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Med Clin (Barc). 2010;134(6):254–256
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Original breve
El polimorfismo M129V del gen PRNP en la población de Castilla y León
presenta una distribución similar a otras regiones de España y paı́ses europeos
Andrés Castellanos a, Marta Pérez Prieto a, Javier Castrodeza b, José Antonio Mirón Canelo c y
Rogelio González-Sarmiento a,d,
a
Unidad de Medicina Molecular, Departamento de Medicina, Facultad de Medicina, Universidad de Salamanca, Salamanca, España
Departamento de Medicina Preventiva y Salud Pública, Facultad de Medicina, Universidad de Valladolid, Valladolid, España
c
Departamento de Medicina Preventiva, Salud Pública y Microbiologı́a Médica, Facultad de Medicina, Universidad de Salamanca, Salamanca, España
d
Centro de Investigación del Cáncer (CIC-IBMCC), Universidad de Salamanca-CSIC, Salamanca, España
b
I N F O R M A C I Ó N D E L A R T Í C U L O
R E S U M E N
Historia del artı́culo:
Recibido el 22 de diciembre de 2008
Aceptado el 1 de septiembre de 2009
On-line el 9 de diciembre de 2009
Fundamento y objetivo: En humanos se ha descrito que el polimorfismo de la posición 129 (M129V) del
gen PRNP tiene un efecto modificador del fenotipo en enfermedades producidas por priones. Hasta el
momento, todos los casos diagnosticados de variante de la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob han sido
homocigotos para el alelo 129M. En los últimos 5 años se han comunicado en España 5 casos de variante de
la enfermedad de Creutzfeld-Jakob, de los que 3 han aparecido en Castilla y León. Dado que se han
comunicado diferencias en la frecuencia de este polimorfismo entre la población mundial, hemos
estudiado la frecuencia de los genotipos del polimorfismo V129M en la población de Castilla y León para
determinar si existe un mayor riesgo en esta comunidad española.
Pacientes y método: Hemos estudiado la región del gen PRNP que contiene el codón 129 en 110 individuos
sanos procedentes de Castilla y León mediante reacción en cadena de la polimerasa y digestión con la
endonucleasa de restricción NspI. La comparación entre grupos se realizó mediante el estadı́stico de
contraste ji al cuadrado y con el paquete de análisis estadı́stico SPSS v10.15.
Resultados: Nuestro trabajo demuestra que la distribución de los genotipos del polimorfismo V129M es
similar a la descrita en otras poblaciones españolas y europeas, por lo que el riesgo de desarrollar la
enfermedad en la población castellanoleonesa serı́a similar al de otras regiones.
Conclusiones: Desde el punto de vista genético el riesgo de desarrollo de enfermedades producidas por
priones en la población castellanoleonesa es similar al de otras regiones.
& 2008 Elsevier España, S.L. Todos los derechos reservados.
Palabras clave:
Polimorfismo
Prion
Gen
PRNP
Encefalopatı́a espongiforme bovina
M129V PRNP gene polymorphism in Castilla y León shows a similar distribution
to other Spanish regions and other European countries
A B S T R A C T
Keywords:
Polymorphism
Prion
Gene
PRNP
Bovine spongiform encephalopathy
Background and objective: It has been reported that the polymorphism M129V in the PRNP gene modifies
the phenotype in all the subtypes of prion diseases in humans. All cases diagnosed to date as suffering the
human variant of mad cow disease (vCJD) carry the allele 129M. In the last five years five cases of vCJD have
been reported in Spain, three of them in Castilla y León (in western Spain). Observation of differences in the
genotypic frequency of this polymorphism in different populations prompted us to analyze the distribution
of genotypes of the V129M polymorphism in a population from Castilla y León to determine if there is an
increased risk to develop vCJD in this region of Spain.
Patients and method: We studied the coding region of the PRNP gene containing codon 129 in 110 healthy
individuals from Castilla y León. We amplified the DNA by PCR and allelic discrimination was performed
after digestion with restriction enzyme NspI. Comparison between groups was performed by X2 test.
Results: Our results show a distribution of genotypes of the V129M polymorphism in the population from
Castilla y León which is similar to other Spanish and European populations.
Conclusions: From the genetic point of view, the risk of people from Castilla y León to suffer vCJD should be
similar to that of the other Spanish regions.
& 2008 Elsevier España, S.L. All rights reserved.
Autor para correspondencia.
Correo electrónico: gonzalez@usal.es (R. González-Sarmiento).
