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SEP1002_ES_REDVET
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Foco inflamatorio y su efecto en las dermatitis, T.V.T. y el tumor L1210 del raton
Resumen
De los hallazgos de Matzinger en la teoria del peligro, se conoce que el sistema inmunológico pudiera
detectar el peligro más que diferenciar entre lo que es propio o lo que es extraño. Los fenómenos
autoreactivos cruzados con antígenos microbianos son frecuentes en enfermedades de la piel. Es
conocido tambien que la célula dendrítica (CD) constitutiva tiene tendencia a producir células maduras y
en los tumores sabemos la perdida del coestimulo en la respuesta inmune.
EL método utilizado en este trabajo, fue el de crear un foco inflamatorio, el cual el exudado y sus
componentes mostraron aplicado a lesiones hipersensibles , son capaces de interactuar con el sistema
inmune. Los resultados obtenidos en dermatitis, asi como en TVT y el tumor del raton L1210 son
positivos.Intentamos dar una explicación y crear un hipótesis del mecanismo de accion.
Abreviaturas utilizadas:.
CD: Células dendríticas
TAP: Principio activo total
INOR: Insituto Nacional de Oncología y Radiologia
TVT: Tumor venereo transmisible
ILS: Porciento de supervivencia
LABIOFAM: Laboratorio biofarmaceutico
Dermune: Crema al 36%
Introducción
En 1994 Polly Matzinger 8,9 en su nueva teoria llamada modelo del peligro, sugirió que la respuesta
inmune específica se desarrolla como el resultado de la detección del peligro más que discriminar entre
lo propio y lo ajeno (Matzinger, 1994)8. . Aunque este modelo se refiere principalmente a la tolerancia
inmune, se asume que es valida para objetos distantes, tales como tumores y aparentemente la no
relacionada gene terapia inmunológica.
El modelo contemporaneo de la discriminación entre lo propio y ajeno asume que el sistema inmune
protege el organismo contra todo lo que es extraño, aunque la respuesta inmune es directo atravez de
entidades externas las cuales no son antígenos propios(Janeway, 1992)7
De acuerdo el modelo del peligro, el sistema inmune detecta y entonces responde a cualquier cosa
peligrosa y no necesariamente extraña (Matzinger, 1994;1998; Fuchs & Matzinger, 1996) 8.
Todo el modelo es basado en el principio que la presencia o ausencia del llamado segundo signo,
determina respuesta inmune o tolerancia.Mientras el primer signo viene del reconocimiento del antígeno
expecífico, el segundo es generado de ambas ayuda enviadas por los linfocitos T-helper o la
coestimulación de células profesionales presentadoras de antígeno(Ridge et al.,1998; Schoenberger et
al.,1998;Bennett et al.,1998)13.
La batalla del reconocimiento antigénico(respuesta inmune contra tolerancia) depende tambien en el
estatus diferencial de la respuesta celular.
Aunque muchos mecanismos de escape tumoral a la vigilancia inmunológica han sido descrito, el modelo
del peligro explica en una forma unificada y general, porque hay una respuesta inmune a la célula
cancerosa a pesar de lo extraño del antígeno tumoral. El tumor en crecimiento no da un signo de peligro
a las células dendríticas, por lo tanto no activa el sistema inmune.
Cualquier celula T antígeno expecífica por lo tanto tendrá su primer encuentro con la células tumorales
o células dendríticas. Aunque no hay coestimulación, ambas situaciones llevaran a la célula T a la
anergia o apoptosis y eventualmente a la tolerancia tumoral(Staveley-0’Carroll et al.,1998)14
El desarrollo de terapias efectivas para el tratamiento de afecciones inmunológicas es un area
importante de investigación en la actualidad.En trabajos anteriores un nuevo principio activo muestra
efectividad durante su aplicación en una amplia clase de afecciones inmunológicas en animales (ver
Cabo1,2,3y 4)Los pasos iniciales que dirigieron al hallazgo del principio activo, fue una particular
experiencia, en la cual un foco inflamatorio fue provocado en perros afectos de dermatitis. Para detalles
sobre el método obtención y aplicaciones del principio activo,ver referencias. Cabo 1,2,3 y4.
En este trabajo presentamos evidencias clínicas las cuales indican un aumento de las propiedades de
respuesta inmune, cuando es aplicado el principio activo.Los resultados son mostrados en tablas.
.
Metodo
1. Obtencion del exudado(Certificado de invencion no. 11)
2-Produccion del foco inflamatorio
a. inyeccion subcutanea del inóculo a perros de la raza Beagle, 20 mls / kg.Aproximadamente 6 dias
después el foco inflamatorio es producido.
