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Virología Aplicada
Programa
Unidad I
Biotecnología y salud. Implicancias y usos en profilaxis, diagnóstico y terapia.
Agentes virales de origen animal, vegetal y bacteriófagos implicados en
desarrollos biotecnológicos: Aspectos virológicos básicos (estructura,
multiplicación, genética).
Producción de vacunas.
Virus como vectores: clonado y expresión de proteínas.
Utilización de agentes virales en terapia génica.
Producción de sustratos antigénicos y antisueros con fines diagnósticos.
Unidad II
Metodología general. Aislamiento y caracterización de virus.
Microscopía óptica: inmunofluorescencia, inmunohistoquímica, hibridación in situ.
Microscopía electrónica e inmunoelectrónica.
Cultivo viral.
Purificación de viriones: técnicas de precipitación, técnicas de ultracentrifugación y
centrifugación diferencial.
Aislamiento y caracterización de ácidos nucleicos: Métodos de extracción
alternativos considerando el material de partida y la utilización posterior.
Hibridación. Amplificación.
Análisis de proteínas: métodos electroforéticos, métodos inmunológicos.
Producción y purificación de proteínas virales individuales.
Unidad III
Virus como herramientas en biotecnología.
Virus a ADN
Virus a ARN
Virus como vectores vacunales
Virus como vectores en terapia génica
Unidad IV
Virus como objeto de estudio. Diagnóstico viral.
Detección de antígenos, anticuerpos y ácidos nucléicos.
Obtención de muestras: selección, colección, transporte y procesamiento.
Bioseguridad.
Metodologías de uso en virología clínica.
 Métodos inmunológicos: detección del antígeno viral, detección de la respuesta
del huesped. Inmunofluorescencia, Inmunoensayos, western blot, fijación de
complemento, seroneutralización, hemaglutinación.
 Métodos basados en la detección de ácidos nucleicos: métodos de hibridación,
métodos de amplificación de target, métodos de amplificación de señal,
métodos cuantitativos (carga viral).
 Diagnóstico virológico rápido. Cultivo rápido (shell vial), detección directa de
antígeno sobre material clínico.
 Pruebas de susceptibilidad a drogas, genotipificación
 Citometría de flujo
 Automatización.
Unidad V
Bases para el diseño de métodos de detección. Consideraciones generales
basadas en las características virales (proteínas inmunogénicas, epitopes
relevantes, crecimiento en cultivo, etc), características de la muestra y
características del paciente (inmunocompetente ó inmunosuprimido, edad, etc)
Patógenos importantes en salud humana: estrategias específicas para virus de las
hepatitis (A, B, C y D), virus respiratorios (Influenza, parainfluenza, respiratorio
sincitial, adenovirus),
virus de diarreas (rotavirus), virus del sarampión,
Herpesvirus (HSV, CMV, EBV), Papillomavirus, HIV.
PROGRAMA PRÁCTICO
TRABAJO PRÁCTICO N° 1
TÉCNICAS BÁSICAS 1
Bioseguridad. Discusión de los fundamentos teóricos y los aspectos prácticos del
cultivo celular, así como sus aplicaciones en los distintos campos de la Virología.
Trabajo en esterilidad. Características de las líneas celulares de mayor uso en
diagnóstico. Líneas celulares modificadas genéticamente.
TRABAJO PRÁCTICO N° 2
TÉCNICAS BÁSICAS 2
Introducción a los conceptos del cultivo viral y a la preservación de stocks virales.
Evaluación de sistemas alternativos en el cultivo viral. Comparación del efecto
citopático producido por diferentes agentes virales. Cultivo de virus con efectos
líticos sobre la monocapa celular. Cultivo de virus inductores de la formación de
sincicios. Curvas de crecimiento viral.
TRABAJO PRÁCTICO N° 3
TITULACIÓN VIRAL POR DILUCIÓN TERMINAL
Introducción a los ensayos de cuantificación viral. Análisis de las características,
aplicaciones y limitaciones de los diferentes métodos de uso corriente. Titulación
por dilución terminal del stock viral obtenido en el Trabajo Práctico N° 2. Análisis
de los resultados. Cálculos para obtener el título.
TRABAJO PRÁCTICO N° 4
TITULACIÓN VIRAL POR PLAQUEO. CLONADO DE VIRUS
Titulación por plaqueo del stock viral obtenido en el Trabajo Práctico N° 2.
Limitaciones de la técnica. Análisis de los resultados. Evaluación de métodos
alternativos de titulación. Cálculo del título. Importancia y utilidad de la purificación
viral mediante la obtención de clones.
TRABAJO PRÁCTICO N° 5
CONCENTRACIÓN y PURIFICACIÓN VIRAL
Concentración de los stocks virales obtenidos y titulados utilizando Polyetilenglycol
y mediante ultracentrifugación sobre colchón de sacarosa. Principios de la
ultracentrifugación. Purificación de virus en gradientes de densidad de CsCl y
Iodixanol.
TRABAJO PRÁCTICO N° 6
CARACTERIZACIÓN DE VIRUS 1: SEROTIPIFICACIÓN.
Seroneutralización viral. Evaluación de sueros con fines epidemiológicos y
diagnósticos.
Técnicas
de
seroneutralización
para
tipificar
virus.
Seroneutralización por reducción de focos infecciosos. Caracterización de
serotipos de rotavirus por reducción de focos fluiorescentes.
TRABAJO PRÁCTICO N° 7
CARACTERIZACIÓN DE VIRUS 2: GENOTIPIFICACIÓN.
Genotipificación por hibridación, PCR o secuenciamiento. Genotipificación de
Rotavirus por RT-PCR. Genotipos G y P, importancia en la evaluación de la
implementación y resultados de planes de vacunación. Epidemiología molecular y
evolución de los virus.
TRABAJO PRÁCTICO N° 8
DETECCIÓN VIRAL EN MUESTRAS CLÍNICAS
Detección por ELISA, Imnunofluorescencia, PCR y RT-PCR de virus en muestras
clínicas. El caso de los virus respiratorios y entéricos. Identificación de antígenos
virales en cultivo: inmunofluorescencia, inmunoquímica. Técnicas de cultivo
rápido, Shell vial. Uso de anticuerpos monoclonales.
TRABAJO PRÁCTICO Nº 9
CUANTIFICACIÓN VIRAL
Métodos cuantitativos. Métodos de amplificación de target. Métodos de
amplificación de señal. Real-time PCR. Uso de la Real Time RT-PCR para la
cuantificación de rotavirus en aguas residuales.
TRABAJO PRÁCTICO Nº 10
USO DE LA CITOMETRÍA DE FLUJO EN VIROLOGÍA CLÍNICA
Detección rápida y sensible de agentes virales viables en muestras ambientales.
Detección en muestras clínicas (BAL). Detección de apoptosis. Evaluación de
subpoblaciones linfocitarias en pacientes infectados por HIV.
SEMINARIO N° 1
Discusión de publicaciones científicas.
SEMINARIO N° 2
Discusión de publicaciones científicas.
Bibliografía
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