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Asig:Microbiología.cuest.2014
Cuestionario de microbiología: Antibióticos
1.-¿Qué hizo Fleming en 1929?
R: Aisló la penicilina a partir del hongo Penicillium notatum.
2.-¿Qué es un antibiótico?
R: Son sustancias químicas producidas por microrganismos o derivados semisintéticos de estos.
3.-¿Qué son los Quimioterápicos?
R: Son productos de síntesis química, pero con la propiedad de estar dotados de actividad
antimicrobiana.
4.-¿Para que nos sirve la evaluación de la sensibilidad bacteriana?
R: Nos ayuda a la selección del compuesto mas adecuado para el tratamiento de una infección
bacteriana.
5.-¿Qué es la CMI?
R: Es la concentración Mínima inhibitoria, es la menor concentración de un antibiótico capaz de
inhibir el desarrollo de una cepa dada. A partir de esto diremos si una cepa es resistente o sensible
al antibiótico.
6.-¿ A que se le llama punto de corte en la sensibilidad bacteriana?
R: Es cuando el CMI se encuentra en el limite entre sensible y resistente, se clasifica la sepa como
intermedia y se aconseja repetir la prueba.
7.-¿Qué es el CMB?
R: Concentración mínima bactericida, en la concentración mínima de un antibiótico capaz de
destruir una cepa bacteriana dada.
8.-¿Cuáles son los métodos mas utilizados para medir sensibilidad?
R: La difusión en agar (antibiograma) – la dilución en caldo y en agar.
9.-¿Cuál es el objetivo del antibiograma?
R: Determinar la sensibilidad bacteriana a distintos antibióticos utilizando una metodología
sencilla y asequible a cualquier laboratorio de Microbiología.
10.-¿ Que cepas se utilizan en el laboratorio?
R: Staphylococcus aureus o Etcherichia coli.
11.-¿Que método es el recomendado por la Food and Drug Administration (FDA) y el National
Committee for Clininical Laboratory Standards (NCCLC)?
R: Método de Kirby-Bauer
12.-¿Qué factores afectan el halo de inhibición?
R: - La carga de antibiótico en los discos
- La difusión del antibiótico en el medio de cultivo
- El tamaño del inóculo bacteriano
- La composición y grosor del medio de cultivo - la velocidad del crecimiento bacteriano - el tiempo
de incubación.
13.-¿Cuál es el medio de cultivo frecuentemente empleado? ¿Por qué?
R: El de Mueller – Hinton. Porque permite el crecimiento de casi todas las bacterias.
14.- ¿Cómo puede ser suplementado este medio de cultivo?
R: Puede ser suplementado con un 5% de sangre desfibrinada de caballo, oveja u otro animal,
cuando la bacteria lo requiera para su desarrollo.
15.-¿Qué Ph medio se necesita para este medio de cultivo?
R: Ph entre 7.2 – 7.4
16.-¿Cuánto debe ser su grosor?
R: Entre 4 – 6 mm
17.-¿Cómo se conservan los discos antibióticos?
R: A 4°c protegidos de la humedad.
18.-¿Qué características debe tener el inoculo bacteriano?
R: Turbidez similar a 0.5 en la escala de Mcfarland – aprox. 18el8 UFC/mL, y se prepara en solución
salina estéril o caldo de cultivo, la inoculación se realiza con hisopo de algodón estéril
19.-¿Qué características deben poseen las placas?
R: Las placas deben incubar a 35- 37°C , en atmosfera aerobia, se debe evitar la incubación en
presencia de CO2, ya que modifica el ph del medio y esto afec6ta la actividad de algunos
antibióticos.
20.-¿ Cuando se hace la lectura del antibiograma?
R:Entre 18 y 24 horas. Ya que se hace solo para bacterias de crecimiento rápido, una incubación
mas prolongada lleva a errores del halo de inhibición.
21.-¿Qué efectos se producen al agregar un antibiótico a una cepa en crecimiento exponencial?
R: Bacteriostático – Bactericida – Bacteriolítico.
22.-¿Qué ocurre en el efecto bacteriostático?
R: Se observa inhibición en la proliferación pero sin muerte celular.
23.-¿Cómo actúan los agentes bacteriostáticos?
R: Los agentes bacteriostáticos frecuentemente son inhibidores de la síntesis proteica y actúan
uniéndose a los ribosomas. Sin embargo, este enlace no es muy estrecho y cuando disminuye la
concentración del antibiótico, éste se libera de los ribosomas y se presenta nuevamente la
proliferación.