3. Obtencion del exudado (TAP), de acuerdo al método de LABIOFAM..
Figura 1
4. Preparacion de la crema (Dermune)
( T.A.P.)-------------- 36 gms
Crema hidrófila
-100 gms
5-Obtencion del sobrenadante
a. Ultracentrifugación(T.A.P.) a 20,000 rpm por 10 minutos.
6 Filtración bacteriológica del sobrenadante.
7. Obtención del ultrafiltrado.
a-Ultrafiltración de el sobrenadante estéril en ultrafiltros asimétricos SM 14539 de 10,000 NMWC y
guardados en bulbos liofilizados. El proposito fue de eliminar virus, proteinas de alto peso molecular y
observar si se mantiene retenido el efecto terapeutico del principio activo (TAP). Los materiales y
métodos utilizadas estan de acuerdo a las reglas de la LABIOFAM y el INOR.
Biomodelos utilizados
Fueron un total de 41 perros afectados de dermatitis, de los cuales:
1-. 20 fueron tratados provocandoles el foco inflamatorio
2-. 20 fueron inyectados con el sobrenadante estéril a la dosis de 3 mls por kg de peso subcutaneamente,
todos los días por 10 dias.
3- Fueron tratados con sobrenadante ultrafiltrado a la dosis mostradas en la tabla de abajo.
Un perro afectado con el tumor venereo transmisible(TVT) fue tratado con el sobrenadante por 21 días.
Ratones transplantados con el tumor L1210 fueron tratados con el sobrenadante estéril de acuerdo a las
norma del INOR.
Fueron 28 personas afectadas con dermatitis. 10 de ellos fueron tratados con la crema Clobetazol y 18
fueron tratados con la crema Dermune al 36%.
Dosis: Aplicar 2 veces al día en las lesiones, frotando hasta desaparecer la crema. Los síntomas fueron
clasificados como no mejorados, mejorados y curados.Se utilizó el testa de Chi-cuadrado para medir la
diferencia de los resultados entre el control y la crema y son expresados en tablas.
Resultados
El 100% de los perros con dermatitis tratados utilizando el método de causar el foco inflamatorio, todas
las lesiones de eritema,pruritos,decamación desaparecieron por más de 6 meses. Similares resultados
fueron obtenidos utilizando el método de la inyección subcutánea del sobrenadante
Tabla 1
En la Tabla 1 podemos observar que la aplicación de el ultrafiltrado TAP en un caso de Scabies
demodéxica , muestra que la fracción (10000 NMWC) retiene las propiedades inmunomoduladoras del
TAP.
El propositos de la ultrafiltración fué eliminar bacterias, virus, proteinas de alto peso molecular y el
pirógeno y observar después si las propiedades terapeuticas son conservadas
Resultado en un caso de escabiosis (Total 6 dosis subcutáneas)
Inyecciones
fecha
1
11-4-96
2
12-4-96
3
13-4-96
4
15-5-96
5
6
Mls por Kg
Sintomas
0,46
Prurito, eritema y alopecia
0,92
Efectos c olaterales
No.
No prurito
No.
1,38
No prurito
No
1,84
No prurito, no eritema
No
16-4-96
2,5
No prurito, no eritema
No
20-4-96
2,5
No prurito, no eritema
No.
Tabla 2
En la tabla 2 se puede observar que la aplicación del ultrafiltado TAP en un caso de alergia atópica,que
la misma fracción utilizada en la escabiosis retenia la misma propiedad inmunomoduladora del TAP
Resultados obtenidos en un caso de alergia atópica
Inyecciones
fecha
1
1-4-96
Dosis mls por Kg
Sintomas
efecto Colateral
1,8
Pruri to, alopecia y eritema
2
2-4-96
0,3
No prurito
No
3
3-4-96
0,3
No prurito
No
4
4-4-96
0,3
Prurito, alopecia y eritema
No
5
5-4-96
0,46
No prurito
No
6
6-4-96
0,46
mejorö
No
7
7-4-96
mejoró
No
0,46
Leyenda: No pudo continuar el tratamiento
Drowsiness
Tabla 3
En la tabla 3 se puede observar que durante los 12 días de tratamiento con el prin cipio activo el tumor
se redujó de 6 cms a 0
No
dia
fecha
ml por kg
bulbos
Mls total
1
Domingo
14-7-91.
2,5 por 7
3
2
lunes
15-7-91
3 por 7
3,5
21
3
martes
16-7-91
3,5 por 7
4
24
4
miercoles
4 por 7
4
27
5
jueves
6
viernes
19-7-91.
