)
267
NH2
1
2
49
103
112
3
162
4
226
313
5
408
417
6
358
RhD
211
384
(Rh 30.000)
267
NH2
COOH
417
313
408
Exones
RhD
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
Genética del sistema Rh
Fenotipo Rh(D) neg
--Delección del gen en caucásicos.
Genética del sistema Rh
Genética del sistema Rh
Fenotipo Rh(D) neg
--Pseudogen RHD en raza negra
ANTIGENO D
ANTIGENO D
La proteína Rh(D) tiene 2 variaciones clínicamente
significativas:
ANTES DE LA BIOLOGÍA MOLECULAR
Conclusiones extraidas del concepto clásico sobre el
D débil y el D parcial (1985-2005)
Antígenos
Densidad
antigénica
Epítopos
Expresión del
Ag RH(D)
D
común
Normal
Todos
Normal
D
débil
↓, ↓↓, ↓↓↓
Todos
Menor
+, ±, -
Normal o ↓
Algunos
ausentes
Menor, heterogénea
+, - , ± , +++
D
parcial
+++ /++++
(reactividad y resultados
discordantes según Acs)
No anti-D
No anti-D
Riesgo de
anti-D
TRAS LA LLEGADA DE LA BIOLOGÍA MOLECULAR
 Se define la estructura molecular del locus RH constituida
por los genes RHD y RHCE.
 Se definen las bases moleculares de los fenotipos D débil y
D parcial. Se encuentran similitudes
 Se describe un gran número de nuevas variantes de D
débil y de D parcial → Variantes RHD.
 Se publican los primeros casos de pacientes portadores de
un fenotipo D débil que han desarrollado un anti-D.
 Se publican casos de pacientes Rh(D) negativo que
desarrollan anti-D tras la transfusión de hematies
aparentemente D negativo.
Variantes D débil
Todos los ejemplos de fenotipo D débil publicados obedecen a
mutaciones puntuales que afectan a la región transmembrana o
intracelular de la proteina RhD
Extracelular
32
11
53
72
94
75
110
131
154
134
169
188
226
207
238
257
283
264
286 352
307
333
370
389
417
Intracelular
Tipos de D débil prevalentes o clínicamente relevantes en Europa
Recomendación
Pacientes
Recomendación
Gestantes
Tipo de
D débil
Alemania
%
Haplotipo
Receptores
Anti-D
Transfundir
γglobulina
1
0.294%
CDe
0
D pos
No
2
0.0759%
cDE
0
D pos
No
3
0.0219%
CDe
0
D pos
No
4.0
0.014%
cDe
0
D pos
No
4.1
0.023%
cDe
NA
D pos
No
4.2
Raro
cDe
1
D neg
Si
5
0.0035%
cDE
0
D neg
Si
11
>0.0009%
0.0009%
cDE
cDE
1
D neg
Si
15
Raro
cDE
1
D neg
Si
19
0.067%
CDe
NA
D neg
Si
20
0.024%
cDE
NA
D neg
Si
Otros
Raros
Variable
NA
D neg
Si
95%
Flegel WA, 2006
Un caso especial: El D débil tipo DEL
(antes Del)
 La expresión del antígeno D es extremadamente débil, y los
pacientes se tipan como D negativo
 Los donantes son catalogados como D negativo con las
técnicas serológicas convencionales, y no lo son.
 Sólo demostrable con la técnica de Adsorción/Elución.
 Casi exclusivo de los fenotipos D-, C+ y/o E+ (r’ y/o r’’).
 En Europa es el tipo de D débil menos frecuente.
 En el este asiático está presente en más del 30% de los
donantes: variante RHD(K409K).
 Se han descrito diferentes alelos DEL.
Variantes D parcial
Bases moleculares del fenotipo D parcial
El fenotipo D parcial se produce como consecuencia de
2 tipos de mutaciones:
SM
P1
2.
Alelos híbridos RHD/RHCE.
Una o varias mutaciones
puntuales en los segmentos
extracelulares de la
proteina.
Gen
RHCE
1.
1 3
’
0
Gen
RHD
31
’
0
1
DII
DVII
(Rh
DNB
D
40)
DHMi
1
3 4
2
1
1
2
3 4
6 7 89 1
5
5
L110P
1
2
15 2
’
3 4
3 4
A354
N
0
6 7 89 1
5
0
6 7 89 1
5
G35
0
6
7 89 1
5 5S
’
0
El D parcial DVI y sus 4 Tipos
1
2
3
4
5
6
7
89
10
Gen RHD normal
RHDVI tipo I
RHDVI tipo II
RHDVI tipo III
RHDVI tipo IV
Gen RHCE normal
Prevalencia en Caucásicos: 0.02%-0.05% → 1-2 en 5000 individuos
Tipificación del Rh(D)
Diferentes métodos
-Técnica de tubo
-Microcolumnas
-Microplaca
Detección y estudio de variantes Rh(D)
Tipificación del Rh(D)
Detección y estudio de variantes Rh(D)
GRACIAS