24.- De ejemplos de agentes bacteriostáticos.
R: Cloramfenicol – Eritromicina - Tetraciclina.
25.-¿Qué ocurre en el efecto bactericida?
R: Evitan la proliferación e inducen a la muerte, pero no tiene lugar la lisis o ruptura celular; éstos
generalmente se unen muy íntimamente con sus blancos celulares y no pueden eliminarse por
dilución.
26.- De ejemplos de agentes bactericidas.
R: Estreptomicina - Neomicina (por fuerte unión al ribosoma) – Actinomicina - Mitomicina (por
unión al DNA).
27.-¿Qué ocurre en el efecto bacteriolítico?
R: Inducen la muerte por lisis celular, lo que se observa como una disminución en el número de
células o en la turbidez después de que se agrega dicha sustancia. Los bacteriolíticos que inhiben
la síntesis de la pared celular.
28.- De ejemplos de agentes Bacteriolíticos.
R: Penicilina y Cicloserina, así como los agentes que actúan sobre la membrana celular, como la
Polimixina.
29.- ¿Qué ha ocurrido con el gran aumento del uso de antibióticos?
R: Ha surgido un problema aun mayor que la enfermedad, y es que muchas bacterias se han hecho
resistentes a estos antibióticos. Las bacterias son resistentes a los antibióticos cuando pueden
multiplicarse en presencia del mismo, impidiendo la acción del antibiótico. Algunas especies que
son normalmente sensibles a un antibiótico pueden después adquirir resistencia frente a este.
30.-Nombre antibióticos que actúan con la inhibición de la síntesis de la pared celular.
R: Cicloserinas – Penicilinas
31.-¿Cómo actúa la penicilina?
R: Bloquea la actividad de la enzima transpeptidasa. Esta enzima media la formación de enlaces
cruzados entre las hebras lineares de los glucopéptidos.
32.-¿Qué son las cicloserinas?
R: Es un antibiótico activo contra muchos tipos de microorganismos, tanto Gram (+) como Gram (),incluyendo coliformes, Proteus y bacilos tuberculosos, por lo cual se ha aplicado con éxito en el
tratamiento de la tuberculosis.
33.-¿Cómo actúan las cicloserinas?
R: Actúan inhibiendo la incorporación de D-Alanina en el peptidoglicano de las paredes
bacterianas, bloqueando la alanin-racemasa (enzima que incorpora D-Alanina al peptidoglicano).
Esto se debe a que el antibiótico presenta una estructura similar a la D-Alanina.
34.-¿Qué antibióticos alteran la permeabilidad de la membrana?
R: Anfotericina B, Polimixina, Nistatina
35.-¿Qué es la Anfotericina B?
R: Es un antibiótico producido por una especia de streptomyces.
36.-¿Cómo actua la Anfotericina B?
R: Inhibe intensamente el crecimiento de varios hongos patógenos, tanto in vivo como in vitro. La
anfotericina se liga a los esteroles de la membrana celular del hongo y trastorna su función.
37.-¿Qué es la polimixina?
R: Es un antibiótico que recubre la membrana celular de las bacterias y destruye su función
osmótica de barrera de la permeabilidad selectiva.
38.- ¿Cómo actúa la polimixina?
R: Actúan como detergentes catiónicos. Son bactericidas enérgicos para bacilos Gram (-),
incluyendo Pseudomonas resistentes a otros antibióticos que pueden causar septicemia.
39.-¿Cómo actúa la Nistatina?
R: Es eficaz en infecciones por Candida y hongos en general. Su actividad se complementa con la
de la Anfotericina B.
40.-¿ Qué antibióticos inhiben la síntesis proteica?
R: Streptomicina, Tetraciclina, Cloramfenicol
41.-¿ Que es la streptomicina?
R: Es un antibiótico producido por Streptomyces griseus.
42.-¿Cómo actua la streptomicina?
R: Se une a la subunidad 30S del ribosoma, cambiando su conformación, lo que impide la
interacción entre el codón del mRNA y el anticodón del tRNA. El mensaje puede ser leído
deficientemente produciendo proteínas no funcionales. Es un bactericida efectivo tanto contra
bacterias Gram(+) como Gram (-).
43.-¿Cómo actúa la tetraciclina?
R: Impide la unión de nuevos aminoácidos a la cadena polipeptídica naciente porque se une a la
subunidad 30S del ribosoma bacteriano y bloquea la inserción del tRNA cargado con aminoácidos.
