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Simposio Internacional: Control o erradicación de las hepatitis virales B y C
International Symposium: Control or eradication of viral hepatitis B and C
Barcelona, 30 y 31 de mayo de 2013
Barcelona, May 30-31, 2013
Inicio
1. Biología del virus de la hepatitis C, Volker Lohmann
2. Gravedad de las hepatitis virales en Europa y en el mundo, Heiner Wedemeyer
3. Respuesta inmune frente al VHB y VHC, Kyong-Mi Chang
4. Presente y futuro del tratamiento de la hepatitis C usando agentes antivirales de
acción directa, Rafael Esteban Mur
5. Novedades de la replicación del VHC: dianas antivirales potenciales, Charles Rice
6. Modelos animales para el estudio de la infección por virus B (VHB) y delta (VHD),
Maura Dandri
7. Variabilidad y retos para la erradicación del VHB, Fabien Zoulim
8. Tratamiento anti-VHB y anti-VHC en pacientes trasplantados de hígado, Xavier
Forns Bernhardt
9. Tratamiento anti-VHB y anti-VHC en pacientes coinfectados por VIH, Javier García
Samaniego Rey
10. Mutaciones de resistencia a tratamientos anti-VHC y persistencia viral, Christoph
Sarrazin
11. Retos de la secuenciación masiva en el estudio de mutantes minoritarios
clínicamente relevantes, Niko Beerenwinkel
12. Interacción entre mutagénesis e inhibición. Nuevas estrategias de terapia antiviral,
Esteban Domingo Solans
FUNDACIÓN RAMÓN ARECES
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International Symposium: Control or eradication of viral hepatitis B and C
Barcelona, 30 y 31 de mayo de 2013
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Biología del virus de la hepatitis C, Volker Lohmann
La Infección por el virus de la hepatitis C (VHC) causa enfermedad grave hepática y
representa un grave problema sanitario a nivel global. El acceso a modelos in vitro y
sistemas de cultivo de células permite una comprensión detallada a nivel molecular de
varias etapas del ciclo de replicación viral. La entrada del VHC a la célula hepática se
produce a través de receptores y factores en un proceso cada vez mejor definido. La
cadena positiva de ARN del genoma viral se libera en el citoplasma y conduce a la
traducción de una poliproteína, que se procesa mediante proteasas celulares y virales
dando lugar a las proteínas funcionales del virus. Las proteínas No estructurales virales a
continuación, producen alteraciones en membranas del retículo endoplasmático que
albergarán los centros de replicación del ARN viral. La síntesis de ARN viral y la
formación de los centros de replicación virales implican una acción concertada de las
proteínas no estructurales virales y factores del huésped como microARN-122, ciclofilina
A, y PI4KIIIα. Prácticamente, todos los antivirales aprobados o en fase clínica III usados
para el tratamiento anti-VHC, se dirigen frente a proteínas involucradas en el
procesamiento de la poliproteína o frente a proteínas virales y del huésped implicadas en
la síntesis de ARN. Por consiguiente, la presentación se centrará en la comprensión del
estado actual de los distintos pasos implicados en la replicación del ARN viral y en
resumir el conocimiento actual sobre el modo de acción de algunos de los inhibidores que
interfieren en estos procesos.
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Gravedad de las hepatitis virales en Europa y en el mundo, Heiner Wedemeyer
La hepatitis viral supone un grave problema sanitario. Se estima que 500 millones de
personas son portadoras de virus de hepatitis, se calcula que hasta 1 millón de muertes
ala año son causadas por enfermedad terminal del hígado inducida por virus o carcinoma
hepatocelular. Además, la insuficiencia hepática aguda es un problema común, y en este
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sentido, 70.000 pacientes mueren cada año por infección aguda causada por el virus de la
hepatitis E.
En general, la infección por el virus de la hepatitis B es la infección crónica más frecuente
con cerca de 350 millones de portadores de HBsAg. Es importante destacar que se
estima que 15 a 20 millones de estos pacientes están coinfectados con el virus de la
hepatitis delta (VHD). La coinfección con VHD se considera la forma más grave de la
hepatitis crónica viral. La gravedad de la enfermedad causada por el VHC sigue
aumentando y podría alcanzar su punto máximo durante los próximos años.
