Download Stanbio Gamma GT LiquiColor

Materiales requeridos pero no incluidos:
Espectrofotómetro capaz de leer absorbancias a 405 nm y 1 cm de paso de luz.
Bloque de temperatura constante/Baño a 310 K (37ºC) o una celdilla a
temperatura controlada.
Pipetas serológicas o automáticas
Tubos de ensaye
Cronómetro
Stanbio
Gamma GT LiquiColor
Procedimiento No. 2960
Para la determinación cuantitativa cinética de γGlutamil transferasa en suero. Para procedimientos
manuales y/o automatizados.
Principio y resumen:
La gamma-glutamil transferasa (γ-GT) pertenece un largo grupo de enzimas
conocidas como peptidasas. Aunque los tejidos renales tienen los mayores
niveles de γ-GT, la mayor fuente de la enzima en suero es de origen hepático.
Los niveles elevados de γ-GT están asociados con desordenes hepatobiliares y
pancreáticos; alcohólicos y bebedores fuertes, desordenes del miocardio y en
diabetes1.
En una actividad diferente de la fosfatasa alcalina, la actividad de gamma
GT en suero permanece normal en enfermedades que afectan a los huesos
y también
durante el crecimiento normal de los mismos. Por lo tanto un
incremento en la actividad de la gamma GT puede ser considerado como
un indicador mas especifico y sensible de una enfermedad hepática, en
comparación con la actividad de la fosfatasa alcalina.
El procedimiento de la gamma GT de Stanbio ha sido optimizado de
acuerdo a Szasz.
γ-GT
L- -glutamil-3- carboxil-4-nitroanilida + glicilglicina
L-γ-glutamilglicilglicina + 5-amino - 2 - nitrobenzoato.
La gamma GT cataliza la transferencia de un grupo de gamma Glumatyl-3carboxi-4-nitroanilida. El rango de liberación de 5-amino-2-nitrobenzoato es
directamente proporcional a la actividad de gamma GT en la muestra y se
cuantifica midiendo el incremento de absorbancia a 405 nm.
Reactivo:
γ-GT Buffer (R1), Cat. No. 2961
Composición:
L-γ-Glutamil-3-Carboxy-4-Nitroanilida
γ-GT Sustrato (R2), Cat. No. 2962
Composición:
Tris, pH 8.25
Glycilglicina
4.0 mmol/L
100 mmol/L
100 mmol/L
Precauciones:
Para uso de diagnóstico in-vitro. Tome las precauciones normales para el
manejo de reactivos de laboratorio. Los reactivos contienen azida de sodio
que puede ser tóxica si se ingiere. Se ha reportado que esta azida de
sodio, puede reaccionar con plomo y cobre de tuberías, pudiendo formar
metales de azidas explosivos. Consulte su manual de seguridad para
mayor información.
Preparación del reactivo:
El buffer y el reactivo de sustrato líquido están listos para su uso. Prepare
el reactivo de trabajo en un proporción de 5 partes de Buffer (R1) y 1 parte
de Sustrato (R2), (p.e., 50 mL de Buffer y 10 mL de sustrato).
Estabilidad y Almacenamiento del reactivo:
El reactivo es estable hasta su fecha de caducidad marcada en la
etiqueta, cuando se almacena en forma adecuada a 275-281 K (2-8°C) y
protegidos de la luz. El reactivo R1, deberá verse claro/ sin color, mientras
que el R2 deberá verse claro/amarillento. Deseche si ve turbio o si
contiene partículas. El reactivo reconstituido es estable por 4 semanas si se
almacena de 275-281 K (2-8°C) ó por 5 días a temperatura ambiente 288 – 298
K (15-25°C). El reactivo de trabajo debe ser desechado si la absorbancia inicial,
leída contra agua destilada a 405 nm, está por debajo de 0.800.
Recolección y preparación de la muestra:
Suero ó plasma con EDTA, libre de hemólisis deben ser utilizados.
Anticoagulantes complejos como citratos, oxalatos, fluoruros y otros, deben
ser evitados dado que inhiben la actividad de la γ-GT2. La pérdida de
actividad de la γ-GT, se minimiza guardando las muestras en refrigeración
por 7 días ó congelando hasta 2 meses3. Niveles de bilirrubinas de más
de 40 mg/dL y niveles de triglicéridos de más de 2000 mg/dL no muestran
interferencia en esta prueba8.
Substancias interferentes:
La γ-GT es una enzima inducida. Consecuentemente los pacientes que
están recibiendo drogas antiepilépticas ó aminopirina, muestran elevada
actividad de γ-GT4-5. El uso crónico de etanol también incrementa la
actividad de la γ-GT en la sangre. Algunas drogas y otras sustancias
también son conocidas que afectan los valores de la γ-GT 6.
Procedimiento manual:
1. Prepare el reactivo de trabajo de la γ-GT de acuerdo a las
instrucciones.
2. Lleve a cero el espectrofotómetro a 405 nm con agua destilada.
3. Para cada muestra y control, adicionar 1.0 mL de reactivo de Trabajo
en la cubeta o en los tubos de prueba y calentar por 3 minutos a 310
K (37°C).
4. Adicionar 100 µL (0.10 mL) de suero a cada tubo y mezclar levemente.
5. Leer y anotar la absorbancia al 1 minuto. Continúe incubando a 310 K
(37°C) y anotar la absorbancia a los 2 y 3 minutos. El cambio de
absorbancia debe ser constante.
