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MINISTERIO DE SALUD
INSTITUTO NACIONAL DE SALUD
CENTRO DE INFORMACIÓN Y DOCUMENTACIÓN CIENTÍFICA
CARACTERIZACION ANTIGENICA Y
GENETICA PARA DETERMINAR LA
FILOGENIA DEL VIRUS DE LA RABIA
EN EL DEPARTAMENTO DE PUNO EN
EL PERIODO 1998 - 2002
SERIE INFORMES TÉCNICOS Nº52
RENÉ EDGAR CONDORI CONDORI
RICARDO LUIS LOPEZ INGUNZA
2006
CARACTERIZACION ANTIGENICA Y GENETICA PARA DETERMINAR LA FILOGENIA DEL VIRUS DE LA RABIA
EN EL DEPARTAMENTO DE PUNO EN EL PERIODO 1998 - 2002
CODIGO OGITT N° 2-01-05-02-020
CARACTERIZACION ANTIGENICA Y GENETICA PARA DETERMINAR LA FILOGENIA DEL
VIRUS DE LA RABIA EN EL DEPARTAMENTO DE PUNO EN EL PERIODO 1998 - 2002
Autores:
René Edgar Condori Condori
Ricardo Luis Lopez Ingunza
EJECUCION: CENTRO NACIONAL DE SALUD PUBLICA 2003 – 2006
RESUMEN
La incidencia anual de casos de rabia en el departamento de Puno en estos últimos años y
variabilidad de huéspedes afectados tales como canes, porcinos, Bovinos y el hombre ha
permitido realizar el estudio de caracterización antigénica y genética del virus de la rabia, para
ello se empleo la técnica de anticuerpos monoclonales y el secuenciamiento genético de una
región del gen de la Nucleoproteína “N”, se incluyeron en el estudio 75 muestras positivas a
Inmunofluorescencia Directa correspondiente a diferentes especies de animales y casos
humanos entre 1998 y 2002 de estos solo fue posible reactivar 44 cepas de los cuales 40
fueron caracterizados como variante antigénica 1, y 04 que no fue posible determinar la
variante (03 porcinos y 01 humano), para el estudio genético fueron seleccionados 12 cepas
caracterizadas como variante antigénica 1 y 03 cepas no definidas, además se incluyo como
control cepas de laboratorio CVS y PV y una cepa del año 2003, las técnicas moleculares RT PCR y el secuenciamiento genético permitieron confirmar que este departamento solo circula la
variante antigénica 1 que a su vez presenta 03 sub variantes al que denominamos Var 1a, Var
1b y Var 1c los cuales se diferencia en temporalidad y ubicación geográfica siendo la que tuvo
mayor distribución en área de cobertura la sub variante antigénica Var 1c que se distribuyo
desde las provincias fronterizas con Bolivia (Chuchito y Yunguyo) hasta las Provincias de
Melgar y Azangaro, y desapareció para el año 2001 simultáneamente en ese año aparece una
nueva sub variante Var 1b que suponemos que aun circula en la actualidad, la presión de
selección en cada especie, juega un rol preponderante en la variabilidad genética del virus lo
que fue observado al analizar la filogenia de los casos de rabia en este departamento.
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CARACTERIZACION ANTIGENICA Y GENETICA PARA DETERMINAR LA FILOGENIA DEL VIRUS DE LA RABIA
EN EL DEPARTAMENTO DE PUNO EN EL PERIODO 1998 - 2002
INTRODUCCION
La enfermedad de la Rabia es causado por un virus neurotrópico que presenta un genoma de
tipo ARN cadena simple y de polaridad negativa, toda la información genética está contenida
en aproximadamente 12000 nucleótidos, formado por cinco genes que codifican cinco
proteínas estructurales en el siguiente orden N, NS, M, G y L (Wunner et al. 1988; Tordo) El
genotipo rabia presenta once variantes antigénicas de los cuales el perro es el reservorio de la
variante antigénica 1 y variante antigénica 2, la rabia presenta dos ciclos de transmisión bien
diferenciados en el Perú, el perro domestico es el principal reservorio activo del ciclo urbano y
el murciélago hematófago desmodus rotundus es el principal reservorio el ciclo silvestre, la
transmisión de esta enfermedad ocurre de un mamífero a otro incluyendo al hombre
espontáneamente
Durante los últimos años continuamente se viene presentando casos de rabia humana
transmitida por perro en el departamento de Puno, asi como casos en bovinos, Porcinos,
perros (can) y Camélidos sudamericanos (Alpaca), por lo tanto cobra importancia la necesidad
de realizar la caracterización antigénica y genética del virus de la rabia para determinar la
filogenia y establecer genéticamente el reservorio de los casos de rabia entre 1998 y 2002 en
los diferentes animales afectados objetivos que fueron parte del presente estudio
MATERIALES Y METODOS
En el estudio fueron incluidos 75 muestras con resultado positivo por Inmunofluorescencia
Directa (IFD) provenientes del departamento de Puno
entre los años 1998 y 2002, (17
muestras 1998, 29 muestras 1999, 05 muestras 2000, 21 muestras 2001 y 03 muestras 2002)
estas muestras se encuentran guardadas a – 80°C, se proceso la muestra siguiendo el
procedimiento descrito en el manual de diagnostico de rabia del INS, la suspensión de tejido
