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CLASIFICACIÓN, MICROMANIPULACIÓN Y CONGELADO DE EMBRIONES
BOVINOS
Fecha: 14/10/2013
Nombre y Apellido: Darío López
Objetivo:
1. Transferir lo estudiado a lo largo del curso en la resolución de las actividades presentadas.
Criterios de evaluación:
1. Manejo conceptual, nivel de profundización y capacidad para establecer relaciones.
2. Capacidad crítica y posibilidad de realizar análisis personales.
3. Integración y transferencia de lo estudiado a situaciones concretas.
1. Observe las fotografías de embriones y en base al Sistema de Evaluación de embriones de la
Sociedad Internacional de Embriones (IETS) haga una clasificación de los embriones según:
a. el estadio de desarrollo
b. la Calidad (grado 1,2,3,4).
c. Explique para cada fotografía la/s característica/s que tuvo en cuenta para calificar los
embrión.
a. Estado: 4
b. Calidad: 1
c. Características: este embrión muestra una masa celular muy adecuada al observarse que
casi todas las células poseen en mismo tamaño y muestran una compactación muy
armoniosa, el detalle más característico y limitante seria la rotura de la zona pelúcida la
cual evita comercializar este embrión de manera internacional
a. Estado: 7
b. Calidad: 2
c. Características: Este embrión muestra que su zona pelúcida a pasado por cambios al
mostrarse mucho más delgada lo que supone una expansión de la masa celular que
provoco su estiramiento, esta foto muestra una posterior contracción que es un proceso
normal del embrion, la calidad de celular de este embrión es de un grado 2 ya que muestra
células de mayor tamaño pero no superan un 25% de la masa embrionaria.
a. Estado: 4
b. Calidad: 1
c. Características: estos dos embriones tienen la zona pelúcida intacta y su masa celular es
muy adecuada, su desarrollo supone el día 7 del ciclo
a. Estado: 4
b. Calidad: 2
c. Características: Este embrión muestra una zona pelucida intacta, pero su masa celular
muestra la presencia de células muy grandes que presumen más del 15% del total, por
este motivo se considera un grado de calidad dos y su desarrollo es acorde del dia 7 del
ciclo
a. Estado: 4
b. Calidad: 2
c. Características: igual que el anterior embrión su estado de desarrollo supone el día 7 del
ciclo, pero al mismo tiempo su masa celular muestra células grandes que sobrepasan el
15% del total, entonces es un embrión de calidad 2.
a. Estado: 4
b. Calidad: 2
c. Características: Su zona pelúcida está intacta y su grosor es bueno, su macizo celular es
importante, pero tiene células desprendidas y grandes que superan el 15%, por la
fotografía este parece ser un embrión obtenido in vitro
a. Estado: 1
b. Calidad:
c. Características: este es un embrión infertilizado se nota el material genético muy picnotico
una, y sus bordes se notan lisos lo que me inclina a que no hay formación celular
2. Realice una comparación entre el método de congelado y la vitrificación de embriones teniendo
en cuenta: medios de congelado, toxicidad, curva de congelado, método de descongelado y
practicidad (costos, entrenamiento, etc.).
