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VIRUS VIRUS.- Líquido viscoso, hediondo, venenoso. Los virus son estructuras extraordinariamente pequeñas. Su tamaño oscila entre los 24 nanómetros del virus de la fiebre aftosa a los 300 nanómetros de los poxvirus. 1576 charles L`Ecluse, publica sus observaciones sobre la alteración del color de los tulipanes. La primera referencia sobre la existencia de los virus se debe a Dimitri Ivanovski en 1892. Buscaba el agente causante de la enfermedad denominada Mosaico del tabaco, concluyendo que se trataba de una toxina o de un organismo más pequeño que las bacterias, el agente atravesaba los filtros que retenían las bacterias. Denominó a estos agentes patógenos virus filtrables. 1915-1917 Twort y d’Herelle, observaron la aparición de manchas en cultivos de laboratorio, que se desarrollaban conjuntamente con las bacterias.”es un microbio invisible, que se filtra, pero un virus parásito en las bacterias “bacteriofago”( del griego phage que significa devorar). Los virus son cristalizables, como demostró W. Stanley en 1935. Esto significa que las partículas víricas tienen formas geométricas y que son idénticas entre sí, lo cual las separa de la irregularidad característica de los organismos, y las acerca a las características de los minerales. 1931, con el uso de filtros de tamaño de poro inferior, con las técnicas de cultivo celular in vitro que permitían la obtención de gran cantidad de virus, con la ultracentrifugación y finalmente con el microscopio electrónico y la difracción de rayos X, se logró visualizar a estos agentes. Por último, los estudios en torno a la quimioterapia antiviral y el uso del interferón brinda perspectivas alentadoras en la lucha contra las infecciones antivirales. En el campo de la producción de vacunas para la obtención de nuevos productos biológicos (mediante procesos biotecnológicos modernos), que permiten la inmunización efectiva contra las infecciones virales Introducción Entidades orgánicas compuestas tan sólo de material genético, rodeado por una envoltura protectora. Carecen de vida independiente, pero se pueden replicar en el interior de las células vivas, perjudicando en muchos casos a su huésped en este proceso. Los virus más largos tienen una anchura que está por debajo de los límites de resolución del microscopio óptico, utilizado para estudiar bacterias y otros microorganismos. Características Los virus son parásitos intracelulares obligados submicroscópicos, compuestos por ARN o ADN —nunca ambos— y una capa protectora de proteína o de proteína combinada con componentes lipídicos o glúcidos. Poseen un nivel de organización que los ubica por debajo del nivel celular. La partícula viral completa se llama virión. Están desprovistos de mecanismos enzimáticos y energéticos por lo que en un ambiente extracelular se ven impedidos de expresar sus propiedades genéticas de manera independiente. Al penetrar en células susceptibles tienen la capacidad de expresar su potencial genético y dirigir la síntesis de nuevas partículas (viriones) MORFOLOGÍA VIRAL Virus complejo Icosaédrica Muchos virus con estructura helicoidal interna presentan envolturas externas (también llamadas cubiertas) compuestas de lipoproteínas, glicoproteínas, o ambas. tienen forma de ladrillo y una composición compleja de proteínas. Sin embargo, estos últimos tipos de virus son excepciones y la mayoría tienen una forma simple Los virus complejos, como algunos bacteriófagos, tienen cabeza y una cola tubular que se une a la bacteria huésped. Principlaes criterios utilizados en taxonomía Tipo de ácido nucleico • Morfología de la cápside • Presencia o ausencia de envoltura • Estructura del genoma • Secuencia genómica • Estrategia de replicación y expresión génica • Forma de transmisión y tipo de vector involucrado • Organismos hospedantes • Sintomatología CLASIFICACIÓN DE LOS VIRUS Dependiendo del tipo de célula que infectan, los virus se clasifican en: a. Virus animales b. Virus de plantas c. Virus de bacterias