Afortunadamente, la infección "de novo" con VHB y VHC ha disminuido significativamente
durante los últimos 20 años. La vacunación contra el VHB está recomendada en la
mayoría (¡no todos!) de los países. La infección por VHC se produce principalmente en las
poblaciones de usuarios de drogas por vía parenteral, y los procedimientos médicos
siguen siendo una de las causa principales de las nuevas infecciones por VHC. Algunos
programas de desarrollo de vacunas profilácticas contra el VHC están en curso, pero
será difícil demostrar su eficacia. En el caso del VHE, se ha licenciado una vacuna en
China en 2012. Todavía no está claro cuándo y si esta vacuna estará disponible en otros
países.
El desafío actual más importante, se centra en reducir la carga de enfermedades
causadas por las hepatitis viral. El acceso a la detección y el tratamiento debería ser
garantizado, pero las infecciones por virus de hepatitis con frecuencia afectan a
poblaciones especiales, tales como consumidores de drogas, poblaciones emigrantes,
prisioneros o personas coinfectadas con otros patógenos. A pesar de que nuevas y
prometedoras terapias estarán disponibles en un futuro próximo no está claro si los
nuevos medicamentos llegarán a todos los pacientes que lo necesiten, y sobretodo en
aquellos entornos con recursos limitados.
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Respuesta inmune frente al VHB y VHC, Kyong-Mi Chang
VHB y VHC son virus hepatotropos que pueden persistir y causar enfermedad hepática
progresiva, como cirrosis y carcinoma hepatocelular. El resultado de la infección viral se
define por la interacción entre el virus y la respuesta inmune del hospedador. Tanto el
VHB como el VHC poseen varios mecanismos para evadir o subvertir la respuesta inmune
innata celular causando un retraso en el inicio de la respuesta inmune adaptativa.
Mientras que las células T juegan un papel clave en la eliminación del virus y la inmunidad
protectora, tanto VHB como VHC persisten con la inducción de múltiples mecanismos de
regulación de células T extrínsecos e intrínsecos incluyendo células T reguladoras,
citoquinas reguladoras (por ejemplo, IL-10) y la inhibición de vías coestimuladoras
inhibidoras (por ejemplo, PD-1, CTLA-4, Tim-3). Estos factores reguladores pueden ser
inducidos por la replicación viral en curso y la inflamación, limitando el daño severo sobre
el hígado, pero también causando la inhibición del control eficaz del virus y en última
instancia contribuyen al daño hepático crónico. La persistencia viral (particularmente para
el VHC) se asocia más con la inducción de variantes virales que al reconocimiento de
células B y T, lo cual es un grave desafío al desarrollo de una vacuna eficaz contra el
VHC. La historia natural y la respuesta terapéutica del VHB y VHC se ven influidos por la
inmunogenética del hospedador (por ejemplo el polimorfismo en IL28, tipo de HLA),
aunque sus mecanismos precisos aún no se ha definido completamente. En esta
presentación, se propone exponer una actualización de la respuesta inmune del huésped
y su regulación en la infección por VHB y el VHC, relevante para su historia natural y
tratamiento
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Presente y futuro del tratamiento de la hepatitis C usando agentes antivirales de acción
directa, Rafael Esteban Mur
El Virus de la hepatitis C (VHC) infecta crónicamente al 2,3% de la población mundial y al
2,5% de la población española. El tratamiento estándar actual (SOC) con interferón
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pegilado (PEG-IFN) y ribavirina (RBV) erradica la infección en aproximadamente el 50%
de los pacientes infectados por el VHC, pero los efectos secundarios adversos limitan, en
muchos casos, su eficacia.
El reciente desarrollo de pequeñas moléculas que inhiben directamente el ciclo vital del
virus representa un hito importante para el tratamiento de la infección crónica por el virus
de la hepatitis C (VHC). Estos nuevos fármacos que se denominan colectivamente
antivirales de acción directa (DAA) incluyen principalmente una serie de inhibidores de la
proteasa NS3/4A, polimerasa NS5B y la proteína NS5A. Dos inhibidores de la proteasa
NS3/4A (boceprevir y telaprevir) en combinación con pegIFN + RBV han sido aprobados
por la FDA y la EMEA, para el tratamiento de la hepatitis C crónica genotipo 1. Este
tratamiento triple ha permitido aumentar las tasas de curación en un 20-30%. Sin
embargo, la mayoría de los DAA (más de 60) se encuentran todavía en desarrollo clínico
temprano.
