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D-P. M ÉNARD*, D. MARTÍNEZ B ELLO* &Y J.L. VIANA** La práctica diaria está llena de anécdotas de todo tipo, y muchas además de divertir nos enriquecen nuestr o trabajo y estimulan nuestro afán de conocimiento. El día 2 de abril de 2001 la anécdota la constituyó la llamada de un ganadero, colaborador habitual de los programas de mejora, pe ro q ue e n esta ocasión no requería ningún servicio sino manifestar su sorpresa. Acababa de parir una receptora de embrión en su casa, y en lugar de una cría había tenido dos fantásticas hembras. Nuestro amigo Narciso de la ganadería CID de Barr eiros, en Lugo, estaba sor prendido y quería saber como explicar el fenómeno. Por si esto fuera poco dos días más tarde, y en la misma explotación tuvo lugar otro parto con idénticas características, de nuevo dos hembras nacieron de otra receptora de embrión que había sido transferida el mismo día que la anterior, aunque esta vez con peor suerte, al nacer muerta una de las crías. Para entender un poco lo que ha ocurrido debemos clarificar que hay dos tipos de gemelaridad en las vacas (como en otros mamíferos): bivitelinos o bicigóticos (no idénticos) y univitelinos o monocigóticos (idénticos). Los gemelos bivitelinos son aquellos que naciendo en un mismo parto proceden de dos ovulaciones diferentes y pueden ser del mismo sexo o no. En definitiva son hermanos que nacen en el mismo parto y se parecen en un grado va riable. Estas ovula ciones se pod rían producir las dos en un mismo ovario o una en cada uno, dando al final dos crías distintas. El porcentaje esperado para este caso de doble ovulación sería del 14% dando un 5.2% de partos gemelares, en un estudio reciente en vacas sincronizadas con el método GPG-Ovsynch (Fricke & Wiltbank, 1999). * FEFRIGA, Unidad de Transferencia Embrionaria de BOS, Guísamo, 15640 A Coruña. ** L abor atorio de Xenética M olecular. Xenética Fontao S.A. Fontao-Esperante. Apto 128. 27080 Lugo. xeneticafontao.agri@xunta.es. 102 Septiembre/Octubre 2001 El caso de gemelos univitelinos o idénticos se da c uan do existe u na sola ovulación y se forma un ú nic o em br ión que más tarde se divide y da lugar a d os individu os que son co mo una repe tición de l mismo ser y por lo tanto estas crías son del mismo sexo. Este es un proceso muy poco común (1.34 x 10-7, Kraay et al., 1983) ya que necesita no sólo que el embrión se r ompa, que es rar o, sino que las dos mitades se implanten y se desarr ollen hasta el nacimiento. Un embrión puede dividirse de forma manual, con un micromanipulador, pero también espontáneam e nte por el e fec to de traumatismos o estrés. El embrión es un gr upo de células que se multiplican dentro de una cu bie rta (m ucop olisac ár idos) que es la zona pelúcida. Llega un momento (en torno al día 9 de vida) que por la expansión de la masa celular esta mem brana pelúcida se rompe permitiendo la salida del embrión para que se adose a la pared uterina y se implante en ella. Puede ocurrir que la rotura de la zona pelúcida sea imper fecta y ocasione un estrangulamiento de la masa celular que llegue incluso a dividirla en dos, y si el desar rollo continúa con éxito para las dos mitades llegará el doble nacimiento. En este caso en concreto, la vaca donante de nombre IFERDA (MB 88), se sometió a un programa de super ovulación, recolectándose los embriones 7 días después de la inseminación (4 de julio 2000), con el siguiente r esultado: 20 embriones recuperados en total, 15 óvulos (sin fecund ar) , 3 de ge ner ado s (no viables) y 2 embriones viables aunque de mala calidad (uno calidad 2 y el otr o de calidad 3, según clasificació n int er nacional de IE TS). Simultáneamente el ganadero había sincroniza do alguna s no villas receptoras, esc ogiéndose las dos que re unía n las mejores condiciones: celo visto y con una buena estructura en los ovarios (corpus hemor ragicum) a la palpación rectal. Se implantaron los 2 