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Bacterias sin pared y Bacterias intracelulares obligadas Objetivo Conocer las principales características biológicas de los Mycoplasmas, Chlamydias y Rickettsias, su capacidad para producir infecciones, las posibilidades diagnósticas y las medidas profilácticas 1 Mycoplasmas - Taxonomía Clase Mollicutes Familia Mycoplasmataceae Géneros Mycoplasma Ureaplasma Especies M. pneumoniae M. hominis U. urealyticum 2 Mycoplasmas - Características generales • No poseen pared celular (Bacterias carentes de pared celular) • Poseen esteroles en su membrana celular • Requerimiento de lípidos complejos preformados (colesterol) • Anaerobios facultativos y algunos anaerobios estrictos • Son pleomórficos (esféricos hasta filamentosos) • Pueden desplazarse por movimiento ameboide en medios líquidos • Pueden existir como saprófitos o producir enfermedades • Genoma pequeño • Resistencia natural a los beta lactámicos 3 FACTORES DE VIRULENCIA • • • • • • Proteína P1 (Mycoplasma pneumoniae) P50 y P100 (Mycoplasma hominis) Glicopéptido sulfatado Fosfolipasa (Ureaplasma urealyticum) Disminución de la actividad macrofágica Nucleasas 4 Mycoplasma pneumoniae • El determinante de patogenicidad es la producción de peróxido de hidrógeno que produce la muerte de las células epiteliales por mecanismos desconocidos. • Coloniza las vías respiratorias superiores • Se adhiere a las células de la mucosa respiratoria inferior. • Produce neumonía atípica primaria • Se propaga por contacto directo de hombre a hombre • Afecta a todas las edades y suelen producirse brotes familiares 5 M. pneumoniae - Diagnóstico • Cultivo a partir de secreciones respiratorias: no es muy utilizado pues se necesitan medios especiales, muy enriquecidos y con inhibidores para otras bacterias. • Detección de anticuerpos en el suero del paciente: puede hacerse por ELISA, aglutinación de látex o inmunofluorescencia indirecta • Los síntomas y los datos epidemiológicos contribuyen mucho al diagnóstico etiológico 6 M. hominis y U. urealyticum • Son flora habitual del aparato génitourinario. • Su determinante de patogenicidad es la producción de amoníaco a partir de la urea (U. urealyticum) y de la arginina (M. hominis) • Pueden producir inflamación oportunista tanto en el hombre como en la mujer. • Las manifestaciones son uretritis en el hombre y vaginosis en la mujer por asociación con otras bacterias. • Pueden producir complicaciones en el hombre, la mujer y en el recién nacido. 7 DIFICULTADES DIAGNÓSTICAS • No se colorea al Gram • Necesitan medios especiales (ricos, antibióticos, suero equino) • Método comercial costoso • Medio de cultivo artesanal - Obtención del suero equino • Limitaciones presupuestarias 8 Mycoplasmas urogenitales - Diagnóstico • Cultivo a partir de secreciones genitales: no es muy utilizado pues se necesitan medios especiales, muy enriquecidos y con inhibidores para otras bacterias. • Detección de anticuerpos en el suero del paciente: puede hacerse por ELISA o inmunofluorescencia indirecta. • Los síntomas y los datos epidemiológicos contribuyen mucho al diagnóstico etiológico 9 Chlamydias - Taxonomía Familia Chlamydiaceae Géneros Chlamydia Especies C. psittaci C. pneumoniae C. trachomatis Biovar LGV (linfogranuloma venéreo) Biovar TRIC (Tracoma-conjuntivitis de inclusión) 10 Chlamydias - Características generales • • • • • • • Parásitos intracelulares obligados Son incapaces de sintetizar ATP Por mucho tiempo se los consideró virus Estructura de pared de gramnegativas Son cocoides e inmóviles No observables con Gram por su pequeño tamaño Poseen dos formas biológicas: – Cuerpo elemental (CE): infectivo y no replicante – Cuerpo reticulado (CR): no infectivo y replicante 11 Chlamydias - Ciclo vital Cuerpo elemental infectante Ingreso