Mejoras significativas en las tasas de Respuesta Virológica Sostenida se han logrado en
los ensayos en curso que utilizan combinaciones de DAAs con o sin peg-IFN y/o RBV, y
algunos de estos regímenes suponen la terapia exclusiva con inhibidores de
administración oral. Esto va a permitir incluir en terapia pacientes que hasta hace poco no
tenían ninguna posibilidad de entrar en tratamiento.
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Novedades de la replicación del VHC: dianas antivirales potenciales, Charles Rice
Se estima que unos 200 millones de personas han sido infectadas con el virus de la
hepatitis C (VHC), de los cuales una mayoría has sido incapaces de eliminar el virus. La
infección crónica por VHC puede conducir a cirrosis, carcinoma hepatocelular y
enfermedad hepática en fase terminal. En general se cree que el daño hepático se
produce como resultado, al menos en parte, de la inflamación causada por la respuesta
inmune. Desde el descubrimiento del VHC en 1989 se han conseguido importantes
avances en el establecimiento de sistemas experimentales esenciales para desentrañar
los detalles del ciclo de vida del virus. Entre ellos, destaca el desarrollo de clones
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moleculares infecciosos, replicones de ARN y un sistema de cultivo de células robusto a
partir de un aislado de VHC fruto de un caso raro de hepatitis fulminante aguda. La
identificación de los factores humanos necesarios para la entrada del VHC y de factores
relacionados con respuesta inmune innata ha llevado al desarrollo de un modelo de ratón
que soporta la entrada, la replicación y producción de virus de VHC. En conjunto, estas
herramientas han incrementado nuestra comprensión del ciclo de vida del VHC y han
evidenciado nuevas dianas para la intervención terapéutica. En 2011, dos antivirales de
acción directa dirigidos contra la serina-proteasa (NS3) del VHC fueron aprobadas para el
tratamiento combinado con interferón alfa tipo I pegilado y ribavirina. Este tratamiento
triple permite mejorar el porcentaje de pacientes que responden con éxito al tratamiento,
llegando incluso al 70% en los pacientes infectados con VHC genotipo 1 que representan
el grupo globalmente mayoritario y más difícil de tratar. El futuro se presenta muy
prometedor con un gran grupo de antivirales específicos contra VHC y contra dianas
celulares, lo cual ha aumentado las esperanzas de definir tratamientos completamente
oral de libres de interferón que tengan una cobertura amplia pan-genotípica, efectos
secundarios mínimos y una alta tasa de curación.
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Modelos animales para el estudio de la infección por virus B (VHB) y delta (VHD), Maura
Dandri
Las evidentes limitaciones a poder usar primates y la necesidad de realizar estudios de
infección con pequeños animales bien caracterizados condujeron al desarrollo de los
ratones quiméricos hepáticos humanos, tales como el uPA/ratones SCID. En este
sistema, el daño hepático inducido en los transgénicos crea el espacio y el estímulo de
regeneración
necesarios para que hepatocitos trasplantados permitan reconstituir la
enfermedad hepática en el ratón, mientras que la ausencia de la respuesta inmune
adaptativa permite mantener el injerto xenogénico. Ratones humanizados han
demostrado que siguen siendo susceptibles a la infección por el VHB, el VHC y VHD. Una
vez establecida la infección, los ratones se convierten en crónicamente infectados y
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permiten la evaluación preclínica de compuestos dirigidos a cualquier etapa del ciclo de
vida viral. Hemos demostrado previamente la capacidad in vivo de bloquear la infección
de novo y también la expansión post-infección de VHB y VHD usando inhibidores de
entrada derivados de la proteina larga de envuelta del VHB. Por otra parte, trasplantando
hepatocitos infectados con VHB aislados de ratones quiméricos a nuevos ratones
uPA/SCID pudimos investigar el impacto de la proliferación de los hepatocitos sobre la
estabilidad del cccDNA. La reducción drástica cccDNA inducida por división celular en
ausencia de agentes antivirales pone de relieve un punto débil en la persistencia del VHB.
Dentro del hígado de ratón, los hepatocitos humanos mantienen un sistema inmune innato
funcional y responden a los estímulos inducidos por citoquinas aplicados exógenamente.