encefálico se inoculo en ratones albinos de 21 días y de 11 – 14 gramos de peso, por cada
muestra se emplearon 8 ratones, cuando los ratones presentaron los síntomas fueron
sacrificados y se extrajo el cerebro como material de estudio para la caracterización antigénica
y genética como control positivo se utilizo cepa de laboratorio CVS (Challenger Virus Standard)
y PV (Pasteur Virus)
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CARACTERIZACION ANTIGENICA Y GENETICA PARA DETERMINAR LA FILOGENIA DEL VIRUS DE LA RABIA
EN EL DEPARTAMENTO DE PUNO EN EL PERIODO 1998 - 2002
La caracterización antigénica se realizo mediante la técnica de inmunofluorescencia Indirecta
para lo cual se realizaron 8 improntas de cerebro de ratón infectados (aislamiento) en 8
laminas portaobjeto por cada muestra, estas fueron fijados en acetona por 30 minutos, se
colocó en cada una de las improntas un anticuerpo monoclonal distinto proporcionado por el
Centro de Control y prevención de enfermedades (CDC) de Atlanta Georgia (EUA) y se incubó
por 30 minutos a 37°C las laminas fueron lavadas en Buffer Fosfato Salino pH 7.2 – 7.4 por 10
minutos y agua destilada, se
revela la reacción con un suero polivalente hiperinmune
comercial, elaborado en cabra contra ratón conjugado con Isotiocianato de Fluoresceína y se
observó al microscopio de luz ultravioleta la reacción positiva se observo mediante la presencia
de color verde.
Los resultados para cada lamina fueron comparados con los patrones de reacción frente a los
anticuerpos monoclonales (cuadro 1).
Para realizar la caracterización genética, se extrajo ARN viral de los aislamientos obtenidos
(muestra encefálica de ratón) mediante el método trizol – cloroformo se siguió las instrucciones
del fabricante,
Para obtener el ADN complementario se realizó la transcripción reversa (RT por sus siglas en
ingles Reverse Transcriptase) del ARN viral extraído a partir de los aislamientos, se utilizó 1 ul
del primer 10g (5’CTACAATGGATGCCGAC-3) 5um en un tubo de 0.2 ul donde se agregó 5 ul
de ARN viral, esta mezcla se calentó a 94°C por 1 minuto en el termociclador de marca
Thermolyne e inmediatamente se enfrió en hielo, luego se agregó 14 ul de un mix que
contenía: 2.16ul de dNTP 10 uM, 0.4 ul de Inhibidor de ARNasa 20 U/ul 1 ul de Transcriptasa
reversa 10 U/ul, 4 ul de buffer 5X y 6.44 ul de agua de Ultra pura, posteriormente se colocó
nuevamente en el termocilador a 42° C por 60 minutos y un ciclo final de 70° C por 15 minutos.
La Reacción en cadena de la polimerasa por sus siglas en ingles
PCR (Polimerase Chain
Reacction) se realizo a partir de del ADN complementario obtenido previamente para lo cual se
preparó un tubo de 0.2 ul que contenía una mezcla de 2 ul de buffer 10X, 1.6 ul de dNTP 10 uM
1.2 ul de Magnesio 25mM, 0.2 ul de Taq polimerasa 5U/ul, 1.08 de primer 10g 20 uM, 1.08 de
primer 304 (5´TTGACGAAGATCTTGCTCAT-3´) 20 uM, 10.84 de agua ultra pura, y finalmente
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se agregó 2 ul de ADN complementario y se colocó en el termociclador con el siguiente perfil
denaturación inicial a 94° C por 2 minutos, 30 ciclos de 94° C por 30 segundos, 54° C por 40
segundos y 72° por 1 minuto y una extensión final de 72° por 10 minutos, en cada corrida se
utilizo un control del sistema que contenía agua PCR.
Para verificar que el RT – PCR amplifico correctamente se realizó una corrida electroforetica en
gel de agarosa al 1.5% por 45 minutos a 100 voltios se utilizo el marcador de peso molecular
Estándar PHI 174 Hae III y se coloreo en bromuro de etidio por 10 minutos finalmente se
observó en un transiluminador el producto amplificado.
Terminado la PCR se procedió a purificar el ADN obtenido, para ello se empleo del kit de
purificación Wizard de la marca promega y se siguió las instrucciones del fabricante, el ADN
purificado fue cuantificado en un espectrofotometro (Bio Mate) a longitudes de onda de 260 nm
y 280 nm.
Para la reacción de secuenciamiento genético se utilizo el kit de secuenciamiento BigDyeTM
TM (Applied Biosystems, CA, USA), se seguido las instrucciones del fabricante y las
secuencias fueron determinadas con el secuenciador automático de capilar (ABI model 310,
Applied Biosystems, CA, USA
Cada una de las secuencias obtenidas fueron comparadas con la información existente en el
GenBank (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/), posteriormente estas secuencias fueron
alineadas empleando el software gratuito ClustalW (http://www.ebi.ac.uk/clustalw/index.html),
para determinar la filogenia se utilizo el software gratuito Molecular Evolutionary Genetics
Analysis (MEGA) versión 3.1 El método utilizado fue el de máxima parsimonia.
