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MINISTERIO DE ECONOMÍA Y COMPETITIVIDAD Curso de técnicas de diagnóstico de Peste porcina africana (PPA) Organizado por el Laboratorio de referencia de la Unión Europea (UE) y de la FAO de PPA Centro de Investigación en Sanidad Animal CISA-INIA, Valdeolmos, Madrid, España Personas de contacto: Dr. Marisa Arias: arias@inia.es Dr. Carmina Gallardo: gallardo@inia.es Lugar de realización: Laboratorio de referencia de la UE y de la FAO de PPA Centro de Investigación en Sanidad Animal CISA-INIA Ctra. Algete a El Casar, s.n. Valdeolmos, Madrid, España Tlf; +34916202300 Fax; +34916202247 Objetivo del curso : Transferencia tecnológica de las técnicas de diagnóstico de la PPA prescritas internacionalmente por la OIE y por la UE. Email: gallardo@inia.es 1/3 MINISTERIO DE ECONOMÍA Y COMPETITIVIDAD Día primero Horario: 9.15 -16.15 Apertura del curso: Dr. Marisa Arias, Directora Técnica y coordinadora del Laboratorio de Referencia de PPA de la UE y de la FAO. Conferencias: • Peste Porcina Africana (PPA): revisión de la situación actual de la enfermedad • Técnicas de diagnóstico de Peste Porcina Africana (PPA). Instrucciones de Acceso al Laboratorio NSB3: D. Gonzalo Pascual. Jefe de Servicio de Seguridad Biológica CISA-INIA PRÁCTICAS DE LABORATORIO, SIMULACRO DE DIAGNÓSTICO DE PPA→ Para la ejecución del curso se proporcionará a los participantes un panel de muestras ciegas para que realicen el diagnóstico serológico y virológico de la PPA. Diagnóstico virológico: • • • Práctica I: Detección del genoma viral de PPA mediante la técnica de PCR convencional → extracción del ADN y PCR. Práctica II: Diagnóstico diferencial de Peste porcina clásica (PPC) y PPA mediante la técnica de PCR múltiplex → extracción del ácido nucléico y PCR Práctica III: Aislamiento del virus de la PPA e identificación mediante la técnica de la hemoadsorción (I) → Obtención de cultivo primario de leucocitos porcinos de sangre periférica de cerdo donante. Lugar de realización: CISA-INIA, Laboratorio NSB3. Día segundo Horario: 9.15 -16.15 PRÁCTICAS DE LABORATORIO, SIMULACRO DE DIAGNÓSTICO DE PPA. Diagnóstico virológico: • • • Práctica IV: Diagnóstico diferencial de PPC y PPA mediante la técnica de PCR múltiplex y convencional → métodos electroforéticos/análisis de resultados. Práctica V: Detección del genoma viral de PPA mediante la técnica de PCR en tiempo real → PCR /análisis de resultados. Práctica VI: Aislamiento del virus de la PPA e identificación mediante la técnica de la hemoadsorción (II) → inoculación de las muestras Lugar de realización: CISA-INIA, Laboratorio NSB3. Email: gallardo@inia.es 2/3 MINISTERIO DE ECONOMÍA Y COMPETITIVIDAD Día tercero Horario: 9.15 -16.15 PRÁCTICAS DE LABORATORIO, SIMULACRO DE DIAGNÓSTICO DE PPA Diagnóstico virológico: • Práctica VII: Detección del antígeno viral de PPA mediante la técnica del ELISA de antígeno → realización del ELISA comercial de INGENASA (INGENASA PPA DAS K2) /análisis de los resultados. Diagnóstico serológico: • • Práctica I: Detección de anticuerpos frente al VPPA mediante la técnica de ELISA indirecto (OIEELISA) → realización de la técnica/análisis de los resultados. Práctica II: Detección de anticuerpos frente al VPPA mediante la técnica de ELISA de bloqueo → realización del ELISA comercial de INGENASA (INGEZIM PPA COMPAC K3) /análisis de los resultados. Lugar de realización: CISA-INIA, Laboratorio NSB3. Día cuarto Horario: 9.15 -16.15 PRÁCTICAS DE LABORATORIO, SIMULACRO DE DIAGNÓSTICO DE PPA Diagnóstico serológico, técnicas de confirmación. • • Práctica III: Detección de anticuerpos frente al VPPA mediante la técnica de Immunoblotting (OIE_IB)→ realización de la técnica/análisis de los resultados. Práctica IV: Detección de anticuerpos frente al VPPA mediante la técnica de inmunoperoxidasa indirecta (IPT) → realización de la técnica/análisis de los resultados. Lugar de realización: CISA-INIA, Laboratorio NSB3. Día quinto Horario: 9.15 -14.00 PRÁCTICAS DE LABORATORIO, SIMULACRO DE DIAGNÓSTICO DE PPA Diagnóstico virológico: • Práctica VII: Aislamiento del virus de la PPA e identificación mediante la técnica de la hemoadsorción (III) → lectura de los resultados. Clausura del curso: Presentación de los resultados obtenidos/Conclusiones y recomendaciones. Email: gallardo@inia.es 3/3