o bacteriófagos Los virus animales se clasifican tomando en cuenta las características siguientes: 1. Características primarias 1.1 Organización de la cápsida a. Forma y tamaño de la partícula viral b. Número de capsómeros c. Presencia o ausencia de cubierta lipídica d. Simetría de la nucleocápsida 1.2 Estructura del ácido nucleico a. Tipo de ácido nucleico b. Número de cadenas c. Peso molecular del ácido nucleico d. Número aproximado de genes 1.3 Presencia de transcriptasa 2. Características secundarias Los virus no se nombran usando el esquema binomial clásico que se utiliza para los otros microorganismos,otras veces a los virus se les denomina con el nombre de la enfermedad que causan, por ejemplo, virus de la rabia, virus del sarampión, etc. CLASIFICACIÓN Cuadro 1 - Grupos principales de virus entéricos humanos con virión desnudo1 Diámetro de los filamentos de Tipo de ácido nucleico ácido nucleico RNA DNA 25 35 nm Astrovirus (monocatenario) Calicivirus Picornavirus Parvovirus 70 85 (bicatenario) Adenovirus nm Reovirus Rotavirus ¹Una envoltura en un virus es una envoltura lipídica externa que deriva de la membrana plasmática de la célula huésped en la cual se produjo el virus. Cuadro 2 - Algunas causas virales de hepatitis en humanos. Adaptado de Cliver. 1997 Tipo A B Nombre anterior Modo de transmisión Hepatitis infecciosa Fecal-oral Hepatitis sérica Parenteral C D E No-A, no-B Agente delta No-A, no-B Parenteral Parenteral Fecal-oral VIRUS ANIMALES(*) Adenoviridae: Arenaviridae: (cepas adaptadas en el laboratorio) Bunyaviridae* Género Bunyaviridae Bunyamwera y virus relacionados Género Phlebovirus Caliciviridae: todos los aislamientos (inclusive Hepatitis E y Norwalk) Coronaviridae Coronavirus humano, todas las cepas Virus porcino de la gastroenteritis contagiosa Virus porcino de la encefalomielitis hemaglutinante Virus de la hepatitis del ratón Coronavirus bovino Virus de la peritonitis infecciosa de felinos Virus de la bronquitis infecciosa en aves Coronavirus de ratas, conejos y canino Flaviviridae Virus de la fiebre amarilla ( cepa 17D de la vacuna) Virus del dengue (serotipos 1,2,3,4) Virus Kunjin Hepadnaviridae Virus de la hepatitis B, inclusive el agente Delta Herpesviridae Alphaherpesvirinae Género Simplexvirus: Género Varicellovirus: todos los aislamientos inclusive varicela /zoster (HHV3) y el virus de la pseudorabia Betaherpesvirinae Género Citomegalovirus, Género Muromegalovirus Gammaherpesvirinae Género Linfocriptovirus: Género Rhadinovirus: Género Thetalinfocriptovirus: Herpes virus no asignados inclusive HHV 6 (virus linfotrópico humano), HHV 7, HHV 8, etc. Orthomyxoviridae Género Influenzavirus Virus de la influenza tipo A, todos Virus de la influenza tipo B, todos Virus de la influenza tipo C, todos los aislamientos Papovaviridae Género Paramyxovirus, todos Gérero Pneumovirus, todos Género Morbillivirus, todos los aislamientos ( excepto Rinderpest) Genero Parvovirus: todos los aislamientos Género Aftovirus Género Cardiovirus: todos Género Enterovirus: todos Género Hepatovirus: todos (Hepatitis A) Género Rhinovirus: todos los aislamientos Poxviridae Cordopoxvirinae (poxvirus de vertebrados) Género Capripoxvirus Género Molluscipoxvirus Género Yatapoxvirus Género Avipoxvirus: todos Género Leporipoxvirus: todos Género Ortopoxvirinae: todos los aislamientos (excepto Variola y viruela de monos Género Parapoxvirus: todos los aislamientos Género Suipoxvirus (viruela de cerdos. Todos los demás virus de viruela de vertebrados, no agrupados Reoviridae Género Orbivirus; todos los aislamientos Género Ortoreovirus, tipos 1,2 y 3 Género Rotavirus: todos los aislamientos Retroviridae Oncovirinae Género Oncornavirus C Subgénero Oncornavirus C aviario: todos los aislamientos Subgénero Oncornavirus C de mamíferos todos los aislamientos excepto HTLV-1, HTLV-2 Género Oncornavirus B: todos Lentivirinae: todos excepto HIV-I, HIV-II Spumavirinae: todos los aislamientos Rhabdoviridae Género Vesiculovirus (todas las cepas adaptadas en el laboratorio) Género