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Antimicrobial susceptibility of strains of Salmonella spp. isolated from imported rendered animal byproducts. Susceptibilidad antimicrobiana de cepas de Salmonella spp. aisladas de harinas de origen animal importadas Juan M. Sanhueza1*, Consuelo Borie1, Amelia Morales2, Betty San Martín1, Sergio Rosende1. 1 Facultad de Ciencias Veterinarias y Pecuarias Universidad de Chile, Departamento de Medicina Preventiva Animal. Av. Santa Rosa 11735, La Pintana, Santiago, Chile. 2 Servicio Agrícola y Ganadero, Complejo Lo Aguirre, Ruta 68 Km 22 s/n, Pudahuel Santiago, Chile. Summary One hundred and eighty seven strains of Salmonella spp. were isolated by the Servicio Agrícola y Ganadero (SAG, agriculture and livestock service. Ministry of Agriculture, Chile) from rendered animal by products. The sensitivity against 9 antimicrobials was quantified by Minimal Inhibitory Concentration (MIC). Twelve strains of the total studied, isolated from meat and bone meal, feather meal and blood meal, were resistant to at least one antimicrobial. Seven different profiles of resistance were observed in the 12 resistant strains, being the monoresistant to tetracycline and the multiresistant to gentamicin, sulfamethoxazole and tetracycline the most common. No resistant strains were found in the fish meal and the poultry meal. Introducción Los antibióticos son ampliamente usados en producción animal, para el tratamiento y profilaxis de enfermedades, seleccionando de esta manera bacterias resistentes. Sin embargo, la resistencia a estas drogas ha sido ocasionalmente observada en planteles sin una historia de uso de antibióticos. Una fuente potencial de bacterias resistentes a los antimicrobianos pueden ser las harinas de subproductos animales. Objetivos: 1.- Cuantificar la susceptibilidad antimicrobiana de Salmonella spp. aisladas de harinas de origen animal importadas. 2.- Observar el porcentaje de cepas resistentes de Salmonella spp. en harinas de origen animal importadas. 3.- Describir perfiles de resistencia. Material y Método Se utilizaron 187 cepas de Salmonella spp. aisladas por el Servicio Agrícola y Ganadero (SAG, Chile) de Harinas de Carne y Huesos (n=62), Plumas (n=75), Pescado (n=22), Vísceras de Pollo (n=17) y Sangre (n=11); entre Junio de 1998 y Abril del 2002 procedentes de distintos países Americanos. Los antimicrobianos utilizados como droga pura fueron: ampicilina (Amp), cefoperazona (Cefo), cloranfenicol (Caf), ciprofloxacino (Cipro), enrofloxacino Proceedings of the 10th International Symposium on Veterinary Epidemiology and Economics, 2003 Available at www.sciquest.org.nz (Enro), florfenicol (Flor), gentamicina (Gen), sulfametoxazol (Smx) y tetraciclina (Tc). Las 187 cepas de Salmonella spp. fueron transportadas en caldo común del Servicio Agrícola y Ganadero hasta el Laboratorio de Microbiología de la Facultad de Ciencias Veterinarias y Pecuarias de la Universidad de Chile, donde se procedió al estudio de las Concentraciones Mínimas Inhibitorias (CMI) por el método de dilución en agar, según las normas del National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Se prepararon 7 diluciones de antimicrobianos las que variaron el doble una de otra partiendo de 32ug/ml hasta 0,5ug/ml. Para cefoperazona se utilizaron diluciones partiendo de 64ug/ml. En el caso de sulfametoxazol se realizó otra escala de 5 diluciones las que también variaron el doble una de otra, partiendo de 512ug/ml hasta 32ug/ml. Los valores de CMI obtenidos en esta población bacteriana, fueron separados en sensibles y resistentes según los puntos de corte establecidos por el NCCLS. Resultados Los valores de inhibición, expresados en ug/ml, de las 187 cepas de Salmonella spp. aisladas de harinas de origen animal importadas indicaron que, para ciprofloxacino y enrofloxacino la Concentración Mínima Inhibitoria para el 100% de las cepas fue 0,5ug/ml, mientras que para cefoperazona, gentamicina, ampicilina y tetraciclina el 95% de las cepas