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Aspectos técnicos del
diagnóstico de VIH
David Dalmau* y Piedad Arazo**
* Hospital Mutua Terrassa. Barcelona
** Hospital Miguel Servet. Zaragoza
Contenido
 Métodos indirectos o serológicos
 Métodos directos o virológicos
 Pruebas de detección rápida
 Pruebas de cribado o screening y pruebas de
confirmación
 Período ventana
CICLO DE REPLICACIÓN DEL VIH
VIH-1. DISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA
Historia natural del VIH y cinética de sus marcadores
MOLECULAR BIOLOGY OF HIV
Plasma HIV RNA
p24 antigen
Dias
Meses
DNA PCR
RNA PCR
p24 Ag
Anti-HIV
* from ANAES Report January 2000
Anti-HIV Ab
Años después infección VIH
8-17 días*
12-26 días*
20-45 días*
Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH
 Métodos directos
 Cultivo viral
 Antigenemia p24
 Detección de ácidos nucléicos
 Métodos indirectos
 Pruebas de detección o cribado
 Pruebas de detección rápida
 Pruebas de confirmación
Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH
 Métodos directos
 Cultivo viral
 Procedimiento complejo con sensibilidad
muy variable en los distintos estadios de la
infección y en distintos laboratorios.
 Antigenemia p24
 Detección del antígeno p24 del virus.
Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH
 Métodos directos
 Detección de ácidos nucléicos
 Detección de material genético del
virus mediante amplificación por PCR
 Carga viral plasmática: cantidad de
ARN del virus por mL de plasma.
 Las técnicas ultrasensibles pueden
llegar a detectar hasta 25-40
copias/mL.
Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH
 Métodos directos
 Detección de ácidos nucléicos
 Indicaciones de uso:
 Monitorización del tratamiento
antirretroviral
 Predicción de la progresión
 Valoración del riesgo de transmisión
 Diagnóstico de la infección aguda
Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH
 Métodos indirectos
Detectan la respuesta
inmunitaria (humoral o celular)
del huésped, bien mediante la
detección de anticuerpos
específicos del virus o bien
mediante la investigación de
la inmunidad celular
Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH
 Métodos indirectos
 Pruebas de detección o cribado
 Son las que primero se realizan y sirven
para descartar los resultados
negativos
 Precisan confirmación aquellas que
han sido positivas
 El enzimoinmunoensayo (EIA) es el
método más utilizado como método
de cribado
VIH-1. Diagnóstico
indirectos
Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH
 Métodos indirectos
 Pruebas de detección o cribado
 EIA 3ª generación detecta todas las
subclases de anticuerpos y no sólo
las IgG  mayor sensibilidad para
reconocer la primoinfección (IgM) y
para el diagnóstico de la infección
pediátrica (IgM e IgA).
 EIA 4ª generación detecta al mismo
tiempo al antígeno p24 y a los Ac
frente al VIH  acortamiento del
período ventana.
Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH
 Métodos indirectos
 Pruebas de detección o cribado
 Emplean antígenos similares a los EIA
 Obtención del resultado entre 1 y 20 minutos
 Algunas pueden hacerse en saliva o en sangre
completa
 Sensibilidad comparable a las técnicas de
cribado, especificidad algo menor
 Inconveniente: LECTURA SUBJETIVA
VIH-1. Diagnóstico
indirectos
PRUEBAS
RÁPIDAS
Procedimiento de la prueba instantánea INSTITM (IV)
5
NEGATIVO
POSITIVO
INVÁLIDO
LECTURA INMEDIATA E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:
1 PUNTO DE CONTROL:
RESULTADO NEGATIVO = NO INFECTADO
1 PUNTO DE CONTROL + 1 PUNTO DEL TEST*:
RESULTADO POSITIVO = INFECTADO
AUSENCIA DEL PUNTO DE CONTROL:
PRUEBA INVÁLIDA
*EL COLOR DE LOS PUNTOS DE CONTROL Y DE TEST PUEDE SER DE DIFERENTE INTENSIDAD, HECHO QUE NO INVALIDA EL RESULTADO.
Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH
PRUEBAS DE DETECCIÓN RÁPIDA
Para ser ideal debería reunir los siguientes criterios:
 Alta sensibilidad y especificidad (>99%)
 Ser reproducible
 Ser fácil de aprender, realizar e interpretar
 Ser precisa
 Ser de fácil almacenamiento
 No requerir equipamiento adicional
 No tener carácter invasivo
Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH
PRUEBAS DE DETECCIÓN RÁPIDA
Resultado
negativo
Resultado
reactivo
Resultado
indeterminado
Negativo
definitivo
(salvo periodo
ventana)
Debe
confirmarse
mediante EIA
o Western Blot
Repetir la
prueba en un
mes
VIH-1. Diagnóstico
Pruebas de Detección. EIA
Causas de Falsos Positivos
Relativas al Suero
•
•
•
•
•
•
Congelación-descongelación
Almacenamiento a tª subóptima
Aspecto lipídico, turbio o hemolizado
Contaminación microbiana
Tratamiento con calor >60ºC
Error de extracción o identifiación
indirectos
VIH-1. Diagnóstico
indirectos
Pruebas de Detección. EIA
Causas de Falsos Positivos
Relativas a la Presencia de Autoanticuerpos
•
•
•
•
•
•
•
Anticuerpos anti-HLA-DR4, DQw3
Enfermedades reumatoideas
Polimiositis
Lupus eritematoso
Multitrasfundidos
Trasplantados renales
Multíparas
VIH-1. Diagnóstico
Pruebas de Detección. EIA
Causas de Falsos Positivos
Relativas a Otras Condiciones
•
•
•
•
•
•
Hemodializados
Sd. Stevens-Johnson
Administración previa de inmunoglob
Vacunación previa (gripe, hepatitis B)
Enf. Hepática alcohólica grave
Cadáver
indirectos
Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH
 Métodos indirectos
 Pruebas de confirmación: Western Blot
 Es la más utilizada
 Es altamente específica
(1/20.000 falsos positivos y
1/250.000 falsos negativos)
 Puede dar tres tipos de
resultados
Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH
 Métodos indirectos
 Pruebas de confirmación: Western Blot
 Positivo: presencia de ciertas
bandas
 Negativo: ninguna banda
presenta reacción
 Indeterminado: ni positivo, ni
negativo
Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH
 Un resultado indeterminado en el Western Blot del
VIH-1 suele corresponder, por lo menos, a siete
situaciones distintas:
 Infección por el VIH-2.
 Durante el proceso de seroconversión por el VIH-1.
 Enfermedad avanzada.
 Niños nacidos de madres seropositivas.
 Individuos africanos (divergencia genética de las
cepas).
 Reactividad inespecífica o cruzada con otros
anticuerpos.
 Individuos tratados con antirretrovirales con cargas
virales indetectables.
Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH
 Si aparece un resultado indeterminado en el Western
Blot:
 Interrogar sobre potenciales fuentes de exposición recientes
al VIH
 Repetir EIA y Western Blot a los 3-6 meses
 Realizar pruebas específicas para VIH-2 en suero inicial más
pruebas suplementarias (PCR) para el VIH-1
VIH-1. Diagnóstico
indirectos
Pruebas de Confirmación
Line Immune Assay (LIA)
Western Blot (WB)
VIH-1. Diagnóstico
indirectos
Características operacionales de las pruebas de
detección de Ac frente al VIH
 Sensibilidad: Es la probabilidad de que para un sujeto
enfermo se obtenga en la prueba un resultado
positivo.
 Especificidad: Es la probabilidad de que para un
sujeto sano se obtenga un resultado negativo.
 Valor predictivo positivo: Es la probabilidad de
padecer la enfermedad si se obtiene un resultado
positivo en el test.
 Valor predictivo negativo: Es la probabilidad de que
un sujeto con un resultado negativo en la prueba esté
realmente sano.
VIH-1. Diagnóstico
Sensibilidad (>98%)
Especificidad (98%)
 Valor Predictivo Positivo
 Valor Predictivo Negativo
> Prevalencia > VPP y < VPN
< Prevalencia < VPP y > VPN
VIH-1. Diagnóstico Primoinfección
Seguimiento. Acs. Basal – 3 meses – 6 meses




CV > 10.000 copias RNA-VIH-1/ml plasma
Falsos (+) (4%) / Falsos (-) (var. Genética)
Anticuerpos negativos o débilmente positivos
Western Blot negativo o indeterminado
RNA-VIH-1 NO ES DIAGNÓSTICO
VIH-1. Diagnóstico
indirectos
Pruebas de Confirmación. Western Blot
Criterios de Positividad
OMS.
CRA.
FAD.
CRSS.
2 gp: gp160, gp120, gp41
1 de cada gen estructural (env, pol y gag)
P24 + p32 + (gp41 o gp120 o gp160)
P24 + (gp41 o gp120 o gp160) o
p32 + (gp41 o gp120 o gp160)
CDC. P24 + (gp41 o gp120 o gp160) o
gp41 + (gp120 o gp160)
VIH-1. Diagnóstico
indirectos