RESULTADOS
Aislamiento Viral
Se empleo la prueba biológica “inoculación en ratones” para lo cual se procedió a inocular en
ratones albinos vía intracraneal una suspensión de tejido encefálico de cada una de las 75
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muestras procedentes del departamento de Puno una vez concluido la prueba se pudo aislar
44 cepas activas,
Caracterización Antigénica
Para determinar la variante antigénica se utilizó la técnica de Inmunofluorescencia Indirecta
(IFI) y se utilizó un panel de ocho anticuerpos monoclonales proporcionados por el CDC,
finalmente se determinó que la mayoría de las muestras (40) corresponden a la variante
antigénica 1 y 4 muestras (3 porcinos y 01 humano de 1999) no concordaron con los patrones
de reactividad conocidos, específicamente frente al monoclonal 12 (cuadro Nº 2)
Caracterización genética
Se seleccionaron 12 cepas identificadas como variante antigénica 1 y 03 cepas que no fue
posible determinar la variante antigénica, para la selección se consideró procedencia, especie y
año, además se incluyo 01 muestra de alpaca procedente de Yunguyo - Bolivia del año 2003 y
cepas de laboratorio CVS y PV como cepas de referencia; a todas las muestras seleccionadas
y cepas de referencia se les extrajo ARN viral mediante el método trizol cloroformo. (Cuadro Nº
3)
Para la amplificación del gen de la Nucleoproteina N, Primeramente se estandarizo la técnica
de RT – PCR y posteriormente se procesaron la totalidad de las muestras seleccionadas y
estas fueron amplificadas exitosamente, la identificación del producto amplificado se visualizo
mediante electroforesis en gel de agarosa al 1.5%. (Imagen Nº 1)
Los productos amplificados por RT – PCR fueron purificados mediante el kit de purificación
Wizard de la marca promega y se siguió el protocolo del fabricante, Para el secuenciamiento
genético se empleo el primer 304 a una concentración de 2 pico moles/ul y 5 ul de ADN de la
muestra a secuenciar Todas las muestras fueron secuenciadas exitosamente analizándose en
cada una de ellas 509 nucleótidos del gen de la Nucleoproteina N posteriormente todas las
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secuencias obtenidas fueron comparadas con el banco de datos del GenBank para confirmar
que se trata de secuencias que corresponden al virus de la rabia.
Por ejemplo las cepas fijas de de laboratorio CVS y PV al ser comparados con secuencias
reportadas en el GenBank presentaron para el caso del CVS una identidad del 99% con la
cepa avirulenta AVO1 que es un derivado de la cepa original CVS y para el caso de la cepa
PV presento una identidad del 100% con otra cepa PV reportado por N. Tordo, y para el caso
de las cepas de aislamientos que corresponde a la variante antigénica 1 y aquellas que no fue
posible determinar la variante, la comparación con la secuencias reportadas en el GenBank
mostraron que estas presentan una identidad que está entre el 92 al 96% con los reportes
donde mencionan que el hospedero es el perro, confirmándose por lo tanto que todos los casos
corresponde al ciclo urbano..
Análisis de secuencias obtenidas:
Para el análisis de las secuencias primeramente se alineo con el software ClustalW y
posteriormente dicha información fue cargado al software MEGA, el método utilizado fue el de
Máxima Parsimonia y la robustez o confianza del árbol filogenético generado fue realizado
utilizando un análisis de 1000 replicas (bootstrap).
El árbol filogenético generado por el Software MEGA permitió evidenciar 02 grupos bien
definidos del virus de la rabia un grupo donde se encuentran los virus fijos de laboratorio cepas
CVS y PV al que denominaremos “Outgrup” y el otro grupo de cepas que provienen de
aislamientos de animales domésticos y el hombre al que denominaremos Grupo Variante 1, el
análisis filogenético además permite evidenciar que este ultimo grupo se puede observan sub
grupos de transmisión del virus de la rabia según año y especie. (Imagen N° 2)
En el grupo Variante 1 se puede observar 3 sub grupos bien definidos al que denominaremos
Var 1a, Var 1b, Var 1c y un sub grupo al que denominaremos de transmisión el cual se
encuentra dentro del sub grupo Var 1c, en el grupo Var 1a se encuentran todas las cepas del
año 1998 y dos cepas del año 1999 los cuales corresponden a muestras procedentes de las
provincias de San Román, Azangaro y Yunguyo y que tuvieron como animal afectado a los
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canes, en el grupo Var 1b se encuentran cepas de los años 2001 al 2003, estas proceden de
las provincias fronterizas con Bolivia como son Chuchito y Yunguyo y las muestras
corresponden a canes y alpaca, el grupo Var 1c agrupa cepas de los años 1999 al 2002 que
proceden de las provincias de Azangaro, Chuchito y Melgar y los afectados fueron el hombre,
canes y porcinos, este grupo presenta la mayor distribución geográfica en el departamento que
va desde la provincia fronteriza con Bolivia hasta las provincias de Azangaro y Melgar, además
dentro de este grupo se encuentran aquellas cepas que no reaccionaron con el monoclonal 12
observándose también que las cepas 221-99 y 9807-99 son idénticas y que se diferencias de la
cepa 10104-99, además dentro de este sub grupo se encuentra el grupo de transmisión el cual
se extinguió en el año 2001.
