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Nombre______________
Equipo_______________
1. Define la diferencia entre actividad enzimática y actividad enzimática específica.
2.Una preparación enzimática tiene una actividad específica de 74 U/mg de proteína y
contiene 21 mg de proteína/ml. Calcular la actividad enzimática en una mezcla de reacción
estándar que contiene:
a) 5 μl de la preparación enzimática;
b) 25 μl de la preparación enzimática
c) 50 μl de la preparación enzimática
3.Después de purificar la enzima LDH se determinó su actividad mediante la absorción del
NADH a 340nm (e= 6220 M-1 cm-1). La reacción se llevó acabo en un volumen total de
500μL de amortiguador de fosfatos pH 7.5 con 0.5 mM de piruvato y 4 mM de NADH, para
iniciar la reacción se adicionó 1μL de proteína a una concentración de 2μg/μL. Los datos
obtenidos son los siguientes:
Tiempo (min)
0
0.5
1.0
1.5
2.0
3.0
Absorbancia a 340 nm
1.20
1.1
0.99
0.90
0.80
0.60
Calcular la actividad específica de la LDH.
4. Al hacer una purificación de una enzima el extracto crudo tiene una actividad total de 45 U
y una actividad específica de 29 mU/mg. En el último paso de purificación se obtuvo una
actividad total de 19.8 U y una actividad específica de 780 mU/mg.
Calcular:
a) Cantidad de proteínas en mg en ambas fracciones.
b) Porcentaje de rendimiento
c) Factor de purificación.
5 Para purificar una determinada enzima, a partir de un extracto crudo que lo contiene, se
ensayan sucesivamente precipitaciones fraccionadas, cromatografía de intercambio iónico y
cromatografía de exclusión, con los resultados que registra la siguiente tabla:
a) Calcular el porcentaje de rendimiento después de cada una de las manipulaciones a las que
se le ha sometido
b) Indicar cuál es el paso de purificación más eficente.