Mediante la administración de IFN-α humano convencional, se encontró que el VHB
inhibía el aumento de varios genes estimulados por interferón (ISGs) y la acumulación
nuclear de STAT, a pesar de que el IFN-α puede inducir la supresión temporal de la
replicación del VHB al mediar la represión epigenética del minicromosoma cccDNA. En
particular, la capacidad de respuesta en hepatocitos humanos puede ser mantenida con la
administración de peg-IFNa, lo que llevó a una disminución sustancial de antígeno viral en
las primeras 12 semanas de tratamiento sugiriendo que la participación de los
componentes del sistema inmune del hospedador puede no ser necesarios para provocar
la disminución precoz del HBsAg observada en pacientes tratados con IFN. Utilizando
ratones humanizados se ha estudiado recientemente el estado antiviral de los hepatocitos
humanos en el ajuste de la co-infección crónica por VHB/VHD en comparación con la
mono-infección por VHB. El establecimiento de la infección por VHD fue acompañada por
una notable inducción de ISGs humanos, mientras que el VHB mono-infección condujo
sólo a moderada elevaciones ISG. Curiosamente, la activación de citoquinas humanoespecíficas (p.e. TGF-beta, IFN-λ) predominó en los ratones co-infectados por VHB/VHD.
Estos estudios sugieren que la elevación pre-tratamiento de ISG y los niveles de
interferón pueden contribuir directamente al daño hepático y la inflamación, lo cual justifica
el curso más grave de la enfermedad hepática asociada a VHD. Dicha inducción de un
estado antiviral también podría explicar los niveles más bajos de actividad del VHB que
con frecuencia se encuentran en los hepatocitos coinfectados.
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Variabilidad y retos para la erradicación del VHB, Fabien Zoulim
El virus de la Hepatitis B (VHB) infecta principalmente hepatocitos. Durante el ciclo de
replicación, su genoma en forma de ADN pasa a través de una fase de transcriptasa
inversa. La persistencia de una forma viral circular covalentemente cerrada (ccc) de ADN,
que es como un minicromosoma viral, en el núcleo de las células infectadas es
responsable de la cronicidad de la infección a nivel celular. Debido a su larga vida media,
es necesario para prevenir las recaídas de la replicación viral, la administración a largo
plazo de análogos de nucleos(t)idos (NUC). Sin embargo, debido a la tasa de error de la
polimerasa viral y la variabilidad espontánea del genoma viral, la terapia antiviral puede ir
asociada a la selección de mutantes resistentes a los fármacos. El desarrollo de nuevas
NUCs con una alta barrera genética, ha limitado el riesgo de aparición de resistencia a los
medicamentos antivirales. Ahora es posible lograr la supresión viral en la mayoría de los
pacientes infectados. El principal reto es desarrollar nuevas estrategias de tratamiento
para conseguir la curación de la infección con aclaramiento de HBsAg y/o cccDNA. El
aclaramiento de HBsAg se obtiene en sólo el 10% de los pacientes tratados con NUCs o
interferón alfa. Varios enfoques están siendo evaluados en modelos experimentales. El
aclaramiento del cccDNA puede requerir la muerte de los hepatocitos infectados inducida
por células del sistema inmune, lo que lleva a la dilución igual o desigual del cccDNA
través de la mitosis de los hepatocitos. La destrucción de cccADN también puede ser
inducida por la inducción de varias vías de señalización celular que conducen a la
degradación por nucleasas. Si el cccADN no puede ser eliminado, su silenciamiento
puede ser otro objetivo al interferir con su control epigenético con fármacos que alteren el
estado de acetilación/metilación de las histonas o por medio de la inducción de citoquinas,
incluyendo el interferón alfa. A este respecto, la restauración de las respuestas innatas
que son reprimidas por VHB representan otro concepto interesante.
Los estudios que investigan el efecto de los agonistas de TLR en la respuesta innata
intrahepática y la reconfiguración de las respuesta adaptativa de células T están en curso
en modelos experimentales. Enfoques inmunomoduladores basados en la activación
mediante vacuna terapéutica de la respuesta de células CD4+ específicas y CD8+
también pueden representar un complemento a la terapia basada en NUC. Estos nuevos
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avances deberían ayudar a diseñar estrategias de intervención de tratamiento temprano
para prevenir el desarrollo de carcinoma hepatocelular.