El árbol filogenético también mostró que la cepa del Bovino 22144-01 procedente del Distrito de
Puno presenta diferencias significativas con los grupos antes mencionados por lo que es
ubicado fuera de los grupos antes mencionado pero corresponde al grupo de la variante 1.
CONCLUSIONES
El uso de anticuerpos monoclonales dirigidos contra determinantes antigénicos de la
nucleocápside viral del virus rábico ha permitido determinar la variante antigénica que circula
en este departamento, la caracterización genética y filogenia demostró la presencia de sub
variantes antigénicas los que se diferencian según distribución geográfica y temporalidad
además de determinar la interrelación que se establece entre las especies que actúan como
reservorio o transmisores de la enfermedad en la naturaleza. Estos resultados son
determinantes en las actividades de vigilancia, prevención y control de esta enfermedad para
orientar los planes de vacunación del ganado y las mascotas.
Además nuestro estudio demostró que la única variante antigénica que circula en el
departamento corresponde la variante antigénica 1 que a su vez presenta sub variantes de
acuerdo a la ubicación geográfica y al tiempo en el cual aparecieron. Asi por ejemplo en el
lapso de tiempo del año 1999 y 2001 se presento una sub variante Var 1c el mismo que
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desapareció el año 2001, y simultáneamente para ese año apareció una nueva sub variante
Var 1b que perduro solo en los distritos de Chuchito y Yunguyo hasta el 2003.
Las cepas que no fueron identificados como variante definida corresponden a una sub variante
antigénica Var 1c y es además el que tuvo mayor distribución en lo referente a área geográfica.
El secuenciamiento genético demostró que en este grupo Var 1c están las muestras 221-99,
9807-99 que son idénticas y 10104-99 que se diferencias de las dos anteriores pero que
pertenecen a la misma sub variante y todas estas muestras provienen de la provincia de
Chucuito y circularon en el año 1999; es probable que el linaje viral en esta provincia haya sido
particular comparado con los otros virus que circulaban en otras provincias de Puno en ese
mismo año, esta hipótesis se ve reforzado por el análisis antigénico que no pudo determinar la
variedad de estos virus, por otro lado no se puede descartar que la presión de selección del
sistema inmune del porcino y el humano pudieran también actuar como un determinante de
diferenciación frente a los virus circulantes en otros lugares.
Lo planteado anteriormente se visualiza mejor al analizar el árbol consenso que se obtiene de
todos los árboles mas parsimoniosos que se obtuvieron al hacer el análisis filogenético. En este
árbol se observa claramente que los virus de la variante 1 no tienen un ancestro común o por lo
menos no lo hemos encontrado y que todos aparecieron en un tiempo determinado, esto es
consistente con el alto intercambio de animales (canes) entre Puno y Bolivia ha genera un
elevado flujo de cepas virales entre las ciudades fronterizas (Imagen N° 3)
Finalmente ha de notarse que el virus obtenido de un Bovino es completamente diferente a las
muestras analizadas, esto nuevamente es una clara evidencia que la presión de selección del
sistema inmune del bovino puede jugar un rol preponderante en la variación genética del virus
y refuerza lo mencionado anteriormente.
Finalmente Los estudios filogenéticos de muestras de perro en otros países comparados con
los resultados obtenidos demuestran que forman un grupo monofiletico claramente
diferenciado.
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EN EL DEPARTAMENTO DE PUNO EN EL PERIODO 1998 - 2002
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Anexos
Cuadro N° 1
Patrones de reacción de las diferentes variantes antigénicas con los anticuerpos
monoclonales
C1
C4
C9
C10 C12 C15 C18 19
Ag V
CVS
+
+
+
+
+
+
+
+
Lab.
Perro/mangosta
+
+
+
+
+
+
-
+
1
Perro
+
+
-
+
+
+
-
+
2
Vampiro
-
+
+
+
+
-
-
+
3
Tadarida Brasiliensis
-
+
+
+
+
-
-
-
4
Vampiro
-
+
V
+
+
V
-
V
5
Lasiurus cinereus
V
+
+
+
+
-
-
-
6
Zorro de Arizona
+
+
+
-
+
+
-
+
7
Zorrilo Centro/ Sur
-
+
+
+
-
+
+
+
8
Tad. Bra. Mex.
+
+
+
+
+
-
-
-
9
Zorrillo
+
+
+
+
-
+
-
+
10
Vampiro
-
+
+
+
-
-
-
+
11
Clasificación de Mattos y de Mattos
V: variable.