Congelado
Vitrificacion
medios de
congelacion
La criopreservacion convencional
involucra el uso de glicerol o
etilenglicol
El congelado rapido o la vitrificacion pueden ser llevadas a
cabo mezclando crioprotectores como el gliceron y
etilenglicol, glicerol y propanediol o etilenglicol y
propanediol, combinados con sacarosa, tetralosa o
galactosa
toxicidad
En el caso del congelado tradicional al
manejarse niveles más bajos de
concentración de los crioprotectores la
toxicidad es mucho menor que en el
caso de la vitrificación
la utilización altas concentraciones de los crioprotectores
involucra una alta toxicidad por lo que se busca un manejo
mucho más rápido en el proceso, se han asociado uno o
más crioprotectores para disminuir el nivel de toxicidad
la curva de enfriamiento es más lento
y controlado ya que se realiza un
curva de
descenso controlado de la
curva de enfriamiento más rápida a una tasa de
congelamiento temperatura de (0,3 a 1 °C/min), hasta 2500°C/min
los -35%, para luego ser sumergido en
Nitrógeno liquido
Método
congelado
Para el fin de vitrificar embriones existen muchos métodos
diferentes pero uno de los más reconocidos y que sigue
adecuadamente todos los lineamientos para evitar el daño
Para congelar embriones de forma
del embrión es el método de OPS, el cual se realiza
tradicional, primero los embriones
colocando de 2 a 3 minutos los embriones a 20°C en una
deben estar a temperatura ambiente
solución de equilibrio (10%DMSO + 10% EG en PBSm,
(22°C), los cuales pasan por el glicerol
después se pasa a los embriones a una segunda solución
o el etilenglicol con el fin de
llamada solución de vitrificación la cual tiene un volumen
deshidratar el embrión ,
menor a 5uL, en este momento se deposita los embriones
posteriormente se realiza el seedin
en otra gota no mayor a 1uL acá no deben pasar más de 25
(formación inicial de hielo) entre -5 y ser entre las dos gotas (la solución de vitrificación consta de
7 °C, después un descenso lento de
20% DMSO + 20% EG en PBSM), para el envase se ha
temperatura hasta -35°C y finalmente
diseñado con anterioridad un capilar con una pajuela de
sumergido en el nitrógeno liquido 0.25 expuesta al calor, el cual es colocado en la gota y los
196°C
embriones almacenados en el extremo inferior del envase,
posteriormente se sumergen los OPS en nitrógeno líquido,
en su correspondiente gobelet debidamente identificado
El descongelamiento de embriones en
glicerol consta de tres pasos el
primero es colocar el embrión en una
solución de glicerol 0,75M y sacarosa
0,3M por 5 minutos, el segundo paso
es pasar al embrión en una solución de
glicerol de 0,375 y sacarosa 0,3M por 5
minutos, y el tercer paso es pasar al
embrión a una solución de sacarosa
Descongelado por 5 minutos, por último se coloca al
embrión en medio de mantenimiento
se carga en la pajuela y se transfiere.
Para descongelar embrión es en
etilenglicol el procedimiento es mucho
más rápido y practico ya que lo único
que hace falta es sumergir a la pajuela
con el embrión en agua a 25 - 30° por
30 segundos y el embrión está listo
para transferirlo a la receptora
El proceso de descongelamiento se realiza atreves de la
exposición de las OPS en gotas de 0,25M de sacarosa, lo
que permitirá que el descongelamiento sea gradual y se
controle la entrada de agua a las células, luego hay que
pasar al medio de mantenimiento, enpajuelar y transferir.
Practicidad
La mayoría de embriones comerciales
en la actualidad han sido congelados
por medio del etilenglicol, lo que
permite una transferencia directa, es
muy práctico a campo ya que no hace
falta el buscar el embrión en el
momento de la transferencia, este
método permite que este
procedimiento sea muy apetecido y
ampliamente utilizado.
Lo que ofrece la técnica de in vitro es un gran
aprovechamiento de material genético ya que permite
obtener un gran número de embriones deseados, en el
caso de tener que aprovechar una pajuela de semen muy
costosa o preciada la mejor opción es la fertilización in
vitro, también se da el caso de vacas problemas las cuales
no se pueden colectar in vivo por algún problema no
genético las cuales se pueden aprovechar con la
fertilización in vitro, pero esta técnica se ha condicionado
ya que el congelado de dichos embriones no ofrece buenos
índices de preñez entonces todo se tiene que realizar por
decirlo de alguna manera en fresco, esta técnica está
siendo utilizada de forma exitosa e incrementado de gran
manera el progreso genético de un rodeo, hablando de
practicidad la técnica en de fertilización in vitro es muy
adecuada teniendo un laboratorio que trabaje con este tipo
de tecnología y un buen volumen de receptoras para hacer
efectivo el procedimiento y para el caso de la vitrificación
de embriones aún sigue siendo poco práctico a campo ya
que no se puede realizar de forma directa además de su
poca friabilidad por sus bajos índices de preñez
3. Enumere al menos 3 factores importantes para la obtención de preñeces a partir de la
transferencia de embriones micro manipulados (hemi-embriones)
 Es muy importante que el técnico que se ocupe del corte de los embriones este muy bien
capacitado ya que es un proceso efectivo pero hay que ser muy metódico, ordenado para
lograr buenas tasas de preñez
 Un aspecto muy importante es la calidad de los embriones ya que interviene sobre una
división exitosa, los embriones de buena y muy buena calidad alcanzan el 80% de
sobrevivencia y el 25% de mellizos idénticos.
 la calidad de la mitad de cada hemi-embrion afecta el porcentaje de preñez