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Tratamiento anti-VHB y anti-VHC en pacientes trasplantados de hígado, Xavier Forns
Bernhardt
El trasplante hepático (TH) es la única alternativa para los pacientes con cirrosis en fase
terminal o con carcinoma hepatocelular. Las hepatitis B y C (particularmente la C) son la
causa más frecuente de cirrosis y cáncer hepático en nuestro medio y por tanto, la
primera indicación de TH. Desde la introducción de la inmunoglobulina anti-hepatitis B y
especialmente de los nuevos antivirales orales, la recurrencia de la hepatitis B posttransplante ha dejado de ser un problema y los pacientes tienen un pronóstico excelente.
Contrariamente, la hepatitis C post-transplante es la principal causa de pérdida de injerto
a largo plazo y representa un verdadero problema para la gran mayoría de programas de
transplante. Entre las estrategias que contamos para prevenir esta infección en el injerto
cabe destacar el tratamiento antiviral en lista de espera
(únicamente aplicable a
pacientes con cirrosis compensada) y el tratamiento en la fase post-transplante (cuando
ya se ha producido daño hepático). Estas estrategias consiguen curar la infección en una
tercera parte de pacientes. Sin embargo, es muy probable que en los próximos años
consigamos prevenir o curar la infección en una proporción mucho mayor de casos
utilizando agentes antivirales directos, que ofrecen una mayor eficacia y sobre todo
tolerancia y seguridad.
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Tratamiento anti-VHB y anti-VHC en pacientes coinfectados por VIH, Javier García
Samaniego Rey
La coinfección con el virus de la hepatitis B (VHB) es común en los pacientes portadores
del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) ya que los dos agentes comparten las
mismas vías de transmisión. La infección crónica por VHB se detecta en casi el 10% de
los pacientes infectados por el VIH. Individuos co-infectados muestran un curso acelerado
de la enfermedad hepática por VHB asociada con la progresión más rápida a cirrosis. Las
indicaciones para el tratamiento del VHB son las mismos que en los pacientes VIHnegativos, basadas en los niveles de ADN del VHB, niveles séricos de ALT y lesiones
histológicas, independientemente del recuento de células CD4. Por lo tanto, la mayoría de
los pacientes co-infectados deben ser tratados al mismo tiempo para el VIH y el VHB.
Tenofovir combinado con emtricitabina o lamivudina más un tercer agente activo contra el
VIH es una buena estrategia en este escenario. En un pequeño número de pacientes con
CD4> 500/ml, la hepatitis B crónica puede ser tratada antes de la institución de la terapia
anti-retroviral, con interferón pegilado (sobre todo para los pacientes HBe positivos),
adefovir y telbivudina, que no han demostrado ser activos contra el VIH, como alternativa
terapéutica. La lamivudina, entecavir y tenofovir tienen actividad tanto contra VIH como
contra el VHB y está contraindicado su uso en monoterapia contra hepatitis B en
pacientes co-infectados por el riesgo de desarrollar resistencia al VIH.
La hepatitis C crónica es la principal causa de morbilidad y mortalidad en la población
VIH. La prevalencia de la coinfección por VIH/VHC es muy elevada entre los
consumidores de drogas intravenosas. Por lo tanto, la enfermedad hepática crónica
debido a la infección por el VHC es un importante problema de salud pública. La terapia
con interferón pegilado alfa y ribavirina tiene una eficacia limitada en pacientes
coinfectados. La reciente aprobación de los primeros antivirales de acción directa (DAA),
telaprevir y boceprevir en combinación con PegIFN+RBV para el tratamiento del VHC
genotipo 1 ha incrementado significativamente la tasa de respuesta virológica sostenida
en los pacientes monoinfectados y coinfectados. Estos regímenes de tratamiento del VHC
representan un "nuevo paradigma" para la atención de la enfermedad por VHC y puede
dar lugar a mayores tasas de erradicación del VHC en pacientes coinfectados VIH/VHC.
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Sin embargo, las mayores preocupaciones incluyen el manejo adecuado de los efectos
adversos graves (especialmente anemia), la adherencia y las interacciones fármacofármaco con agentes antirretrovirales.
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Mutaciones de resistencia a tratamientos anti-VHC y persistencia viral, Christoph Sarrazin
El VHC replica con una vida media corta y alto turn-over viral. La falta de corrección de
copia de la ARN-polimerasa ARN-dependiente (NS5B) viral genera una gran población de
variantes virales ligeramente diferentes, pero estrechamente relacionadas (denominada
quasiespecies). Recientemente, dos inhibidores de la proteína NS3/4A proteasa
(Boceprevir y Telaprevir) se han aprobado para el tratamiento de pacientes infectados con
hepatitis C crónica genotipo 1. Ambos compuestos mostraron una media/fuerte actividad
antiviral en estudios clínicos fase 1, pero no pueden ser administrados en monoterapia
debido a la rápida selección de variantes resistentes preexistentes, lo cual causa un
rebrote viral o viral break-through (VTK).
