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Creatina Kinasa
(Dos partes Líquido)
Juego de reactivos
Intención de uso
Para la determinación cuantitativa de la actividad de la creatina quinasa en el suero.
1.
2.
Importancia clínica
Precauciones
La creatina quinasa (CK) se encuentra principalmente en el músculo esquelético, el
músculo cardíaco y el tejido cerebral. El daño a cualquiera de estos tejidos puede dar
lugar a mayores niveles de actividad de la CK en el suero. El daño del músculo
cardíaco tras un infarto de miocardio por lo general resulta en un aumento de 7.12
veces el límite superior de lo normal dentro de 18 a 30 horas de infarto. Elevada
actividad de CK también se observa en el hipotiroidismo, los distintos tipos de distrofia
muscular, miositis viral y tipos similares de enfermedades del músculo esquelético.1
La determinación de la actividad del suero de CK se utiliza para ayudar en el
diagnóstico de infarto de miocardio y varios tipos de enfermedades musculares.
1.
2.
Historia del método
El primer procedimiento para la determinación de CK, en base a la tasa de formación
de ATP, fue presentado por Oliver en 1955.2 Un método modificado descrito por
Nielson y Ludvigsen3 en 1963 con Rosalki4 adicionando un compuesto sulfhídrico y
AMP en 1967 para asegurar la máxima actividad de la CK e inhibir la actividad del
adenilato quinasa. Condiciones óptimas para medir CK fueron publicadas por Szasz5
en 1976, así como por el Comité Escandinavo en Ensimas.6 Se modificó el
procedimiento anterior en 19797 para incluir EDTA. El reactivo presente es la
modificación de la revisión anterior.
Principio
CK
ADP + Creatina Fosfato------------------------------- Creatina + ATP
HK
ATP + Glucosa ------------------------------- ADP + Glucosa –6-Fosfato
G6PDH
G6P + NAD+ ----------------------- 6-Fosfogluconato + NADH + H+
CK cataliza la fosforilación reversible del ADP, en presencia de fosfato de creatina,
para formar ATP y creatina. El auxiliar de la enzima hexoquinasa (HK) cataliza la
fosforilación de la glucosa por el ATP formado, para producir ADP y glucosa-6-fosfato
(G6P). La G6P se oxida a 6-fosfogluconato con la producción concomitante de NADH.
La tasa de formación de NADH, medido a 340nm, es directamente proporcional a la
actividad del suero de CK.
3.
La contaminación bacteriana es evidente (turbidez).
El reactivo reconstituido tiene una absorción superior a 0.700 a 340nm frente a agua.
Este reactivo es para uso diagnóstico in vitro solamente.
Los reactivos pueden ser irritantes para la piel. Lavar la piel con agua si entra en
contacto.
Este reactivo contiene azida sódica (0.05%) como conservador. No se ingiera. Puede
reaccionar con cañerías de plomo y cobre para formar azidas metálicas altamente
explosivas. Después de desecharlo, enjuague con abundante agua para evitar la
acumulación de azida.
Recolección y Manejo
1.
2.
3.
4.
El suero es la muestra de elección. Rosalki ha informado de que el plasma (Heparina
o EDTA) puede ser usada.4
Glóbulos rojos tienen muy poco CK, por lo tanto, la hemólisis ligera acceptable.8, 4
CK en suero es estable durante cuarenta y ocho horas a temperatura ambiente (18-25
°C) y siete días en refrigeración (2-8 °C). La muestra se puede congelar hasta por un
mes si está protegido contra evaporación.4
El ejercicio extenuante o actividad física puede producir niveles elevados de CK en
suero.1
Interferencias
1.
2.
Ciertas drogas y medicamentos pueden afectar la actividad de CK, ver Young, et al 9
Los niveles elevados de bilirrubina (20mg/dl) y hemoglobina (500mg/dl) se ha
encontrado que tienen un efecto insignificante en este ensayo.
Materiales suministrados
CK R1 y R2 Reactivo.
Materiales necesarios pero no suministrados
1.
2.
3.
4.
5.
Tubos de ensayo / rack
Pipetas
Espectrofotómetro con la capacidad de leer a 340nm
Temporizador
El bloque de calentamiento (37 °C)
Procedimiento (automatizada)
Vea las instrucciones de aplicación del instrumento específico.
Reactivos
Después de la combinación de los reactivos R1 y R2 contiene: La creatina fosfato
30mM, ADP 2mM, AMP 5mM, NAD 2mM, NAC 20mM, hexoquinasa (microbiana)
2500 U/L, G6PDH (microbiana) 2000 U/L, D-glucosa 20mM, Iones magnesio 10mM,
EDTA 2.0mM, Diadenosine pentafosfato 10uM, Buffer 100mM, pH de 6.7 ± 0.1,
estabilizadores no reactivos y sustancias de relleno con azida sódica (0.05%) como
conservador.
Procedimiento (Manual)
Preparación de los reactivos
5.
Los reactivos se suministran listos para su uso como líquidos. Para preparar el
reactivo de trabajo mezcle 5 partes de R1 con 1 parte R2.
1.
2.
3.
4.
6.
7.
Almacenamiento del reactivo
1.
2.
Almacenar R1 y R2 a 2-8 °C. Si se almacena como se indica, los reactivos son
estables hasta la fecha de caducidad.
El reactivo de trabajo es estable por veinticuatro horas a temperatura ambiente
(18-25 °C) o 14 días a 2-8 °C.