12
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Cuadro N° 2 Resultados frente al panel de Anticuerpos Monoclonales
N°
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
Cod
Lab/INS
7314-98
7456-98
8153-98
8418-98
8801-98
8901-98
9331-99
9806-99
9807-99
10104-99
10105-99
221-99
352-99
426-99
504-99
709-99
906-99
1923-99
1924-99
2640-99
2900-99
3737-99
3793-99
4174-99
4425-99
4692-99
5787-99
4384-00
4387-00
7012-01
7013-01
7015-01
22144-01
40777-01
40778-01
40781-01
40782-01
40783-01
40784-01
40787-01
40788-01
40789-01
40790-01
37476-02
Provincia
San Román
San Román
Azangaro
Azangaro
San Roman
San Roman
Puno
Chuchito
Chucuito
Chucuito
Chucuito
Chucuito
Lampa
Yunguyo
Chucuito
Azangaro
Puno
Puno
Puno
Yunguyo
Puno
Puno
Huancane
Puno
Azangaro
Azangaro
Yunguyo
Azangaro
Azangaro
Melgar
Melgar
Yunguyo
Puno
Melgar
Azangaro
Chucuito
Chucuito
Chucuito
Chucuito
Chucuito
Chucuito
Chucuito
Chucuito
Yunguyo
Distrito
Juliaca
Juliaca
J.D. Choquehuanca
J:D Choquehuanca
Juliaca
Juliaca
Acora
Juli
Juli
Zepita
Zepita
Kelluyo
Lampa
Yunguyo
Pomata
Arapa
Puno
Puno
Puno
Yunguyo
Santa Rosa
Puno
Huancane
Puno
Saman
Arapa
Yunguyo
Asillo
Azangaro
Orurillo
Orurillo
Yunguyo
Puno
Umachiri
Azangaro
Pomata
Zepita
Desaguadero
Zepita
Desaguadero
Huacullani
Pomata
Huacullani
Pomata
Panel de Anticuerpos
Monoclonales
Especie
Can
Can
Can
Can
Can
Can
Can
Porcino
Porcino
Porcino
Porcino
Humano
Sin Esp.
Can
Can
Can
Can
Can
Can
Can
Can
Can
Bovino
Can
Can
Can
Can
Can
Can
Can
Can
Can
Bovino
Can
Can
Bovino
Porcino
Can
Can
Can
Can
Can
Porcino
Can
1
4
9
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
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+
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10
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12
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15
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18
-
19
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+
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13
Var
Antig
1
1
1
1
1
1
1
?
?
?
1
?
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
CARACTERIZACION ANTIGENICA Y GENETICA PARA DETERMINAR LA FILOGENIA DEL VIRUS DE LA RABIA
EN EL DEPARTAMENTO DE PUNO EN EL PERIODO 1998 - 2002
Cuadro N° 3
Muestras seleccionadas para el estudio genetico
N°
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
Cod
Lab/INS
7314-98
7456-98
8153-98
8801-98
9807-99
10104-99
221-99
426-99
709-99
4387-00
7012-01
7015-01
22144-01
40787-01
37476-02
5020-03
CVS
PV
Provincia
San Román
San Román
Azangaro
San Roman
Chucuito
Chucuito
Chucuito
Yunguyo
Azangaro
Azangaro
Melgar
Yunguyo
Puno
Chucuito
Yunguyo
Yunguyo - Bolivia
Distrito
Especie
Juliaca
Juliaca
J.D. Choquehuanca
Juliaca
Juli
Zepita
Kelluyo
Yunguyo
Arapa
Azangaro
Orurillo
Yunguyo
Puno
Desaguadero
Pomata
Yunguyo - Bolivia
Can
Can
Can
Can
Porcino
Porcino
Humano
Can
Can
Can
Can
Can
Bovino
Can
Can
Alpaca
14
CARACTERIZACION ANTIGENICA Y GENETICA PARA DETERMINAR LA FILOGENIA DEL VIRUS DE LA RABIA
EN EL DEPARTAMENTO DE PUNO EN EL PERIODO 1998 - 2002
Imagen N° 1
Amplificación del gene de la nucleoproteina por RT – PCR
PM Marcador de Peso Molecular
1 = Muestra 1
2 = Muestra 2
3 = Muestra 3
4 = Muestra 4
5 = Muestra 5
6 = Muestra 6
7 = Muestra 7
Imagen N° 2
Árbol generado por Máxima Parsimonia
15
CARACTERIZACION ANTIGENICA Y GENETICA PARA DETERMINAR LA FILOGENIA DEL VIRUS DE LA RABIA
EN EL DEPARTAMENTO DE PUNO EN EL PERIODO 1998 - 2002
Imagen N° 3
Árbol parsimonico consenso
16
CARACTERIZACION ANTIGENICA Y GENETICA PARA DETERMINAR LA FILOGENIA DEL VIRUS DE LA RABIA
EN EL DEPARTAMENTO DE PUNO EN EL PERIODO 1998 - 2002
Secuencias genéticas de cepas de virus fijo y cepas del departamento de Puno