5 por 7
6
36
7
sabado
20-7-91.
4 por 7
5
30
8
domingo
21-7-91
7 por 7
7
48
9
lunes
22-7-91.
8 por 7
9
54
10
martes
23-7-91
10 por 7
12
72
11
.
miercoles
24-7-91
11por 7
13
78
12
jueves
25-7-91
12 por 7
14
84
17-7-91
18
18-7-91. No
se pudo
medicar.
dosis total. 492 mls
Tabla 4
Se puede observar el aumento de la supervivencia en ratones inyectados con el sobrenadante
Se coordinó con el Centro de Investigaciones del INOR,para el estudio de supervivencia en ratones
BDF1
Los resultados son los siguientes:
No. de
ratones
Dosis en mls for
Kg
% Ils
200
45
30,1
200
90
43,8
Ils% :aumento de la supervivencia en ratones BDF1, transplantados con el tumor L1210
Leyenda: Intraperitonealmente fueron inyectados los ratones durante 8 días,con el sobrenadante
esterilizados por filtración bacteriológica..
De acuerdo al INOR, 25% de supervivencial,es indicativo de actividad antitumoral
Tabla 5
La tabla 5 muestra los casos tratados de dermatitis en humanos. La diferencia estadística entre los
resultados obtenidos entre los controles(Clobetazol) y los obtenidos con la crema dan un resultado
estadístico de significancia de un 96% de confianza de la crema con respecto a los controles
Medicina Clobetazol
Casos de dermatitis
10-100%
Medicina
Dermune
Casos de dermatitis
18-100%
No mejorados: 3-30%
No mejorados: 0
Mejorados: 5-50%
Mejorados: 10-55%
Curados: 2-20%
Curados: 8-44%
.
Discusion
Es necesario más estudios moleculares los cuales ayudarian en la investigación de la inmunopatogénesis
e inmunoterapia de estas enfermedades.
Las células dendríticas son cruciales en la respuesta inmune y son capaces de activar la célula T; se
piensa que ellas pudieran estar envueltas en los procesos de autoinmunidad. En este sentido, se ha
sugerido recientemente que durante el proceso de maduración la célula dendrítica no puede distinguir
entre antígenos derivados de proteinas de patógenos y las propias
Es probable que la célula dendrítica madura puede simultáneamente presentar en su superficie algunas
moléculas cargadas con el antígeno patógeno como si fuera su propio antígeno
específico(autoreactivos)14 Esta noción es consis tente con el hecho de que el sistema inmune esta más
preocupado en identificar agentes dañinos o signos de peligros que en distinguir antígenos
endógenos(propios) de los exógenos(extraños)17. A causa de esto, la célula dendrítica pudiera ser
potencialmente dañina, si no es apropiadamente regulada.
En enfermedades tales como las dermatitis, el sistema inmune de pacientes pueden identificar agentes
dañinos como bacterias y superantígenos5,6,7,8que pueden estimular antígenos endógenos, provocando un
proceso autoreactivo. Este reconocimiento produce una serie de cambios que conlleva a la maduración
de la célula dendrítica17,18Hipotéticamente el coestímulo no específico del TAP interactuaria con la
célula dendrítica madura en estas enfermedades. El efecto en caso de tumores, donde hay
inmunotolerancia contra el antígeno específico, el TAP añadiría la perdida del coestímulo
Hipótesis
Presentaremos una hipotesis preliminar del mecanismo por el cual el TAP pudiera ayudar en estos
procesos.
El TAP es creado en un foco inflamatorio producido en el tejido subcutáneo de un perro al cual le fue
aplicado un inóculo, hipotéticamente éste eliminaría el antígeno que causó el foco, este TAP tiene la
característica de tener una alta capacidad de fagocitosis con una alarma de acuerdo a la teoría del
peligro(Matzinger16).En contraste con los tejidos enfermos los cuales tiene alta capacidad de
presentación antigénica pero muy baja efectividad en eliminar el antígeno específico por mantener el
clon de células T10,11,12.
Aplicando el TAP en los tejidos enfermos se supone que aumente la capacidad de presentación
antigénica, no en el antígeno específico pero si en el no específico, que causa el foco inflamatorio, por lo
cual el tejido enfermo tiene la capacidad de eliminar causando daño a la actividad fagocitaria,
reduciendo el coestímulo. La caida del coestímulo puede finalizar con el proceso alérgico por apoptosis
de los linfocitos
Conclusión
Finalmente creemos que estos resultados obtenidos utilizando este principio activo pueden ayudar en
posteriores investigaciones en la inmunopatogénesis e inmunoterapia de estas enfermedades
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