Download RT-PCR Koekemoer (VP2)

Informes de los Laboratorios de referencia de la
OIE: Actividades del año 2012
Nombre de la enfermedad (o
tema) para el cual ha sido
designado como Laboratorio de
referencia de la OIE:
Peste equina Africana (PEA)
Dirección del Laboratorio:
Laboratorio Central de Veterinaria
Ctra. M-106 pk 1,4
28110 Algete (Madrid)
España
Teléfono:
+34913479277
Fax:
+34916290598
Dirección de correo electrónico:
cgomezte@magrama.es
Sitio web:
http://www.magrama.gob.es/es/ganaderia/temas/laboratorios/
Nombre (incluyendo título) del
jefe del laboratorio (responsable
oficial):
Dra. Montserrat Agüero
Nombre (incluyendo título y cargo)
del experto de referencia
de la OIE:
Dra. Concepción Gómez-Tejedor.
Fecha de presentación a la OIE:
Directora Adjunta
Coordinadora General de Laboratorios
25/01/2013
Instrucciones
Cada año, a finales de enero, y a menos que se indique lo contrario, los Laboratorios de referencia de la OIE
deben completar y presentar este formulario para dar cuenta de las actividades realizadas de enero a
diciembre del año anterior (2012).
Sólo se deberán mencionar aquellas actividades relativas a la enfermedad (o tema) objeto del reconocimiento
por parte de la OIE. La estructura del cuestionario respeta las recomendaciones del mandato para los
Laboratorios de referencia, disponible en: http://www.oie.int/es/nuestra-experiencia-cientifica/laboratoriosde-referencia/introducion/
Cada término de referencia (en cursiva y en azul en el texto) abarca un grupo de preguntas relacionadas con el
mismo.
El texto en rojo y en cursiva es puramente informativo y deberá suprimirlo y remplazarlo por sus datos. Los
ejemplos se basan en informes anuales anteriores y no se han inventado.
El cuestionario es una forma de reunir información sobre las actividades llevadas a cabo por los Laboratorios de
referencia de la OIE y poder difundirlas tanto a los Países Miembros de la OIE como a la red de Laboratorios de
referencia de la OIE.
Este informe anual permanecerá disponible para consulta en el sitio web de la OIE:
http://www.oie.int/es/nuestra-experiencia-cientifica/laboratorios-de-referencia/informes-anuales/
Informe anual de los Centros de referencia de la OIE, 2012
1
Laboratorio de referencia de la OIE para « Peste equina Africana » – « Concepción Gómez-Tejedor » – « Spain »
Mandato: Utilizar, promover y difundir los métodos de diagnóstico validados de acuerdo
con las normas de la OIE
Los siguientes métodos diagnósticos recogidos en el capítulo 2.5.1 del OIE Terrestrial Manual 2012 se
usan de rutina en el laboratorio:
- Aislamiento del VPEA en cultivos celulares BHK-21 y Vero.
- ELISA (AHS INGEZIM Compac Plus) para la detección de anticuerpos frente al VPEA usando como
antígeno un recombinante de VP7, según las indicaciones del fabricante (INGENASA).
- Neutralización viral (NV) permite la detección y titulación de anticuerpos neutralizantes en sueros de
animales, tal y como se describe en el Manual de Técnicas de diagnóstico y vacunas para los animales
terrestres (OIE).
- La RT-PCR en tiempo real (RRT-PCR) desarrollada por Agüero et al., 2008, basada en una sonda taqman
MGB, es usada rutinariamente en nuestro laboratorio. Permite la detección de genoma del virus de la PEA
con alta sensibilidad, aunque sin diferenciar serotipos.
- RT-PCR convencional (Zientara et al; 1995). Permite la detección de genoma del virus de la PEA sin
diferenciar serotipos.
- RT-PCRs convencionales (Sailleau et al., 2000) que permiten la detección específica de cada uno de los
nueve serotipos del virus de la Peste Equina Africana. Así mismo usando los mismos pares de primers se
puede proceder a la secuenciación de segmentos de la VP2.
- RRT-PCRs (Koekemoer et al., 2008), basadas en sondas de hibridación, que permiten la detección
específica de cada uno de los nueve serotipos del virus de la Peste Equina Africana. Así mismo usando los
mismos pares de primers se puede proceder a la secuenciación de segmentos de la VP2.