en el periodo 1998 – 2002
Muestra N° 7314-98
catgatggatatgcacgattcatggatctccggcaccctgttattcaacaccttatgagtcactagaatatgtcttgttcaaaaactc
ggcgaatgagtttggacgggcttgatgattggaactgaccgagacatatctccgtatatgcgatctctttagtcgacctccattca
tcatgattcgagtataaacagcctcaggacttctagtctcaccggaaaagtagtcctcgtcgtcggagttgacagttccatcatct
gccagtgccacatcagtctttgtcaattcagccgcctcgtattcctgaagttctttctcatctctgaagaatcttctttcaaatgttcct
tttccgaagaattcctcccccagataaccccccaaaacagacatctcatgaggagcacatgcagcaataaccgttgcatttagg
gatctgacttgacccatataacatccaacaaagtgaatgagattgaacacatgaccaacggcatttgatgaataa
Muestra N° 7456-98
catgaaggatatacacgattcatggatctccggcaccctgttattcaacaccttatgagtcactagaatatgtcttgttcaaaaact
cggcgaatgagtttggacgggcttgatgattggaactgaccgagacatatctccgtatatgcgatctctttagtcgacctccattc
atcatgattcgagtataaacagcctcaggacttctagtttcactggaaaagtagtcctcgtcgtcggagttgacagttccatcatct
gccagtgccacatcagtctttgtcaattcagccgcctcgtattcctgaagttctttctcatctctgaagaatcttctttcaaatgttcct
tttccgaagaattcctcccccagataaccccccaaaacagacatctcatgaggagcacatgcagcaataaccgttgcatttagg
gatctgacttgacccatataacatccaacaaagtgaatgagattgaacacatgaccaacggcatttgatgaataa
Muestra N° 8153-98
catgatggatatacacgattcatggatctccggcaccctgttattcaacaccttatgagtcactagaatatgtcttgttcaaaaactc
ggcgaatgagtttggacgggcttgatgattggaactgaccgagacatatctccgtatatgcgatctctttagtcgacctccattca
tcatgattcgagtataaacagcctcaggacttctagtttcaccggaaaagtagtcctcgtcgtcggagttgacagttccatcatct
gccagtgccacatcagtctttgtcaattcagccgcctcgtattcctgaagttctttctcatctctgaagaatcttctttcaaatgttcct
tttccgaagaattcctcccccagataaccccccaaaacagacatctcatgaggagcacatgcagcaataaccgttgcatttagg
gatctgacttgacccatataacatccaacaaagtgaatgagattgaacacatgaccaacggcatttgatgaataa
Muestra N° 8801-98
catgatggatatacacgattcatggatctccggcaccctgttattcgacaccttatgagtcactagaatatgtcttgttcaaaaactc
ggcgaatgagtttggacgggcttgatgattggaactgaccgagacatatctccgtatatgcgatctctttagtcgacctccattca
tcatgattcgagtataaacagcctcaggacttctagtttcaccggaaaagtagtcctcgtcgtcggagttgacagttccatcatct
gccagtgccacatcagtctttgtcaattcagccgcctcgtattcctgaagttctttctcatctctgaagaatcttctttcaaatgttcct
tttccgaagaattcctcccccagataaccccccaaaacagacatctcatgaggagcacatgcagcaataaccgttgcatttagg
gatctgacttgacccatataacatccaacaaagtgaatgagattgaacacatgaccaacggcatttgatgaataa
Muestra N° 221-99
catgatggatatgcacgattcatggatctccggcaccctgttattcaacaccttatgagtcactagaatatgtcttgttcaaaaactc
ggcgaatgagtttggacgggcttgatgattggaactgaccgagacatatctccgtatatgcgatctctttagtcgacctccattca
tcatgattcgagtataaacagcctcaggacttctagtttcaccggaaaagtagtcctcgtcgtcggagttgacagttccatcatct
gccagtgccacatcagtctttgtcaattcagccgcctcgtactcctgaagttctttctcatctctgaagaatcttctttcaaatgttcct
tttccgaagaattcctcccccagataaccccccaaaacagacatctcatgaggagcacatgcagcaataactgttgcatttagg
gatctgacttgacccatataacatccaacaaagtgaatgagattgaacacatgaccaacggcatttgatgaataa
Muestra N° 709-99
catgatggatatacacgattcatggatctccggcaccctgttattcaacaccttatgagtcactagaatatgtcttgttcaaaaactc
ggcgaatgagtttggacgggcttgatgattggaactgaccgagacatatctccgtatatgcgatctctttagtcgacctccattca
tcatgattcgagtataaacagcctcaggacttctagtttcaccggaaaagtagtcctcgtcgtcggagttgacagttccatcatct
gccagtgccacatcagtctttgtcaattcagccgcctcgtattcctgaagttctttctcatctctgaagaatcttctttcaaatgttcct
tttccgaagaattcctcccccagataaccccccaaaacagacatctcatgaggagcacatgcaggaataaccgttgcatttagg
gatctgacttgacccatataacatccaacaaagagaatgagattgaacacatgaccaacggtattcgatgaataa
17
CARACTERIZACION ANTIGENICA Y GENETICA PARA DETERMINAR LA FILOGENIA DEL VIRUS DE LA RABIA
EN EL DEPARTAMENTO DE PUNO EN EL PERIODO 1998 - 2002
Muestra N° 9807-99
catgatggatatacacgattcctggatctccggcaccctgttattcaacaccttatgagtcactagaatatgtcttgttcaaaaactc
ggcgaatgagtttggacgggcttgatgattggaactgaccgagacatatctccgtatatgcgatctctttagtcgacctccattca
tcatgattcgagtataaacagcctcaggacttctagtttcaccggaaaagtagtcctcgtcgtcggagttgacagttccatcatct