Es producida por algunas especies del género Streptomyces, existiendo una variedad de
compuestos isomórficos de tetraciclina. Las tetraciclinas son principalmente agentes
bacteriostáticos.
44.-¿Qué es el cloranfenicol?
R: Es una sustancia que se obtiene del cultivo de Streptomyces venezuelae.
45.-¿Cómo actúa el cloranfenicol?
R: Es un efectivo agente inhibitorio de la síntesis proteica. Bloquea la unión de los aminoácidos de
la cadena peptídica naciente en la unidad 50S de los ribosomas, interfiriendo con la acción de la
peptidil-transferasa. El cloramfenicol es, principalmente, un bacterisotático. Esta inhibición se
debe a que el antibiótico se fija a la unidad 50S.
46.-¿Qué antibióticos constituyen el grupo de los antibióticos de amplio espectro?
R: El cloramfenicol con las tetraciclinas, son eficaces contra un mayor número de
microorganismos, incluyendo bacterias Gram (+) y Gram (-).
47.-¿Qué antibióticos inhiben la síntesis de ácidos nucleicos?
R: Ácido Nalidíxico, Rifampicina
48.-¿Cómo actúa el ácido nalidixico?
R: Inhibe la actividad de la enzima Girasa, que es la que permite el súper enrollamiento del DNA
49.-¿Qué es la rifampicina?
R: Es producida por Streptomyces mediterranei.
50.-¿Cómo actúa la rifampicina?
R: In vitro es efectiva contra algunos cocos Gram (+) y Gram (-). Este antibiótico se liga
fuertemente a la RNA polimerasa DNA dependiente libre, alterando su estructura y, por lo tanto,
inhibe la síntesis de RNA.
51.-Nombre los mecanismos por los cuales un microrganismo puede presentar resistencia a los
antibióticos.
R: Producción de enzimas que destruyen el medicamento activo- Los microrganismos cambian su
permeabilidad al medicamento.
52.- Nombre ejemplos de Enzimas que destruyan el medicamento activo.
R: Enzima B-lactamasa producida por staphylococcus, hidroliza a penicilina.
La cloranfenicol – acetil – transferasa, Destruye al cloranfenicol.
53.-Nombre ejemplos de cambio de permeabilidad a medicamentos.
R: Las tetraciclinas se acumulan en bacterias susceptibles, pero no en las resistentes.
54.-¿En que consiste la determinación de la sensibilidad de los microrganismos frente a los
antibióticos?
R: Son los procedimientos que se emplean para seleccionar el antibiótico de acción antibacteriana
mas eficaz sobre una determinada cepa microbiana. Se hace mediante un Antibiograma.
55.-¿En qué nos puede ayudar un antibiograma?
R: Este examen es necesario para completar el estudio de una cepa microbiana aislada de una
muestra patológica e identificada, pues permite conocer, in vitro, la sensibilidad a los diversos
antibióticos de uso en la práctica médica.
Lectura:
Espectro de acción del antibiótico
Los antibióticos y sus concentraciones se fabrican dentro de un rango que no sea tóxico en su
aplicación en quimioterapia. Una vez determinada la concentración apropiada se puede averiguar
su espectro de acción sobre una variedad de microorganismos.
Técnica: Se preparan placas que contengan medio de cultivo más el antibiótico a la concentración
determinada. Una vez solidificadas, se pone una plantilla numerada bajo cada placa y se siembran
diferentes cepas bacterianas por picadura o depositando una gota del cultivo. Luego de la
incubación se verifica qué cepas fueron capaces de crecer y cuáles no. Es importante no utilizar
cepas invasoras que dificultan la determinación.
Antibiograma (o Método por Difusión en Agar; o Método de Kirby Bauer)
Está basado en la propiedad que tienen los antibióticos de difundir a través del agar, de modo que
las cepas sembradas quedan en contacto con el antibiótico.
Los laboratorios comerciales han preparado discos especiales para este fin, llamados sensi-discos.
Cada uno de ellos está marcado claramente por ambos lados con una sigla que indica el antibiótico
que contiene. Son estables, pero de duración limitada.
Se pueden preparar discos en el laboratorio. Para esto se debe conocer la cantidad de líquido que
absorbe cada disco esterilizado, preparando una dilución de antibiótico adecuada, para que el
disco quede con una dosis determinada y útil. Los discos se deben guardar en el refrigerador.
Ejercen una gran influencia en los resultados obtenidos, el pH y la concentración del medio, la
cantidad de inóculo, la concentración del agar, el tiempo y temperatura de incubación.