Pruebas recomendadas por la OIE
Total de pruebas efectuadas el año anterior
Pruebas de diagnóstico indirectas
A escala nacional
-ELISA
305 (diagnóstico)
A escala internacional
91 (preparación AHS proficiency
test 2012))
NV
128 (titulación sueros
experimentales)
Pruebas de diagnóstico directas
A escala nacional
Inoculación en cultivos celulares (VERO)
10 (producción nuevos lotes de
VPEA o virus de Encefalosis)
RRT-PCR Agüero et al ( VP7)
1057 (puesta a punto RRT-PCRs
específicas de serotipo
desarrolladas en LCV)
A escala internacional
612 (preparación AHS proficiency
test 2012)
13 (diagnóstico)
2
RRT-PCRs para el gen codificante de la VP2
1521 (puesta a punto RRT-PCRs
específicas de serotipo
desarrolladas en LCV)
RT-PCR Zientara et al ( VP7)
32 (secuenciación para estudio
filogenético)
RT-PCR Koekemoer (VP2)
32(secuenciación para estudio
Informe anual de los Centros de referencia de la OIE, 2012
Laboratorio de referencia de la OIE para « Peste equina Africana » – « Concepción Gómez-Tejedor » – « Spain »
filogenético)
Secuenciación (VP7 y VP2)
62 (muestras brote España 19871990 para estudio filogenético)
Mandato: Desarrollar material de referencia de acuerdo a las disposiciones de la OIE e
implementar y promover la aplicación de las normas de la OIE.
Conservar y distribuir a los laboratorios nacionales los productos biológicos de
referencia y cualquier otro reactivo utilizado para el diagnóstico y control de los
agentes patógenos o enfermedades para los cuales ha sido designado.
2.
¿Su laboratorio produjo o almacenó reactivos importados de referencia estándar oficialmente
reconocidos por la OIE o por otros organismos internacionales?
Sí
3.
No
¿Su laboratorio distribuyó reactivos de referencia estándar a otros Países Miembros de la OIE?
Sí
Tipo de reactivo
disponible
Prueba de
diagnóstico
relacionada
No
Cantidad
suministrada a
escala
internacional
(ml, mg)
Nombre de los
Países Miembros
de la OIE o de las
instituciones
beneficiarias
10 ml/virus
600 µl/ muestra (10
muestras por país,
ensayo de
intercomparación)
22 países
participantes (19
EU, Suiza y , 2
lab.Marruecos)
10 ml/suero
300 µl/ muestra (10
muestras por país
participante en el
ensayo de
intercomparación )
28 países
participantes (22
EU, Suiza, Reino
Unido , 2 lab.
Marruecos, Túnez y
Turquía)
Producido/
almacenado
Colección de virus
que incluye los
nueve serotipos
de referencia
RT-PCR
40 ml/
serotipo
Sueros de
referencia frente
a cada uno de los
nueve serotipos.
ELISA/VN
200 ml/
serotipo
VPEA de los
serotipos 2, 3 y 9
y Virus de la
Encefalosis,
enviados en el
ensayo de
intercomparación
organizado por el
laboratorio de
referencia
europeo.
Suero equino
enviado en el
ensayo de
intercomparación
organizado por el
laboratorio de
referencia
europeo (5
diferentes)
RT-PCR
ELISA
Cantidad
suministrada a
escala nacional
(ml, mg)
Informes anuales de los Laboratorios de referencia de la OIE, 2012
3
Laboratorio de referencia de la OIE para « Peste equina Africana » – « Concepción Gómez-Tejedor » – « Spain »
4.
¿Su laboratorio produjo reactivos de diagnóstico distintos a los de referencia estándar aprobados por
la OIE?
Sí
5.
No
¿Su laboratorio produjo vacunas?
Sí
6.
No
¿Su laboratorio suministró vacunas a otros Países Miembros de la OIE?
Sí
No
Mandato: Desarrollar, estandarizar y validar según las normas de la OIE, nuevos métodos
de diagnóstico y de control para el o los agentes patógenos o enfermedades para
los cuales ha sido designado.
7.
¿Su laboratorio desarrolló nuevos métodos de diagnóstico validados según las normas de la OIE para
el agente patógeno o la enfermedad para los que ha sido designado?
X Sí
8.
No
¿Su laboratorio desarrolló nuevas vacunas de acuerdo con las normas de la OIE para el agente
patógeno o enfermedad para los que ha sido designado?