gccagtgccacatcagtctttgtcaattcagccgcctcgtactcctgaagttctttctcatctctgaagaatcttctttcaaatgttcct
tttccgaagaattcctcccccagataaccccccaaaacagacatctcatgaggagcacatgcagcaataactgttgcatttagg
gatctgacttgacccatataacatccaacaaagtgaatgagattgaacacatgaccaacggcatttgatgaataa
Muestra N° 10104-99
catgatggatatacacgattttcggatctccggcaccctgttattcaacaccttatgagtcactagaatatgtcttgttcaaaaactc
ggcgaatgagtttggacgggcttgatgattggaactgaccgagacatatctccgtatatgcgatctctttagtcgacctccattca
tcatgattcgagtataaacagcctcaggacttctagtttcaccggaaaagtagtcctcgtcgtcggagttgacagttccatcatct
gccagtgccacatcagtctttgtcaattcagccgcctcgtactcctgaagttctttctcatctctgaagaatcttctttcaaatgttcct
tttccgaagaattcctcccccagataaccccccaaaacagacatctcatgaggagcacatgcagcaataactgttgcatttagg
gaactgacttgacccatataacatccaacaaagtgaatgagattgaacacgtgaccaacggcatttgaggaatta
Muestra N° 4387-00
catgatggatatacacgattttcggatctccggcaccctgttattcaacaccttatgagtcactagaatatgtcttgttcaaaaactc
ggcgaatgagtttggacgggcttgatgattggaactgaccgagacatatctccgtatatgcgatctctttagtcgacctccattca
tcatgattcgagtataaacagcctcaggacttctagtttcaccggaaaagtagtcctcgtcgtcggagttgacagttccatcatct
gccagtgccacatcagtctttgtcaattcagccgcctcgtactcctgaagttctttctcatctctgaagaatcttctttcaaatgttcct
tttccgaagaattcctcccccagataaccccccaaaacagacatctcatgaggagcacatgcagcaataactgttgcatttagg
gatctgacttgacccatataacatccaacaaagtgaatgagattgaacacatgaccaacggcatttgatgaataa
Muestra N° 7012-01
catgatggatatacacgattttcggatctccggcaccctgttattcaacaccttatgagtcactagaatatgtcttgttcaaaaactc
ggcgaatgagtttggacgggcttgatgattggaactgaccgagacatatctccgtatatgcaatctctttagtcgacctccattca
tcatgattcgagtataaacagcctcaggacttctagtctcaccggaaaagtagtcctcgtcgtcggagttgacagttccatcatct
gccagtgccacatcagtctttgtcaattcagccgcctcgtattcctgaagttctttctcatctctgaagaatcttctttcaaatgttcct
tttccgaagaattcctcccccagataaccccccaaaacagacatctcatgaggagcacatgcagcaataaccgttgcatttagg
gatctgacttgacccatataacatccaacaaagtgaatgagattgaacacatgaccaacggcatttgatggaata
Muestra N° 7015-01
catgatggatatacacgattttcggatctccggcaccctgttattcaacaccttatgagtcactagaatatgtcttgttcaaaaactc
ggcgaatgagtttggacgggcttgatgattggaactgaccgagacatatctccgtatatgcgatctctttagtcgacctccattca
tcatgattcgagtataaacagcctcaggacttctagtttcaccggaaaagtagtcctcgtcgtcggagttgacagttccatcatct
gccagtgccacatcagtctttgtcaattcagccgcctcgtactcctgaagttctttctcatctctgaagaatcttctttcaaatgttcct
tttccgaagaattcctcccccagataaccccccaaaacagacatctcatgaggagcacatgcagcaataactgttgcatttagg
gatctgacttgacccatataacatccaacaaagtgaatgagattgaacacatgaccaacggcatttgatgaataa
Muestra N° 22144-01
catgatggatatacacgattcatagatctccggcaccctgttattcaacaccttatgagtcactagaatatgtcttgttcaaaaactc
ggcgaatgagtttggacgggcttgatgattggaactgaccgagacatatctccgtatatgcgatctctttagtcgacctccattca
tcatgattcgagtataaacagcctcaggacttctagtttcaccggaaaagtagtcctcgtcgtcggagttgacagttccatcatct
gccagtgccacatcagtctttgtcaattcagccgcctcgtattcctgaagttctttctcatctctgaagaatcttctttcaaatgttcct
tttccgaagaattcctcccccagataaccccccaaaacagacatctcatgaggagcacatgcagcaataaccgttgcatttagg
gatctgacttgacccatataacatccaacaaagtgaatgagattgaacacatgaccaacggcatttgatgaataa
18
CARACTERIZACION ANTIGENICA Y GENETICA PARA DETERMINAR LA FILOGENIA DEL VIRUS DE LA RABIA
EN EL DEPARTAMENTO DE PUNO EN EL PERIODO 1998 - 2002
Muestra N° 40787-01
catgatggatatacacgattcatggatctccggcaccctgttattcaacaccttatgagtcactagaatatgtcttgtttaaaaactc
ggcgaatgagtttggacgggcttgatgattggaactgaccgagacatatctccgtatatgcgatctctttagtcgacctccattca
tcatgattcgagtataaacagcctcagggcttctagtttcaccggaaaagtagtcctcgtcgtcggagttgacagttccatcatct
gccagtgccacatcagtctttgtcaattcagccgcctcgtattcctgaagttctttctcatctctgaagaatcttctttcaaatgttcct
tttccgaagaattcctcccccagataaccccccaaaacagacatctcatgaggagcacatgccgcaataactgttgcatttagg
gatctgacttgacccatataacatccaacaaagtgaatgagattgaacacatgaccaacggcatttgatgaataa
Muestra N° 37476-02