A nivel basal, las variantes dominantes asociadas a resistencia a inhibidores de la
proteasa del VHC son raramente detectables en los pacientes sin tratamiento previo
(<1%) y la presencia de tales variantes no excluye la respuesta virológica a la terapia
triple. Esto se explica por una falta de resistencia cruzada de estas variantes al
tratamiento con Interferón pegilado alfa (pegIFN) + Ribavirina (RBV). Por lo tanto, no se
requiere el análisis de la resistencia al inicio del estudio.
En general, la probabilidad de fracaso del tratamiento virológico se asocia a la sensibilidad
individual al tratamiento con pegIFN/RBV y incrementa en pacientes naïve un 10% y hasta
un 50% en pacientes no-respondedores previos. Las normas de detención del tratamiento
(stopping rules) son importantes porque la administración continua de los inhibidores de la
proteasa en presencia de replicación viral persistente debe evitarse a toda costa, ya que
esto podría inducir la selección de mutaciones compensatorias con una mayor capacidad
replicativa y mayor vida media.
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Las mutaciones en la proteasa NS3 asociada a resistencia a Boceprevir y Telaprevir se
superponen en gran medida (posiciones V36, V55, T54, R155, A156 y V170 de la
proteasa NS3), lo cual excluye que en caso de VTK pueda cambiarse de uno de estos
inhibidores al otro.
Al final del tratamiento, en pacientes con fracaso de la terapia, la frecuencia de las
variantes resistentes en la quasiespecies viral disminuye. Después de aprox. 2 años, en la
gran mayoría de los pacientes (> 80%) las variantes resistentes son indetectables incluso
por secuenciación poblacional. En futuros ensayos clínicos, queda por explorar si las
variantes de resistencia pueden persistir a altos niveles en una minoría de pacientes y si
las variantes residuales puede influir en la respuesta virológica a futuras terapias
antivirales con otros inhibidores de acción directa (DAAs).
Nuevos inhibidores de la proteasa NS3 y DAAs dirigidos contra otras proteínas del VHC
(por ejemplo, inhibidores de la NS5A, inhibidores nucleós(t)idicos de la NS5B) se
encuentran actualmente en desarrollo y se aprobarán en un futuro próximo. Las
frecuencias de las variantes resistentes preexistentes, la selección de resistencia durante
el fallo al tratamiento previo y la persistencia de estas al fallo en el tratamiento, pueden
ser dispares para fármacos de la misma clase y para diferentes clases.
Por ejemplo, a nivel basal, la mutación asociada a resistencia Q80K se observa con
frecuencia en los pacientes infectados por el subtipo 1a del VHC no tratados previamente
y esta variante se asoció con tasas de respuesta virológica reducida a Simeprevir
(TMC435) un inhibidor de la proteasa NS3.
Variantes naturales de resistencia a inhibidores de NS5A se observan rara vez (<8%) en
los pacientes no tratados. Sin embargo, a diferencia de lo que ocurre con la resistencia a
inhibidores de NS3, estos mutantes que confieren resistencia a los inhibidores de NS5A
parecen persistir más frecuentemente, debido a que su capacidad replicativa no se ve
afectada.
Diversas variantes confieren resistencia a los inhibidores no nucleós(t)idicos de NS5B,
dependiendo del sitio de unión a la proteína NS5B y del compuesto específico. Las tasas
de pre-existencia varían significativamente de variante de la variante y poco se sabe hasta
ahora sobre las tasas de persistencia.
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La pre-existencia de resistencia, así como la detección de variantes resistentes en
pacientes con fallo al tratamiento con análogos de nucleós(t)idos inhibidores de la
polimerasa (es decir Mericitabine, Sofosbuvir) se ha observado hasta ahora sólo en unos
pocos pacientes.