embriones en fresco, cada uno a una r eceptora. La gestación se confirmó a los 45 días por palpación rectal y a los 60 días mediante ecografía, pudimos ver un feto hembra en cada receptora, sin sospechar la posibilidad de que los e mbr ione s pudier an haber sufrido una división, esperábamos un parto simple de cada r eceptora para primeros de abril de 2001. Días después de los primeros nacimientos pasamos a verlas para extraer una muestra de sangre de la donante, de la Nº 125 Frisona Española Blastocistos expandidos y protruidos 9 días después de la FIV receptora y de las gemelas con el fin de demostrar que no había posibilidad de error, y que efectivamente las dos eran hermanas idénticas de la misma madre donante y del mismo embrión. Para ello remitimos las muestras al Laboratorio de Xenética Molecular de Galicia (Xenética F ontao S.A. Fo nta o-Esp er ante . 27080 Lugo), donde se realizan de manera r utinaria análisis de filiación (paternidad y maternidad) mediante pruebas de ADN. Allí se comprobó tras el análisis de doce loci microsatélites que presentaban idéntico genotipo para todos los marcadores analizados. Existen antecedentes de este curioso hec ho bien referenciados bibliográ ficamente, en este sentido Willadsen et al., (1981), demostraron que se podían dividir embriones en 2 partes con un micromanipulador y así obtener gemelos idénticos. Por su parte Moyaert et al., (1982), confirmaban por primera vez a nivel mundial en la especie bovina el nacimiento de gemelos idénticos divididos de for ma natural en una receptora (idéntico caso al que describimos en el presente trabajo). Es muy importante tener en cuenta que la transferencia de los embriones se realiza en el día 7 de vida o como mucho en el 8, y la eclosión o salida de la zona pelúcida se produce del día 9 al 10 y por este motivo no se percibe nada anormal en el momento de las manipulaciones. Con la r ealización de los análisis de filiación por ADN, se demostró que las 2 hijas son idé ntica s genotípica me nte y resultantes del cruce de la donante IFERDA con el toro Brabant Star PATRON ET TL, o sea, del único embrión transferido en cada r eceptora. A pesar de esto y como se puede apreciar en la fotografía, no son idénticas 100% en su aspecto externo. El color es casi igual, pero la distribución de las manchas es un poco diferente. Esto se debe a un efecto llamado epigenético (Seidel, 1985). Para entenderlo debemos tener en cuenta que la distribución de las manchas está codificada genéticamenFrisona Española Nº 125 te pero su for mación depende de los folículos pilosos melanizados (con pigmenta ción) que comienzan a cr ecer en varios puntos del cuerpo y desde ahí migran alrededor expandiendo la mancha tal y como estaba pr evisto ge néticam ente . Esta m igr ación puede verse inter rum pida o modificada por el ambiente uterino y placentario (irrigación en un determinado punto, concentración de hor monas, etc.) dando manchas que no resultan idénticas. Además, tras el nacimiento, las circuns tancias ambientales jugarán también un papel decisivo en la posible difer enciación de estos individuos, así posibles enfermedades, difer encias de manejo, edad de parto, etc., influirán en el desarr ollo, conformación y producción de las dos pequeñas idénticas. B IBLIOGRAFÍA • Fricke P.M. and Wiltbank M.C. (1999). Effect of milk production on the incidence o f double ovula tion in dairy cows. Theriogenology, 52: 1133-1143. • Kraay G.J., Ménard D.P. and Bedoya M. (1983). Monozygous cattle twins as a r esult of transfer of a single embryo. Can. Vet. J., 24: 281-283. • Moyaert I., Bouters R. and Bouquet Y. (1982). Bir th of a monozigotic cattle twin following non surgical transfer of a single 7 day old embr yo. Theriogenology, 18: 127132. • Pa lma G.A . and B rem G. (1993). Transferencia de embriones y biotecnología de la reproducción en la especie bovina . • Seidel G.E. Are identical twins pr oduced from micromanipulation always