0025-7753/$ - see front matter & 2008 Elsevier España, S.L. Todos los derechos reservados.
doi:10.1016/j.medcli.2009.09.005
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A. Castellanos et al. / Med Clin (Barc). 2010;134(6):254–256
Introducción
Las enfermedades causadas por priones en humanos son
consecuencia de la acumulación de proteı́na priónica (PRPsc) en
el sistema nervioso central, que da lugar a sı́ntomas neurológicos
y psiquiátricos con un desenlace mortal1,2. Se han descrito formas
familiares de enfermedades priónicas asociadas a mutaciones
heredadas en el gen PRNP, aunque la mayorı́a de los casos son
esporádicos (85%). Asimismo, existen formas adquiridas de la
enfermedad, que incluyen las formas iatrogénicas y la forma
variant Creutzfeldt-Jakob disease (vCJD, variante de la enfermedad
de Creutzfeldt-Jakob) asociada al consumo de carne bovina
infectada.
El gen del prion humano se localiza en la región cromosómica
20p12.3. Consta de 2 exones de 134 y 2.355 pares de bases,
separados por un intrón de 12.696 pares de bases y la región
codificante está localizada ı́ntegramente en el segundo exón3. Este
gen codifica una proteı́na de 253 aminoácidos altamente conservada en los mamı́feros.
A pesar del alto grado de conservación de la proteı́na priónica
en mamı́feros, se han descrito polimorfismos en la población
humana, con frecuencias variables en diferentes poblaciones. De
todos estos, el polimorfismo de la posición M129V (metionina
o valina) es el más común y el que muestra un efecto más claro
tanto en relación con la susceptibilidad como con las variaciones
fenotı́picas de las enfermedades priónicas. El polimorfismo
M129V tiene un efecto modificador del fenotipo en todas las
categorı́as de la enfermedad4. Ası́, todos los casos testados hasta la
fecha diagnosticados de vCJD son homocigotos para el alelo 129M.
Tan sólo se ha descrito un caso heterocigoto tras recibir una
donación de sangre de un individuo afectado de vCJD en el que se
observó acumulación de proteı́nas priónicas en el sistema
linforreticular, pero que falleció por causas no relacionadas5. En
modelos animales que expresan la forma humana del gen PRNP
con el polimorfismo 129V, se ha demostrado la capacidad de este
polimorfismo para prevenir la aparición de vCJD6.
No obstante, otros polimorfismos modificadores de la susceptibilidad de enfermedades producidas por priones podrı́an estar
implicados también en la variante vCJD7.
En los últimos 4 años, se han comunicado 5 casos de vCJD en
España, de los que 3 se han diagnosticado en Castilla y León.
Aunque existen otros 2 estudios previos en los que se refleja la
distribución de este polimorfismo en la población de Cantabria y
Cataluña8,9. Hasta el momento no se ha analizado este polimorfismo en la población castellanoleonesa.
Pacientes y método
Hemos estudiado la distribución de los genotipos del polimorfismo M129V en una cohorte de 110 individuos sanos (48 varones
y 62 mujeres) nacidos en Castilla y León que no han tenido ningún
tipo de enfermedad neurológica durante su vida. La edad media
fue de 53 años, con un intervalo de edad de 25 a 82. Todas las
muestras se obtuvieron previo consentimiento informado, según
la normativa para los estudios clı́nicos en España y del Comité de
Ética del Hospital Universitario de Salamanca.
El ADN se obtuvo a partir de las células nucleadas de sangre
periférica mediante la lisis con proteinasa K en tampón fornace
y posterior extracción con una mezcla de fenol-cloroformo y
precipitación con etanol absoluto. Una secuencia genómica de
755 pb del gen PRNP que contiene el codón 129 se amplificó
mediante polymerase chain reaction (PCR, ‘reacción en cadena de la
polimerasa’) en un termociclador automático con los oligonucleótidos 50 ACTGAGAATTCTCTGACATTCTCCTCTTCA30 y 50 TACTGCGGATCCCTCAAGCTGGAAAAAGA30 en las siguientes condiciones:
255
30 s a 94 1C para la desnaturalización, 30 s a 57 1C para el anillamiento
de los cebadores y 2 min a 72 1C para la extensión de las cadenas,
con una extensión final de 10 min. Con el fin de eliminar cualquier
posible amplificación cruzada, tanto la manipulación de las
muestras como la preparación de las reacciones de PCR se
realizaron en campana de flujo laminar con material resistente a
aerosoles. Además, se incluyó en todos los casos una reacción sin
ADN molde, a modo de control de la reacción. Para comprobar
la especificidad de las reacciones, 10 ml de los productos de PCR
se visualizaron mediante electroforesis en geles de agarosa al
1% en tris-borato-EDTA (TBE) 0.5X y tinción con bromuro de
etidio para su visualización con luz ultravioleta. Los genotipos
se caracterizaron mediante la endonucleasa de restricción NspI,
que reconoce un único sitio (PuCATG*Py) en la región del
gen PRNP en el caso de que el codón 129 codifique valina,
mientras que cuando el codón 129 codifica metionina aparece un
sitio nuevo, lo que permite la discriminación alélica. Para esto, se
digirieron 10 ml de los productos de PCR con 10 U de la enzima de
restricción a 37 1C al menos durante 2 horas y, posteriormente, se
analizaron mediante electroforesis en geles de agarosa de alta
resolución NuSieve (3:1) al 4% junto con marcadores de peso
molecular y posterior visualización con luz ultravioleta en
presencia de bromuro de etidio (0,5 mg/ml). En casos homocigotos
para el alelo 129V, se observaron 2 fragmentos de 328 y 427 pb,
mientras que en casos homocigotos para el alelo 129M se
observaron 3 fragmentos de 328, 352 y 75 pb, respectivamente.