Lyssavirus: Virus de la rabia (virus fijado) Togaviridae Género Alfavirus* Virus de la selva Semliki Sindbis O´Nyong-Nyong Virus del rio Ross Encefalitis equina venezolana (cepa TC-83, no de inoculación en animales) Género Rubivirus Virus de la rubéola Género Pestivirus Virus de la hepatitis C Virus de la diarrea bovina Género Arterivirus Virus de arteritis equina Virus no clasificados Toroviridae Otros virus de hepatitis Virus de la enfermedad de Borna Astrovirus Priones Se llama así a las proteínas que actúan como agentes infecciosos en algunas enfermedades del sistema nervioso de ovejas, vacas y otros animales. Se denomina prion a la forma alterada de una proteína celular funcional (PrPC en mamíferos) que ha podido perder su función normal pero que ha adquirido la capacidad de transformar la forma normal en patológica. Encefalopotía espongiforme transmisible (EET), se aplica a un conjunto de enfermedades del sistema nervioso por las que el cerebro adquiere un aspecto parecido a una esponja (de allí su denominacion). Las que padecen los humanos son el kuru, la enférmedad de CreutzfeldtJokob (ECJ) el síndrome de Gerstman SträusslerScheinker (GSS) y el insomnio fatal familiar (IFF); las de los animales incluyen el scrapie de ovejas y cabras, las encefalopatías transmisibles de visones, bovinos, felinos y antilopes y la enfermedad del agotamiento crónico de mulas y ciervos en cautiverio. Son proteínas celulares que no contiene ácidos nucleicos, a su vez no son virus ni microorganismos. La proteína prion (PrP) es codificada por un único gen llamado PRNP, presente en humanos, mamíferos, aves y reptiles. Aún no se ha descubierto cuál es la vía de transmisión de la EEB. Sin embargo, se cree que el ganado puede contraer EEB al ser alimentado con harina de huesos o piensos procedentes de cadáveres de animales con esta enfermedad. Pero no se ha descartado la posibilidad de que existan otras vías o causas de transmisión. A pesar de que no se ha demostrado científicamente que exista un relación causa-efecto entre la ingestión de material infectado con EEB y la enfermedad de CreutzfeldtJacob (vECJ), se cree que sólo las personas que hayan consumido "material especificado de riesgo" (MER) corren el riesgo de sufrir dicha enfermedad. El MER se refiere a las partes de las reses con mayor probabilidad de estar infectadas por el agente EEB, como el sistema nervioso central, el cerebro, la médula espinal, los ojos y parte del intestino grueso. El agente EEB no se ha detectado en la carne de los músculos ni en la leche y los expertos de la OMS y de la UE consideran que se puede consumir la carne y la leche de vaca sin peligro para la salud. Existen estrictas legislaciones que regulan la alimentación del ganado, la realización de pruebas, la edad y forma de realizar la matanza para el consumo humano y la retirada de los órganos con riesgo de infección. Los priones resisten intentos de inactivación por nucleasas, UV, agentes queladores, variación de pH, proteasas… Pero sí baja la infectividad con urea, hervir en SDS o autoclave a 132ºC durante más de 2 horas… La ausencia de la pared celular convierte los microorganismos en resistentes a penicilinas, cefalosporinas y otros antibióticos que interfieren con la pared. M. primatum y M. spermatophilum han sido detectados en el aparato urogenital, pero no se han encontrado estudios que los relacionen con la enfermedad. Por su parte, M. amphoriforme fue detectado en pacientes inmunodeficientes con bronquitis crónica o bronquiectasias, pero no en el aparato urogenital. El Mycoplasma pirum ha sido detectado en el recto, pero no en el aparato urogenital, de hombres homosexuales. Sin embargo, si este germen desempeña algún papel como causa de enfermedad aún se desconoce. Lo mismo sucede con M. penetrans, aislado de la orina de hombres homosexuales VIH positivos. Estos gérmenes no fueron aislados en mujeres. Forma: cocoide u ovoide Tamaño: 200 nm genoma pequeño de 1000 KD Tinción: GramMovilidad: inmóviles. No tienen flagelos, pero