identicals?. (1985). Pr oceedings of the annual conference on Ar tificial insemination and embryo transfer in beef cattle . January 12, 1985. • Willadsen S.M., L ehn -Jensen H ., Fehilly C.B. and Newcomb R. (1981). The production of monozygotic twins of preselected par entage by micromanipulation of non-surgically collected cow embryos. Theriogenology, 15: 23-29. Septiembre/Octubre 2001 103 INFORME 1998 Kalscheur-Hanigan (Jour nal of Dairy Science 81:3402-3414) dice: El sistema NRC es el más seguro para la formulación práctica de raciones. El sistema CORNELL está indicado para propósitos de investigación pero su aplicación en el campo puede ser dañosa. Para un nutricionista, la herramienta principal de trabajo es la FORMULACION DE RACIONES. Para este fin salen muy bien pr eparados los asistentes a este CURSO. ••• El OBJETIVO de este curso es, además de suministrar una serie de datos básicos, ejercitarse en el modo de organizar el racionamiento de los efectivos de una granja completa. Se explica qué se debe hacer y cómo se hace Proceso del curso 1. Se supone que el participante no está iniciado y por ello se le introduce en el lenguaje de la nutrición y en el estudio de nutrientes e ingredientes. Aquél que sí está iniciado se encuentra en esta fase con la puesta a punto en los conceptos y datos tal como se utilizan a nivel de este año 1999 dentro del sistema americano del NRC y modificaciones posterior es en los simposium de USA. 2. Se e ntr eg a n los da t os (MAN UAL DEL CURSO, éste se actualiza mensualmente). Se explica cómo pueden utilizarse para cubrir las necesidades a nivel de individuo o de grupo, manejando los criterios de aplicación y las r espectivas tablas de necesidades de nutrientes y composición de los alimentos en éstos. 3. Se pasa después a la formulación de raciones para los distintos grupos de vacas en ordeño, vacas secas, novillas y terneros, con las especificaciones mínimas y máximas en los casos que pr oc e de , c on l a hoj a de c á lc u lo Exce l de Microsoft. En el curso se hace manualmente y se muestra el manejo en el ordenador. 4. Se termina dominando la organización del racionamiento a nivel de pesebre y , por tanto, cómo establecer y dirigir el mismo, bien sea el racionamiento en grupo (con distribución en for ma de raciones completas o con la distribución de los alimentos por separado) o bien sea practicando el racionamiento individual cuando las vacas en or deño no tienen otra opción que vivir juntas (caso de pequeños establos). Per o el problema de los pequeños establos también se resuelve con las raciones continuas organizando uno o dos gr upos de vacas en ordeño. Esta solución es la base para que las fábricas de piensos puedan servir una “ración completa” o “parcialmente completa” en vez de un pienso compuesto. 5. Se hacen las mismas operaciones para la recría. NOTA: A petición de los asistentes se entrega (al costo de 5.000 ptas, sólo para los que realizan el curso) un disquete que contiene la for mulación, a través del ordenador, de las raciones y piensos pr ecisos. Cualquiera de las raciones y piensos que contiene puede adaptarse a la formulación de otras para difer entes objetivos. Cambiando los datos se pueden hacer infinidad de nuevas raciones (sólo hay que cambiar el nombre del archivo para cada nueva ración) y la nueva hoja hará siempre todos los cálculos que se imprimieron en la hoja original. El ordenador hace todos los cálculos de for ma rapidísima y Vd emplea poco tiempo en balancear la ración OBSERVACIÓN : SE H A U SADO LA HO JA D E CÁLCULO “EXCEL 5.0” DE MICROSOFT. Con versiones superiores de Excel puede manejarse igualmente la formulación de las raciones incluidas. Para manejar estas hojas no se precisa saber informática. SOLICITUD DE INFORMACION ❏ Costo y programa del CURSO a celebrar en Madrid. ❏ Costo y programa a celebrar en VACACIONES CORRESPONDENCIA B. MARTIN VAQUERO C/ Cea Bermúdez, 37-6º B 28003 Madrid - Tlf: 91 544 39 62