por endocitosis Endososoma Lisosomas Lisosomas Núcleo Eliminación de la progenie Formación del cuerpo de inclusión Transformación en cuerpo reticulado Multiplicación del CR 12 Chlamydias - Patologías Especie Patología Transmisión C. trachomatis Biovar LGV Linfogranuloma venéreo Sexual C. trachomatis Biovar TRIC Tracoma Conjuntivitis Infecciones genitales Contacto directo Sexual Durante el nacim. C. pneumoniae Neumonía atípica Respiratoria C. psittaci Psitacosis Aves al hombre 13 Chlamydias - Diagnóstico • MÉTODOS DIRECTOS – – – – Cultivo en líneas celulares Observación con Lugol y Giemsa (Cuerpos de inclusión) Detección por Inmunofluorescencia directa o ELISA Detección por PCR • MÉTODOS INDIRECTOS – Detección de anticuerpos por IFI o ELISA 14 Inmunofluorescencia La sensibilidad y especificidad de la IF con el uso de anticuerpo monoclonales para el MOMP (Mayor Outer Membrane Protein) de C. trachomatis es del 80-90% y 98-99 % respectivamente. La IF tiene mayor sensibilidad que la EIA ya que permite detectar de 10 a 100 cuerpos elementales. Ventajas: • Se independiza del transporte • Se puede utilizar para una gran variedad de muestras • Tiene alta especificidad • Se puede utilizar como método confirmatorio de otros métodos cuando existen discrepancias. Desventajas • Necesita de un microscopio de fluorescencia de gran resolución 15 PCR Las técnicas moleculares (PCR) tienen hasta un 96% de sensibilidad. Detectan en forma directa el ADN bacteriano. Permite detectar 1 cuerpo elemental presente en la muestra Ventajas • Se independiza del transporte • Se pueden utilizar muestras no invasivas (Ej. Orina) • Muy alta sensibilidad y especificidad. Desventajas • Se pueden tener falsos negativos por presencia de inhibidores • Alto costo 16 Rickettsiales y Legionellales - Taxonomía Familias Rickettsiaceae Coxiellaceae Géneros Rickettsia Ehrlichia Coxiella Especies R. rickettsii C. burnetii R. prowasekii R. typhi E. chaffeensis 17 Rickettsiales - Características generales • • • • • • Parásitos intracelulares obligados Son incapaces de sintetizar ATP Estructura de pared de gramnegativas Pueden ser cocoides, bacilares o pleomórficas No observables con Gram por su pequeño tamaño Habitan en artrópodos hematófagos que actúan como vectores o huéspedes primarios. 18 Rickettsia y Coxiella - Patogenicidad • Estas bacterias infectan eritrocitos, células retículoendoteliales y epitelio vascular. • Penetran a la célula huésped induciendo la endocitosis • Rickettsia abandona el endosoma y se reproduce en el citoplasma mientras que Coxiella se reproduce en el endolisosoma luego de la fusión del endosoma con el lisosoma. • Finalmente la célula del huésped estalla, liberando organismos nuevos. • Además de los efectos de la lisis celular el huésped padece los efectos de la toxicidad de la pared. • Los síntomas aparecerán en función del tejido afectado (epitelio pulmonar, endotelio vascular o monocitos circulantes) 19 Epidemiología Agente Vector Reservorio Transmisión Patología Manifestación Garrapatas Roedores, perros, zorros Picadura del artrópodo Fienre manchada Vasculitis Fiebre R. prowazekii Piojos Hombre Heces del artópodo Tifus epidémico Vasculitis Fiebre R. typhi Pulgas Roedores Heces del artópodo Tifus endémico Vasculitis Fiebre E. chaffeensis Garrapatas Animales salvajes Picadura del artrópodo Erliquiosis Enfermedad febril inespecífica C. burnetii Garrapatas (sólo en los animales) Animales salvajes y domésticos Inhalación de polvo contaminado Fiebre Q Neumonía atípica R. rickettsii 20 Diagnóstico • MÉTODOS DIRECTOS – – – – Cultivo en líneas celulares Observación con Giemsa (Excepto para Coxiella) Detección por Inmunofluorescencia directa en las muestras Detección por PCR • MÉTODOS INDIRECTOS – Detección de anticuerpos por IFI • IgG > 1/128 e IgM > 1/32 21