Sí
Nombre de la nueva prueba, método de
diagnóstico o vacuna desarrollada
-
-
Optimización los ensayos de RRTPCR específicos para los serotipos
1, 6 y 8
Combinación en formato multiplex
de las RRT-PCRS específicas para
los serotipos 3, 5 y 7
No
Descripción y referencias (publicaciones, sitio web, etc.)
Tena, C. Further studies in RRT-PCR for AHS. . Annual
meeting of EU National African Horse Sickness (AHS)
Reference labs. Guildford (UK), 4th December 2012
Mandato: Suministrar servicios de diagnóstico y, cuando sea apropiado, proporcionar
asesoramiento científico y técnico sobre las medidas de control de las
enfermedades animales en los Países Miembros de la OIE.
9.
¿Su laboratorio llevó a cabo servicios de diagnóstico para otros Países Miembros de la OIE?
Sí
10.
No
¿Su laboratorio suministró asesoramiento en consultas técnicas a solicitud de un País Miembro de la
OIE?
Sí
No
Mandato: Liderar y/o coordinar estudios científicos y técnicos en colaboración con otros
laboratorios, centros o instituciones.
11.
¿Su laboratorio participó en estudios científicos internacionales en colaboración con otros Países
Miembros de la OIE distintos al suyo?
Sí
4
No
Informe anual de los Centros de referencia de la OIE, 2012
Laboratorio de referencia de la OIE para « Peste equina Africana » – « Concepción Gómez-Tejedor » – « Spain »
Mandato: Recolectar, tratar, analizar, publicar y difundir los datos epizootiológicos
pertinentes sobre los agentes patógenos o las enfermedades para los cuales ha
sido designado.
12.
¿Su laboratorio colectó datos epizootiológicos pertinentes para el control internacional de la
enfermedad?
Sí
13.
¿Su laboratorio divulgó datos epidemiológicos procesados y analizados?
Sí
14.
No
No
¿Cuál es el método de divulgación de la información más utilizado por su laboratorio?
(Indique en la casilla apropiada la cantidad por categoría)
a)........................................................................................................................ Artículos publicados
en periódicos revisados por especialistas: .......................................................
b) ................................................................................................. Conferencias
internacionales: .................................................................................................
c) ................................................................................................. Conferencias
nacionales: .........................................................................................................
d) ................................................................................................. Otro:
Presentaciones en reuniones internacionales ................................................... 4
Vigo, M. AHS Interlaboratory comparison test 2012. Annual meeting of EU National African Horse
Sickness (AHS) Reference labs. Guildford (UK), 4th December 2012.
Tena, C. AHS Interlaboratory comparison test 2012: SEROLOGY AND RT-PCR RESULTS
Annual meeting of EU National African Horse Sickness (AHS) Reference labs. Guildford (UK), 4th
December 2012.
Agüero, M. Retrospective study: AHS Spanish outbreak 1987-90. Annual meeting of EU National
African Horse Sickness (AHS) Reference labs. Guildford (UK), 4th December 2012.
Tena, C. Further studies in RRT-PCR for AHS. . Annual meeting of EU National African Horse
Sickness (AHS) Reference labs. Guildford (UK), 4th December 2012.
Comunicar informaciones científicas y técnicas al personal de los Países
Miembros de la OIE.
Ofrecer formación científica y técnica para el personal de los Países Miembros de
la OIE.
Recomendar las pruebas de vacunas prescritas y alternativas como normas de la
OIE.
15.
¿Su laboratorio ofreció formación científica y técnica al personal de laboratorio de otros Países
Miembros de la OIE?
Sí
No
a)........................................................................................................................ Visitas
...........................................................................................................................
técnicas:
b)........................................................................................................................ Seminarios:
Informes anuales de los Laboratorios de referencia de la OIE, 2012
5
Laboratorio de referencia de la OIE para « Peste equina Africana » – « Concepción Gómez-Tejedor » – « Spain »
c) ........................................................................................................................ Cursos de formación
práctica: .............................................................................................................
d)........................................................................................................................ Prácticas (>1 mes):
...........................................................................................................................
Mandato: Mantener un sistema de seguridad cualitativo y de bioseguridad pertinente para
los agentes patógenos y las enfermedades designadas.
16.
¿Su laboratorio cuenta con un sistema de gestión de calidad certificado según una norma
internacional?
Sí
No
Sistema de gestión de calidad adoptado
UNE EN ISO 17025
UNE EN ISO 14001
17.
¿Su laboratorio ha recibido la acreditación emitida por de un organismo autorizado?