catgatggatatacacgattcctggatctccggcaccctgttattcaacaccttatgagtcactagaatatgtcttgtttaaaaactc
ggcgaatgagtttggacgggcttgatgattggaactgaccgagacatatctccgtatatgcgatctctttagtcgacctccattca
tcatgattcgagtataaacagcctcagggcttctagtttcaccggaaaagtagtcctcatcgtcggagttgacagttccatcatct
gccagtgccacatcagtctttgtcaattcagccgcctcgtattcctgaagttctttctcatctctgaagaatcttctttcaaatgttcct
tttccgaagaattcctcccccagataaccccccaaaacagacatctcatgaggagcacatgccgcaataactgttgcatttagg
gatctgacttgacccatataacatccaacaaagtgaatgagattgaacacatgaccaacggcatttgatgaataa
Muestra N° 5020-03
catgatggatatacacgattcatggatctccggcaccctgttattcaacaccttatgagtcactagaatatgtcttgtttaaaaactc
ggcgaatgagtttggacgggcttgatgattggaactgaccgagacatatctccgtatatgcgatctctttagtcgacctccattca
tcatgattcgagtataaacagcctcagggcttctagtttcaccggaaaagtagtcctcgtcgtcggagttgacagttccatcatct
gccagtgccacatcagtctttgtcaattcagccgcctcgtattcctgaagttctttctcatctctgaagaatcttctttcaaatgttcct
tttccgaagaattcctcccccagataaccccccaaaacagacatctcatgaggagcacatgccgcaataactgttgcatttagg
gatctgacttgacccatataacatccaacaaagtgaatgagattgaacacatgaccaacggcatttgatgaataa
Muestra N° 426-99
Catgatggatatacacgattcatggatctccggcaccctgttattcaacaccttatgagtcactagaatatgtcttgttcaaaaact
cggcgaatgagtttggacgggcttgatgattggaactgaccgagacatatctccgtatatgcgatctctttagtcgacctccattc
atcatgattcgagtataaacagcctcaggacttctagtttcaccggaaaagtagtcctcgtcgtcggagttgacagttccatcatc
tgccagtgccacatcagtctttgtcaattcagccgcctcgtattcctgaagttctttctcatctctgaagaatcttctttcaaatgttcc
ttttccgaagaattcctcccccagataaccccccaaaacagacatctcatgaggagcacatgcagcaataaccgttgcatttag
ggatctgacttgacccatataacatccaacaaagtgaatgagattgaacacatgaccaacggcatttgatgaataa
Cepa PV
catgatggatatacacaatccgtagatttccggcattttgttattcaacttcttatgagtcactcgaatatgtcttgtttagaaactcgg
cgaatgagtttggacgagcttgatgattggaactgactgagacatatctccgtatgtgcgatctcttcagtcgacctccattcatta
tgattcgagtataaacagcttccggacttctggtttcacctgagaagtagtcctcgtcgtcagagttgacagttccatcatctgcca
gtgctacgtcagtctttgtcagttcagccgcctcgtattcttgaagttctttctcatctctgaagaatcttctttcaaatgtccctttccc
gaagaattcctctcccagatagccccctagaacagacatttcatgaggagcacatgcagcaataaccgttgcatttagggatct
gacttgacccatatagcatcctacaaagtgaatgagattgaacacgtgaccaacagcatttgatgaataa
Cepa CVS
catgatggatatatacaatctatagatttctgggcaccctggtcaatcaactccttatgagtcattcgaatacgtcttggtttaaaaat
tcggcgaatgagtttggacgggcttgatgattggaactgactgagacatatctccgtatatgagatctcttcagtcgacctccatt
catcatgattcgagtatagacagcttctggacttctggtttcaccagagaaatagtcctcgtcatcagagttgacggttccgtcatc
tgccagtgccacgtcggactttgttagttcagccgcctcatattcttgaagttctttctcgtctctgaagaaccttctttcaaatgtcc
cttttccgaagaattcctctcccaaatagccccctagaacagacatctcatgaggggcacatgcagcaataaccgtcgcatttag
agatctgacttgacccatgtagcatccaacaaagtgaatgagattgaacacatgaccgacagcattcgatgaataa
19
CARACTERIZACION ANTIGENICA Y GENETICA PARA DETERMINAR LA FILOGENIA DEL VIRUS DE LA RABIA
EN EL DEPARTAMENTO DE PUNO EN EL PERIODO 1998 - 2002
Efecto o impacto de los resultados obtenidos
En la actualidad en nuestro país la ejecución de programas de vacunación antirrábica en perros
ha permitido que los casos de rabia en animales domésticos disminuya considerablemente, y
solo se circunscriba a determinadas áreas tales como el departamento de Puno, sin embargo
con los resultados obtenidos en este estudio es importante efectuar investigaciones mas
detalladas y ver la evolución del virus y determinar el porcentaje de mutación que ocurre en
todo el gen de la nucleoproteína N. también es importante continuar con estudios de
epidemiología molecular para determinar la fuente de donde proceden el cual podría realizarse
realizando trabajos con el vecino país de Bolivia en donde los casos de rabia urbana son mas
abundantes.
Estrategias de divulgación
Los resultados serán divulgados en la revista institucional
20