6. Determine el cambio de absorbancia por minuto ( ∆A/min), multiplique
por el factor 1158 para obtener resultados en U/L.
NOTA: Si la cubeta no esta a temperatura controlada, incube las muestras a 310
K (37°C) entre lectura y lectura.
Para instrumentos que requieran más de 1.0 mL, el reactivo y la muestra pueden
usarse al doble.
PROCEDIMIENTO AUTOMATIZADO:
Adaptaciones especiales para analizadores automatizados, están disponibles
contactando al Departamento de Servicio al cliente de Licon.
CONTROL DE CALIDAD:
El Ser-T-Fy I, Control de suero normal y Ser-Ty-Fy II, Control de suero
anormal, son recomendados para verificar la precisión y exactitud. Otros
controles comerciales disponibles con valores de γ-GT probados por este
método, también son adecuados. La actividad de la γ-GT determinada con
estos materiales y por este procedimiento, deberán caer dentro de los
rangos asentados para los controles. Dos niveles de control deben ser
analizados en cada corrida.
CALIBRACION:
La actividad γ-GT se base en el “coeficiente de extinción micromolar” del 5amino-2-nitrobenzoato a 405 nm ( ver sección de Resultados). La guía de
calibración del fabricante deberá ser seguida para calibrar su analizador.
RESULTADOS:
Los valores se derivan en base al “coeficiente de extinción micromolar de
absortividad” de 5-amino-2-nitrobenzoato a 405 nm (0.0095). La actividad en
unidades por litro (U/L) de la γ-GT es la cantidad de enzima que produce una
mmol/L de 5-amino-2-nitrobenzoato por minuto.
U/L=
U/L=
U/L=
∆A/Min
X
Absortividad
∆A/Min
X
0.0095
∆A/Min X 1158
Volumen Total
Volumen de la muestra
1.10
0.10
LIMITACIONES:
Si el ∆A/Min es mayor de 0.515, diluya 1 parte de la muestra con 5
partes de agua destilada y repetir la prueba. Multiplicar el resultado por 6.
Valores esperados.7
Hombres:
Mujeres:
0 - 50 U/L 310 K (37ºC)
0 - 30 U/L 310 K (37ºC)
El rango debe servir sólo como guía. Se recomienda que cada laboratorio
establezca sus propios rangos esperados debido a las diferencias existentes
entre instrumentos, laboratorios y poblaciones locales.
Características:
Comparación: Un grupo de 63 sueros dentro de un rango de actividad de γGT de 15 – 714 U/L, fue probado por el método de γ-GT descrito y también
por el reactivo de γ-GT comercial similar. Con la comparación de resultados
se obtuvo un coeficiente de correlación de 1.000 y una ecuación de
regresión fue y= 0.94x + 1.9 ( la comparación de estudios se llevó a cabo de
acuerdo a la guía EP9-T tentativa de la NCCLS).
Precisión: Se estableció por un estudio “intraensayo” realizando 20
determinaciones a tres diferentes niveles de sueros control de origen comercial.
Los valores de precisión total se obtuvieron realizando determinaciones a tres
sueros control durante 5 días consecutivos.
Intraensayo
Media
γ-GT
(U/L)
D.S. (U/L)
C.V. (%)
SUERO 1
40.0
SUERO 2
74
SUERO 3
206
1.0
2.5
0.9
1.2
1.3
0.6
Precisión Total
γ-GT
Media
(U/L)
D.S. (U/L)
C.V. (%)
SUERO 1
42
SUERO 2
72
SUERO 3
204
0.6
1.5
0.6
0.9
0.7
0.4
Se llevaron a cabo estudios de precisión de acuerdo con la guía de la NCCLS,
EP5-T.
Linearidad: Lineal hasta 300 U/L a 310 K (37°C). Llevado a cabo de acuerdo
con la guía EP6-P de la NCCLS.
Sensibilidad: Basada en una resolución del instrumento de A=0.001, el método
presentado muestra una sensibilidad de 1.0 U/L.
Referencias
1.2.3.4.5.6.7.-
8.-
nd
Tietz, N.W. Fundamentals of Clinical Chemistry, 2 . Ed. W.B. Saunders,
Philadelphia, PA, p. 622 (1976).
Whitifield, jb,Moss DW, Neale,G, Orme, M and Breckenridge, A, Brit Med j 1,316,
1973.
Rosalki SB, Rau D, Lehman D, Prentice M: Determination
of
gamma
glutamyltranspeptidase activity and its clinical applications. Ann Clin Biochem
7: 143, 1970
Rosalki, S.B., Tarlow D, Rau D: Plasma gamma glutamyltranspeptidase elevation
in patients receiving enzyme inducing drugs, Lancet 2:376 1971.
Bartels H, Hauck W, Vogel I: aminopyrine an effective modifier of liver and
serum gammaglutamytranspeptidase. J pediatr 86: 298, 1975.
Young DS, Effects of drugs on clinical laboratory test AACC Press, Washington
D.C.
nd
ed. W.B. Saunders Co; Philadelphia,
Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 2
PA, p. 851 (1994)
Stanbio Laboratory Data..
Fabricado en EUA por:
Stanbio Laboratory
1261 North Main Street
Boerne TX, 78006
Distribuido en México por:
Laboratorios Licon, S.A.
Viveros del Rocío No. 33
Col. Viveros de la Loma
Tlalnepantla, Edo. de Méx.
C.P. 54080
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Rev. 07/06/00
IN-389