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Retos de la secuenciación masiva en el estudio de mutantes minoritarios clínicamente
relevantes, Niko Beerenwinkel
La secuenciación de nueva generación (NGS) permite realizar estudios de costoefectividad de las poblaciones de virus a un nivel de detalle sin precedentes. El enfoque
de la secuenciación masiva en paralelo permite detectar alelos de baja frecuencia y
proporciona una instantánea de la estructura de toda la población viral. Sin embargo, el
análisis de los datos de secuenciación ultra-profunda obtenidos a partir de poblaciones de
virus mixtos es un reto, debido a (i) los conjuntos de datos son enormes, (ii) los
reads/secuencias contienen y amplifican errores de secuenciación, y (iii) la longitud de
lectura es típicamente más corto que la región genómica de interés. Por lo tanto, los
experimentos de secuenciación ultra-profunda proporcionan sólo una prueba indirecta de
la estructura de la población viral subyacente. En esta presentación se pretende discutir
los métodos computacionales y estadísticos para el análisis de esos datos, incluyendo la
corrección de error de lectura, la reconstrucción de haplotipos, y la estimación de las
frecuencias de estos haplotipos. Se presentarán varios métodos bioinformáticos, y se
valorará su capacidad para simulación de datos in silico y para el análisis de datos
obtenidos de experimentos control y muestras clínicas virales. Si somos capaces de
identificar los factores de error y tratarlos adecuadamente, la NGS será muy útil para la
investigación cuantitativa de la diversidad genética de las poblaciones de virus de ARN.
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Interacción entre mutagénesis e inhibición. Nuevas estrategias de terapia antiviral,
Esteban Domingo Solans
La mutagénesis letal tiene por objeto la extinción viral mediante el aumento de la tasa de
mutación por encima del valor máximo compatible con el mantenimiento de las funciones
virales. Estudios modelo con varios sistemas hospedador-virus han indicado la viabilidad
de esta nueva estrategia como un medio para contrarrestar el potencial de adaptación de
las quasiespecies virales de ARN. En particular, los experimentos con el virus de la
enfermedad pie-y-boca ARN y virus de la coriomeningitis linfocítica mostraron que cuando
un agente mutagénico participa en la terapia, la administración de un inhibidor-mutágeno
de manera secuencial puede ser más eficaz en la reducción de la carga viral y evitar la
selección de mutantes de escape que la administración combinada correspondiente
(Perales et al. TIM 20-595-603, 2012). Dos mecanismos han sido identificados como
responsables de la ventaja del tratamiento secuencial: (i) la dinámica de la interacción de
las quasiespecies virales con un inhibidor y un mutágeno, y (ii) la necesidad de los
genomas defectivos producidos por el
mutágeno para replicar ejercen su actividad
interfiriendo (defección letal) en la transición hacia la extinción viral. Para explorar la
posible extensión de los protocolos de mutagénesis letal para el VHC, lo primero que se
investigó fue si la ribavirina (Rib) actua como agente mutagénico para el VHC en el
sistema de cultivo celular basado en HCVcc [virus rescatado del cultivo de de células
LUNET electroporadas con el plásmido Jc1FLAG2 (p7 -nsGluc2A) (Marukian et al
Hepatología 48:. 1843-1850, 2008)] replicando en cultiov de células del hepatoma
humano Huh-7.5 (colaboración con C. Rice). La replicación del HCVcc en presencia de
Rib dio como resultado aumentos significativos de las frecuencias de mutación y las
distancias genéticas promedio en el espectro mutante. Un sesgo mutacional en favor de
las transiciones G → A y C → U proporcionan evidencia adicional de una actividad
mutagénica de la Rib. En cuanto a la eficacia antiviral, hubo una gama de actividades
inhibidoras y mutacionales en las que la administración secuencial de un inhibidor
(telaprevir, ciclosporina A, daclatasvir o interferón-) después de la administración del
mutágeno (Rib) fue capaz de reducir la carga viral más eficazmente que la combinación
correspondiente. Los rangos bajo las cuales cualquiera de las combinaciones o terapias
FUNDACIÓN RAMÓN ARECES
Simposio Internacional: Control o erradicación de las hepatitis virales B y C
International Symposium: Control or eradication of viral hepatitis B and C
Barcelona, 30 y 31 de mayo de 2013
Barcelona, May 30-31, 2013
secuenciales podrían ser más eficaces se encuentra bajo investigación. Las perspectivas
de una posible aplicación clínica de mutagénesis letal para controlar los virus altamente
variables VHC y otros se describirán brevemente.
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