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Especialización en Reproducción bovina 2011
IRAC
CLASIFICACIÓN, MICROMANIPULACIÓN Y CONGELADO DE
EMBRIONES BOVINOS
Fecha: ___________
Nombre y Apellido: ___________________
Objetivo:
1. Transferir lo estudiado a lo largo del curso en la resolución de las actividades
presentadas.
Criterios de evaluación:
1. Manejo conceptual, nivel de profundización y capacidad para establecer
relaciones.
2. Capacidad crítica y posibilidad de realizar análisis personales.
3. Integración y transferencia de lo estudiado a situaciones concretas.
1. Observe las fotografías de embriones y en base al Sistema de Evaluación de
embriones de la Sociedad Internacional de Embriones (IETS) haga una
clasificación de los embriones según:
a. el estadio de desarrollo
b. la Calidad (grado 1,2,3,4).
c. Explique para cada fotografía la/s característica/s que tuvo en cuenta
para calificar los embrión.
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La 1 es un embrión 4 –2 por tener la Zona pelúcida Rota se lo clasifica como
grado 2 a pesar de que el embrión es grado 1, por lo tanto se puede transferir
en fresco pero no congelar
La foto 2 es un embrión 3-1 se ve la masa celular bien compacta
La 3 es un embrión 4 – 2 ya que podemos ver el que la masa celular intacta
está entre un 50% y un 84%.
La 4 es un embrión 4 – 3 porque podemos ver menos del 50% de la masa
celular intacta.
La 5 es degenerado porque no se distingue la masa celular y se ven
blastómeros sueltas
La 6 vemos 3 embriones 4 – 1, 2 embriones 5 – 2 y dos embriones 6 – 1
La 7 vemos un embrión 4 –2 porque la masa celular esta entre un 50% y un
84% intacta.
La 8 vemos un embrión 4 – 3
celular intacta.
porque tiene menos del 50% de la masa
La 9 vemos un ovocito infertilizado ya que no podemos distinguir células y los
bordes son bien lisos.
2. Realice una comparación entre el método de congelado de embriones con
etilenglicol y la vitrificación teniendo en cuenta: medios de congelado, toxicidad,
curva de congelado, método de descongelado y practicidad (costos,
entrenamiento, etc).
Congelación en forma tradicional
 Clasificar embriones y lavar
 Exponer embriones a temperatura ambiente (22º C)
 Colocarlos en EG 1,5 M y cargar pajuelas. Tiempo desde que se colocan
en EG y en la congeladora debe ser de 5 a 10 min dependiendo la
temperatura ambiente ( 5 min a 22º C)
 Colocar las pajuelas en la congeladora a -6´5 ºC
 Realizar el seeding
 Congelar a 0,5 ºC por minuto hasta -35 ºC
 Colocarlas en N2
Descongelado
Colocar las pajuelas en Baño maría a 30 ºC hasta que se descongele la pajuela
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Sacar la pajuela y transferir el embrión dentro de los 15 minutos de
descongelada
Vitrificación
 Clasificar y lavar embriones
 Exponer embriones durante 1 a 3 minutos a temperatura ambiente (22
ºC) en una solución de equilibrio (10% DMSO + 10% EG )
 Pasar el embrión a una segunda solución, denominada solución de
vitrificación, cuyo volumen no debe ser mayor de 5 uL. (20% de DMSO +
20% EG )
 Colocar el extremo mas fino de la OPS en la gota, para que por medio
de capilaridad los embriones se almacenen en el extremo con la menor
cantidad de liquido posible.
 Sumergir OPS en N2
 Guardar OPS dentro de los goblets para ser almacenado en termos de
N2
Descongelado
Colocar la OPS en gotas de 0,25 M de sacarosa ara un descongelamiento
gradual y el control de la entrada de agua a las células
Los medios de congelado poseen cierta toxicidad para los embriones. Es por
ello que se debe respetar el tiempo de cada paso para disminuir los riesgos al
mínimo. Las soluciones de vitrificación son más tóxicas que las de congelado
tradicional es por ello que se debe tener mayor cuidado en la vitrificación
La curva de congelado en el proceso tradicional es gradual como se menciona
en el protocolo mientras que en la vitrificación no lo es. En este proceso la
temperatura desciende abruptamente desde la temperatura ambiente a la del
N2 líquido.
En cuanto a la practicidad, el congelado tradicional con etilenglicol presenta
una serie de ventajas con respecto a la vitrificación ya que podemos
descongelar la pajuela a baño maría y transferir ese embrión directamente. En
la Vitrificación debemos descongelar el embrión en diferentes soluciones antes
de transferirlo por lo que necesitamos alguien entrenado con una lupa para
desarrollar la tarea y un lugar apto para la misma en el campo donde
transferimos
Tanto para realizar el congelado o la vitrificación de los embriones requerimos
equipamiento y personal entrenado para realizar la tarea. Los costos son
similares para la tarea lo que si para la congelación tradicional necesitamos
una congeladora de embriones que es mucho más costosa que el kit de
vitrificación.
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