En los casos heterocigotos se observaron los 4 fragmentos antes
descritos.
El análisis de las frecuencias alélicas obtenidas se realizó
mediante el estadı́stico de contraste ji al cuadrado para el análisis
de 2 variables con 2 o 3 categorı́as en una tabla de contingencia,
con el paquete de análisis estadı́stico SPSS v10.15. Además, una
vez realizadas las correspondientes comparaciones de diferencias
entre proporciones de muestras independientes de las distintas
poblaciones a través de la prueba Z, y sobre la base de ésta, se
estableció que el valor igual o superior a 1,96 para un nivel de
confianza del 95% (po0,05) determinaba las diferencias significativas.
Resultados
El genotipado del polimorfismo del codón 129 del gen PRNP en
110 individuos sanos procedentes de Castilla y León ha puesto de
manifiesto que la proporción de homocigotos en la población
castellanoleonesa es del 42,7 y del 10,9% para los alelos Met y Val,
respectivamente, con una proporción de heterocigotos del 46,4%
(tabla 1). La comparación de estos resultados con los publicados
hasta la fecha en paı́ses del entorno europeo pone de manifiesto
que no existen diferencias significativas entre las diferentes
poblaciones analizadas (tabla 1).
Discusión
Se han descrito diferencias en la frecuencia del polimorfismo
en el codón 129 en la población mundial. En el norte de Europa, la
frecuencia del alelo 129M es del 0,65%, se incrementa hacia el sur
y es mayor aún en África y Asia10.
Dada la aparente protección que concede la presencia del alelo
129V del gen PRNP para tener la enfermedad vCJD y el efecto
modificador que tiene este polimorfismo sobre la formas
esporádicas y heredadas de las enfermedades producidas por la
proteı́na PrP, resulta de especial importancia conocer la distribución alélica de este polimorfismo en las poblaciones susceptibles.
Nuestros resultados muestran que más de la mitad de la población
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Tabla 1
Distribución de los genotipos del polimorfismo en el codón 129 del gen PRNP en diferentes poblaciones europeas
Austria (n ¼ 300)
Dinamarca (n ¼ 352)
Eslovaquia (n ¼ 613)
Finlandia (n ¼ 1.957)
Francia (n ¼ 1.374)
Grecia (n ¼ 348)
Holanda (n ¼ 282)
Irlanda (n ¼ 203)
Islandia (n ¼ 208)
Italia (n ¼ 186)
Polonia (n ¼ 109)
Reino Unido (n ¼ 300)
Cantabria (n ¼ 268)
Cataluña (n ¼ 224)
Castilla y León (n ¼ 110)
Met/Met(%)
Met/Val(%)
Val/Val(%)
43
37
48
49
45
50
40
34
47
45
45
42
42
43
43
49
48
43
42
46
39
50
56
45
40
39
47
42
42
46
8
15
9
9
9
11
10
10
9
15
16
11
16
15
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Met: alelo Met; Val: alelo Val.
de Castilla y León tendrı́a un riesgo bajo de desarrollar la
enfermedad. Puesto que hemos encontrado una distribución
profundamente similar a la del entorno europeo, no cabe esperar,
en el caso de una posible epidemia de vCJD, una gran diferencia en
la incidencia de esta enfermedad en Castilla y León con respecto a
otras regiones y paı́ses europeos.
Conflicto de intereses
Los autores declaran no tener ningún conflicto de intereses.
Financiación
La Dirección General de Salud Pública de la Junta de Castilla y
León ha financiado este trabajo.
Agradecimientos
A Nieves Mateos por la ayuda técnica.
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