fueron inhibidas entre 0,5ug/ml y 2ug/ml. Para cloranfenicol y florfenicol el valor de inhibición en el 99% de las cepas se ubicó entre 2ug/ml y 8ug/ml. En el caso de sulfametoxazol, los valores de inhibición fueron los más heterogéneos, situándose entre 32ug/ml y 256ug/ml el 96% de las cepas en estudio. De las 187 cepas, 12 (6,41%) fueron resistentes a uno o más antimicrobianos, de estos, los que más comúnmente expresaron resistencia fueron tetraciclina y sulfametoxazol, donde, cada uno de ellos o ambos juntos, estuvieron presentes en 11 de las 12 cepas resistentes. Se observaron 7 perfiles de resistencia en las 12 cepas resistentes, cada uno de estos perfiles fue agrupado según el tipo de harina de donde fueron aisladas las cepas. Estos datos se presentan en la Tabla N°1. Tipo de harina Perfil de resistencia Número de cepas Tc 3 Carne y Huesos Smx 1 Tc 1 Amp 1 Plumas Gen, Smx, Tc 1 Caf, Smx 1 Caf, Flor, Smx 1 Gen, Smx, Tc 2 Sangre Cefo, Gen, Amp, Smx 1 Tabla N°1: Perfiles de resistencia de las 12 cepas resistentes de Salmonella spp. No se observaron cepas resistentes en los aislados de harinas de Pescado y Vísceras de Pollo frente a ninguno de los nueve antimicrobianos estudiados. Proceedings of the 10th International Symposium on Veterinary Epidemiology and Economics, 2003 Available at www.sciquest.org.nz Discusión El nivel de resistencia encontrado en las cepas de Salmonella spp. aisladas de harinas de origen animal importadas, es notablemente más bajo que el documentado por Hofacre et al (2001), quienes observaron un 33,3% de resistencia en salmonelas provenientes de harinas de origen animal. Y si bien es cierto, el número aislado es bajo (n=9), no deja de llamar la atención el porcentaje de cepas resistentes encontrado, contrastando de este modo con el 6,41% observado en este estudio. En las cepas resistentes se observaron 7 perfiles distintos de resistencia siendo los más comunes el monoresistente a tetraciclina con 4 cepas (33,3%) y el multiresistente a gentamicina, sulfametoxazol y tetraciclina con 3 cepas (25%) (Tabla Nº1). Estos perfiles se asemejan a los encontrados por Hofacre et al (2001) y la resistencia de Salmonella spp. a tetraciclina y sulfametoxazol coincide con lo observado a nivel mundial, donde estos dos antimicrobianos han emergido como los más comunes dentro de este grupo de enterobacterias (DANMAP, 2001; NARMS, 1999). En este trabajo, de las 12 cepas resistentes, 11 lo fueron frente a tetraciclina, sulfametoxazol o a ambos juntos (Tabla Nº1). Los resultados observados en este estudio indican que las cepas de Salmonella spp. aisladas de harinas de origen animal importadas tienen un bajo porcentaje de resistencia (6,41%) y si bien, las harinas de Carne y Huesos, Plumas y Sangre se presentaron como una fuente de salmonelas resistentes, son necesarios mayores estudios para determinar el verdadero impacto de estos productos en la diseminación de la resistencia en los animales de consumo humano. Referencias 1.- DANMAP. 2001. Use of antimicrobial agents and occurrence of antimicrobial resistance in bacteria from food animals, foods and humans in Denmark. 2.- Hofacre, C.; White, D.; Maurer, J.; Morales, C.; Lobsinger, C.; Hudson, C. 2001. Characterization of antibiotic-resistant bacteria in rendered animal products. Avian Diseases. 45:953-961. 3.- National Antimicrobial Resistance Monitoring System (NARMS). 1999. Annual report. [En línea] http://www.cdc.gov/narms/annual/1999/html/99sum.htm 4.- National Committee for Clinical Laboratory standards (NCCLS). 1993. Methods for dilution antimicrobial susceptibility test for bacteria that grow aerobically. Third edition. Approved standard. 13(25):1-17. 5.- National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). 1999. Performance standards for antimicrobial disk and dilution susceptibility for bacteria isolated from animals. Approved standard. 19(11):1-60. Proceedings of the 10th International Symposium on Veterinary Epidemiology and Economics, 2003 Available at www.sciquest.org.nz