se pueden mover por deslizamiento ya que poseen microfibrillas Relacion con el oxígeno: anaerobios facultativos Esporo: no esporulados no poseen pared celular Cápsula: algunas especies la presentan y gracias a ella son más resistentes Temperatura: su óptima es de 37ºC Requerimientos nutricionales: Son muy exigentes, necesitan medios con suero, extracto de levadura, glucosa e inhibidores Hábitat: son parásitos de la mucosa respiratoria y urogenital, mama e intestino del hombre y animales domésticos Medio: suero de cerdo o caballo para dar esteroles, el extracto de levadura como fuente de vitaminas y oligoelementos, glucosa o arginina para energía e inhibidores para que no se desarrollen otras bacterias, se suele utilizar penicilina . En medio líquido poco enturbiamiento y si se da rotación se desarrollan más fácilmente. Para producir enfermedad, necesitan FACTORES PREDISPONENTES: acumulo de animales, falta de higiene.... Son bastante específicas para cada especie animal Clasificación y ubicación taxonómica Clase: Mollicutes, Orden: Mycoplasmatales, Familia: Mycoplasmataceae, Género: Mycoplasma y Ureaplasma, con numerosas especies integrantes. Dentro de estas destacamos por su importancia en patología humana a: Mycoplasma pneumoniae, Mycoplasma hominis, Mycoplasma genitalium y Ureaplasma urealyticum. Poseen un tamaño de 300 a 800 nm, no poseen pared celular, elevada sensibilidad al pH, a los gradientes osmóticos y su resistencia natural a aquellos antibióticos que actúan sobre la pared celular bacteriana. Requieren de esteroles, ácidos grasos, purinas y pirimidinas adicionados al medio. La mayoría son anaerobios facultativos, aunque se recomienda una atmósfera de anaerobiosis para su aislamiento primario. CULTIVO DE LOS MICOPLASMAS Los medios de cultivo se deben enriquecer con suero animal (caballo o conejo) o líquido ascítico humano. Estos líquidos aportan los ácidos grasos no saturados y los esteroles que se requieren para la síntesis de la membrana citoplasmática. El medio de cultivo más utilizado para los micoplasmas contiene: caldo cerebro-corazón suplementado con 0,5% de glucosa, 0,2% de arginina, 10% de extracto de levaduras, 20% de suero de caballo, rojo fenol, penicilina o acetato de talio (250 μg/ml) y agar 0,6-0,8%. Los plásmidos se pueden clasificar en dos grupos : Los conjugativos y no conjugativos : P. conjugativos: codifican pili sexuales y proteínas necesarias para la transferencia de DNA. P. R (resistencia a los antibióticos, mercurio). P. Producción de bacteriocinas y antibióticos. Los conjugativo: codifican pili sexuales y proteínas necesarias para la transferencia de DNA. E coli, posee un plásmido conjugativo llamado Factor F: - Capacidad para sintetizar pili. - Movilización del DNA para su transferencia. - Alteración de receptores de la superficie de la célula. Cada plásmido contiene al menos una secuencia de ADN que sirve como un origen de replicación u ORI (un punto inicial para la replicación del ADN), lo cual habilita al ADN para ser duplicado independientemente del ADN cromosomal. Los plásmidos de la mayoría de las bacterias son circulares, pero también se conocen algunos lineales, los cuales reensamblan superficialmente los cromosomas de la mayoría de eucariotes. Los plásmidos sirven como una importante herramienta en laboratorios de genética e ingeniería bioquímica, donde son comúnmente usados para multiplicar (hacer muchas copias de) o como genes particulares expresos. Muchos plásmidos están disponibles comercialmente para dichos usos. • Los plásmidos usados en ingeniería genética son llamados “vectores”. Estos son usados para transferir genes desde un organismo a otro y típicamente contienen un marcador genético confiriendo un fenotipo el cual puede ser seleccionado a favor o en contra. La mayoría también contienen un polivinculador o sitio de clonado múltiple (MCS), el cual es una pequeña región que contiene los sitios de restricción más comúnmente usados, permitiendo una fácil inserción de fragmentos de ADN en ese lugar.