Sí
No
Prueba objeto de su acreditación
Organismo de acreditación
Detección de anticuerpos frente al virus de la peste equina africana mediante
ELISA en suero de équidos
ENAC
Detección de orbivirus mediante cultivo celular (Virus de la lengua azul, Virus
de la peste equina africana, Virus de la enfermedad epizoótica hemorrágica
del ciervo) en muestras de sangre completa no coagulada, bazo, pulmón y
nódulos linfáticos.
ENAC
Detección-identificación del virus de la peste equina africana mediante RTPCR a tiempo real, en muestras de vísceras animales, sangre y cultivos
celulares
ENAC
Serotipificación de virus del género Orbivirus por neutralización (Virus de la
lengua azul, Virus de la peste equina africana, Virus de la enfermedad
epizoótica hemorrágica del ciervo) en suero de rumiantes y équidos
ENAC
18. ¿Su laboratorio mantiene un sistema de gestión del ‘riesgo biológico’ para los patógenos y otras
enfermedades designadas? (Ver Manual de las pruebas de diagnóstico y de las vacunas para los animales
terrestres 2012, Capítulo 1.1.3. o Manual de pruebas de diagnóstico para los animales acuáticos 2012,
Capítulo 1.1.1.)
Sí
No
Mandato: Organizar y participar en reuniones científicas en nombre de la OIE.
19.
¿Su laboratorio organizó reuniones científicas en nombre de la OIE?
Sí
20.
¿Su laboratorio participó en reuniones científicas en nombre de la OIE?
Sí
6
No
No
Informe anual de los Centros de referencia de la OIE, 2012
Laboratorio de referencia de la OIE para « Peste equina Africana » – « Concepción Gómez-Tejedor » – « Spain »
Mandato: Establecer y mantener la comunicación con la red de laboratorios de referencia
de la OIE designados para el mismo agente patógeno o la misma enfermedad y
organizar regularmente ensayos entre laboratorios para garantizar la
comparabilidad de los resultados.
21.
¿Su laboratorio intercambió información con otros Laboratorios de referencia designados para el
mismo agente patógeno o enfermedad?
Sí
22.
No
¿Su laboratorio participó en el mantenimiento de una red de Laboratorios de referencia designados
para el mismo agente patógeno o enfermedad mediante la organización o participación en pruebas de
idoneidad?
Sí
23.
No
¿Su laboratorio colaboró con otros Laboratorios de referencia designados para el mismo
agente patógeno o enfermedad en proyectos de investigación científica para el diagnóstico o
control de agentes patógenos de interés?
Sí
No
Nombre del proyecto o
contacto
Ámbito de aplicación
Lab Ref OIE para AHS
Intercambio de virus
Nombre(s) de los Laboratorios de referencia
pertinentes
Laboratorios de referencia de la OIE sobre la Peste
Equina de Pirbright
Mandato: Organizar ensayos “inter-laboratorios” con laboratorios diferentes a los
laboratorios de referencia de la OIE para los mismos agentes patógenos o las
mismas enfermedades con el fin de asegurar la equivalencia de los resultados.
24.
¿Su laboratorio organizó o participó en pruebas de idoneidad ‘inter-laboratorios’ con otros
laboratorios que no forman parte de la red de Laboratorios de referencia de la OIE para la misma
enfermedad?
Sí
No
Objetivo de las pruebas de comparación1 interlaboratorios
No. de
laboratorios
participantes
Países Miembros de la OIE
participantes
Organización de un ensayo de intecomparación de
aptitud para la evaluación de los métodos de
diagnóstico (detección de anticuerpos y genoma viral)
28
22 UE países, Suiza, Turquía,
Marruecos, Túnez
Mandato: Poner a disposición de la OIE expertos consultores.
25.
¿Su laboratorio puso a disposición de la OIE expertos consultores?
X Sí
No
Sí cuando ha sido requerido. Por requerimiento de la OIE dos personas del laboratorio participaron en una
reunión del capítulo de AHS del Manual Terrestre.
Informes anuales de los Laboratorios de referencia de la OIE, 2012
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Laboratorio de referencia de la OIE para « Peste equina Africana » – « Concepción Gómez-Tejedor » – « Spain »
“Meeting of the Bureau of the OIE Biological Standards Commission and Selected Experts to update the Terrestrial
Manual,
Paris, 7–8 February 2012”
Los expertos del laboratorio están siempre a disposición de la OIE cuando ésta lo considere oportuno
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Informe anual de los Centros de referencia de la OIE, 2012