Notas del procedimiento
1.
2.
El deterioro del reactivo
No lo use si:
Prepare el reactivo de trabajo de acuerdo a las instrucciones.
Pipetee 1.0 ml de reactivo en los tubos apropiados y pre-caliente a 37 ºC durante
cinco minutos.
Cero el espectrofotómetro con agua a 340nm.
Transferencia de 0.025ml (25ul) de muestra al reactivo, mezcle e incube a 37 °C
durante dos minutos.
Después de dos minutos, leer y registrar la absorbancia. Regrese el tubo a 37 ºC.
Repetir las lecturas cada minuto durante los próximos dos minutos.
Calcular la diferencia de absorción por minuto Abs./min.
El Abs. / min multiplicado por el factor 6592 (ver cálculos) se obtendrán resultados
en IU/L.
Las muestras con valores por encima de 1500 IU/L deben diluirse 1:1 con solución
salina, analizaron y multiplicar el resultado por dos.
Si el espectrofotómetro está equipado con una cubeta de temperatura controlada, la
mezcla de reacción se puede dejar en la cubeta, mientras que las lecturas de
absorbancia se toman.
Creatina Kinasa
(Dos partes Líquido)
Juego de reactivos
Limitaciones
1.
2.
El presente procedimiento mide el CK total, independientemente de su origen.
Las muestras con valores por encima de 1500 IU/L deben diluirse 1:1 con
solución salina, re-analizar y multiplicar el resultado por dos.
Calibración 10, 11
Media
152
483
El procedimiento está estandarizado por medio de la absorción mili molar del NADH
tomada como 6.22 a 340nm en las condiciones de ensayo descritos. Consulte la
sección "Cálculos" para obtener información sobre el cálculo de la actividad
enzimática de la muestra.
4.
Cálculos
1.
Una unidad internacional (U/L) se define como la cantidad de enzima que cataliza la
transformación de un micro mol de sustrato por minuto bajo condiciones definidas.
U/L= Abs./min x 1.025 x 1000 = Abs./min x 6592
1 x 6.22 x .025
Donde:
 Abs./min = Promedio de cambio de absorbancia por minuto
1.25 = volumen total de reacción
1000 = conversión de U/ml a U/L
1 = paso de luz en cm
6.22 = Absortividad mili molar de NADH
0.025 = Volumen de la muestra en ml
Ejemplo: Si el cambio de absorbancia por minuto es 0.01,
entonces 0.01 x 6.592 = 66 IU/L
Con corrida
S.D.
C.V.%
1.3
0.9
1.7
0.4
Corrida a corrida
Media
S.D.
155
1.6
486
2.2
C.V.%
1.0
0.5
Sensibilidad: Bajo las condiciones de reacción descritas, 1 U/L de la creatina quinasa
da una Abs. /min de 0.00015.
Referencias
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
Tietz, N.W., Fundamentals of Clinical Chemistry, Philadelphia, W.B.Saunders Co., pp.
682-689 (1982).
Oliver, I.T., Biochem. J. 61:116 (1955).
Nielson, L., Ludvigsen, B., J. Lab. Clin. Med. 62:159 (1963).
Rosalki, S.B., J. Lab. Clin. Med. 69:696 (1967).
Szasz, G., et al, Clin. Chem. 22:650 (1976).
The Committee on Enzymes of the Scandinavian Society for Clinical Chemistry and
Clinical Physiology, Scand., J. Clin. Lab. Invest 36:711 (1976).
The Committee on Enzymes of the Scandinavian Society for Clinical Chemistry and
Clinical Physiology, Scand., J. Clin. Lab. Invest 39:1 (1979).
Engle, W.K., Meitzer, H., Science 168:273 (1970).
Young, D.S., et al, Clin. Chem. 22:1D (1976).
Ziegenhorn, J., et al, Clin. Chem. 22:151 (1976).
McComb, R.B., et al, Clin. Chem. 22:141 (1976).
Kaplan, L.A., and Pesce, A.J., Clinical Chemistry: Theory, analysis, and correlation,
St. Louis, C.V. Mosby Co., p. 921 (1989).
Nota: Si alguno de los parámetros de la prueba se cambian, un nuevo factor tiene que
ser determinado mediante la fórmula anterior.
Unidades SI: Para convertir las unidades a SI (nkat/L) multiplicar U/L de 16.67
Control de calidad
La validez de la reacción debe ser monitoreada por el uso del suero control con
valores conocidos de la creatina quinasa normal y anormal. Estas condiciones se
deben ejecutar por lo menos en cada turno de trabajo en el que los ensayos de la
creatina quinasa se llevan a cabo. Se recomienda que cada laboratorio establezca su
propia frecuencia de la determinación del control.
Valores Esperados12
Los siguientes valores se basan en mediciones realizadas a 37 °C.
Hombres: hasta 160 U/L
Mujeres: hasta 130 U/L
Recién nacidos: 2 a 3 veces los valores del adulto
Es muy recomendable que cada laboratorio establezca su propio rango de referencia.
Rendimiento
1.
2.
3.
Linealidad: 1500 IU/L
Correlación: Los estudios realizados entre este procedimiento y un
procedimiento similar arrojó un coeficiente de correlación de 0.999 con una
ecuación de regresión de y = 1.07 x = 5.6. (n = 103, rango = 25-2.047 IU/L)
Precisión:
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ZONA ROSA
Rev. 6/02 P803-7522-01