En términos generales, existen escalas que se aplican a la lectura de los antibiogramas hechos con
el método de los discos de papel, una de las cuales es la siguiente:
Zona de Inhibición
0 a 10mm de diámetro
10 a 15mm de diámetro
15 a 25mm de diámetro
25mm o más de diámetro
Sensibilidad de la cepa
Resistente
Medianamente resistente
Sensible
Muy sensible
Realización del antibiograma
Depositar, con pipeta, un volumen de 0,1ml de la bacteria crecida en el medio de cultivo líquido,
sobre la placa de medio de cultivo sólido (Figura 1ª). Esparcir homogéneamente el inóculo con un
cotolín estéril. (Figura 1b)
ximo de tres discos distintos sobre la superficie del medio sólido
recién sembrado , como se observa en la (Figura 1c)
Interpretación: los diámetros de los halos de inhibición se traducen a las categorías de resistente
(R), intermedio (I), moderadamente sensible (MS) o sensible (S), de acuerdo a los criterios
interpretativos de la tabla 30-1
Determinación de la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI): Método de dilución de tubos
Los ensayos de dilución se usan para determinar la Mínima Concentración de un agente
antimicrobiano, requerida para inhibir o matar a un microorganismo determinado.
Técnicas: a partir de una solución stock del antibiótico a concentración conocida, se realizan
diluciones seriadas en caldo nutritivo estéril.
Las diluciones seriadas del agente antimicrobiano se inoculan con una suspensión estándar del
microorganismo y se incuban. La menor concentración del antibiótico a la que NO se observa
crecimiento visible se define como la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI).
Con este sistema se puede titular, rápidamente, la sensibilidad de un germen a una determinada
cantidad de antibiótico o agente quimioterapéutico.
Se requieren cepas puras de microorganismos y para cada sustancia a estudiar se utilizan varios
tubos que contienen las diluciones.
Es una técnica exacta en lo que se refiere a resultados “in vitro”, pero se utilizan esencialmente en
trabajos de investigación por la cantidad de material que se emplea y el tiempo que se necesita
para efectuarlo. NO SE REALIZARA EN LABORATORIO. SOLO TECNICA DE DIFUSION POR AGAR.
El medio normalmente utilizados es el medio de Müeller-Hinton, pero puede ser suplementado o
incluso sustituido para bacterias exigentes.
El método de dilución en caldo fue originariamente realizado en tubos de hemólisis (13*10 mm),
con un volumen de caldo con 1 mL de antimicrobiano (macrométodo). Hoy en día los sistemas
serológicos de dispensación y dilución han permitido su adaptación a microplacas de 96 pocillo,
utilizando volúmenes de 50-200 uL (micrométodo). El micrométodo permite testar un gran
número de antibióticos de forma sencilla, rápida y económica. Además ha hecho posible la
comercialización de esta técnica mediante el empleo de placas ya preparadas con las soluciones
antibióticas congeladas o desecadas.
Junto a la CMI es necesario a veces evaluar el efecto bactericida de un antibiótico sobre una
bacteria determinando la concentración mínima bactericida (CMB). La CMB se puede calcular
partiendo del método de dilución en caldo, generalmente macrométodo, y determinando la
proporción de bacterias viables después de 18-24 horas de contacto cone l caldo que contiene el
antibiótico.
En la determinación de la CMI mediante el método de dilución en caldo, al ir disminuyendo la
concentración de antibiótico se observará que no hay desarrollo de microorganismos por la
ausencia de turbidez, hasta llegar a un tubo a partir del cual comienza a haber un aumento de
turbidez y, por tanto, desarrollo bacteriano. Definimos la CMI como la mínima concentración de
antibiótico que inhibe el desarrollo de una bacteria. No obstante, si hacemos subcultivos de los
tubos donde no hay turbidez, observaremos que este proceso de inhibición bacteriana es
reversible a nivel del tubo de la cMI e incluso en concentraciones mayores. Esto aparece sobre
todo con antibióticos bacteriostáticos.
Con antibióticos bactericidas hay una concentración en la cual no pueden recuperarse bacterias
viables tras el subcultivo, y por tanto tampoco en concentraciones superiores. Esta concentración
es denominada concentración mínima bactericida (CMB) y se define como la menor concentración
de un antibiótico que reduce al 0,1% o menos el número de bacterias del inóculo original, o sea,
una reducción de 1.000 veces el inóculo original, o, lo que es lo mismo, reduce el inóculo inicial en
99,9%. Aunque esta definición es arbitraria, es la adoptada por la mayor parte de microbiólogos
clínicos.