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A S O C I A C I Ó N AEMI E S P A Ñ O L A Los 7 principios básicos de la Micro-Inmunoterapia Los 7 principios básicos de la Micro-Inmunoterapia Introducción “Una nueva perspectiva de la fisiopatología desde el punto de vista inmunitario” La Micro-Inmunoterapia presenta un enfoque inmunoterapéutico esencialmente clásico, ya que utiliza los mismos elementos de comunicación que los empleados por el sistema inmunitario. Su aspecto innovador reside en la utilización del sistema inmune como herramienta de diagnóstico en las patologías agudas y crónicas. Además aporta una nueva perspectiva de la fisiopatología desde el punto de vista inmunitario para una mejor comprensión de las interacciones entre los factores endógenos y exógenos. Las bases de la Micro-Inmunoterapia se establecieron en los años 70 mediante la experiencia clínica del Dr. Maurice Jenaer. En la actualidad, representa una herramienta terapéutica habitual del médico, apoyándose en la práctica de miles de médicos en Europa y en los descubrimientos más recientes en el ámbito de la inmunogenética. Para el seguimiento de sus pacientes, el médico dispone, además, de análisis biológicos inmunitarios. Estos controles permiten evaluar la reacción del sistema inmune a partir del inicio mismo de la patología y apreciar la eficacia de la Micro-Inmunoterapia en la reeducación de éste. Las publicaciones en diferentes revistas científicas, fruto de la investigación internacional en inmunología, proporcionan material extenso para el desarrollo de la Micro-Inmunoterapia, permitiendo un futuro prometedor para esta terapia. Asimismo la Micro-Inmunoterapia, tendiendo en cuenta la etiología de la patología, permite una mejor práctica del arte de la medicina. 1 Los 7 principios básicos de la Micro-Inmunoterapia En este folleto, se detallan las siete principales características de la Micro- Inmunoterapia. 1. Las citoquinas p.3 2. Las microdosis p.4 3. La modulación de las diluciones p.5 4. Una estrategia con objetivos múltiples p.6 5. Una información secuencial p.7 6. Los Ácidos Nucleicos Específicos (SNA®)p.8 7. Absorción por el circuito linfático p.9 “La Micro-Inmunoterapia utiliza móleculas propias del sistema inmune para comunicarse con él.” 2 Los 7 principios básicos de la Micro-Inmunoterapia 1. Las citoquinas “Proteínas especializadas en la comunicación entre las diferentes unidades del sistema inmune.” La organización del sistema inmunitario sorprende sin cesar a todos los inmunólogos. Entre los numerosos agentes con funciones perfectamente definidas, se encuentra una clase de proteínas especializadas que coordina la comunicación entre las diferentes unidades de defensa del sistema inmune, como los linfocitos, los macrófagos y otras células implicadas en la respuesta inmune frente a cualquier agresión del organismo. Estas proteínas especializadas se llaman citoquinas. Las citoquinas ejercen sus efectos tanto en las células que las han producido (efecto autocrino) como en otras células (efecto paracrino), además de actuar a distancia en órganos o tejidos diana (efecto endocrino). Su origen es el resultado de una activación celular, por lo que no suelen encontrarse en células no activadas. Las principales citoquinas conocidas en la actualidad son las interleuquinas (clasificadas de la IL-1 a la IL-35), los interferones (IFNα, β y γ), los factores de crecimiento (CSF 3 y TGF) y los factores de necrosis tumoral (TNFα, γ y β). Dado su papel informativo, las citoquinas son la base de las fórmulas de la MicroInmunoterapia. El gran número de investigaciones científicas en el campo de la inmunología favorece el continuo descubrimiento de nuevas citoquinas, cuyas propiedades son objeto de múltiples publicaciones científicas. La MicroInmunoterapia evoluciona al ritmo de estos avances internacionales para mantenerse a la vanguardia de la investigación médica. Los 7 principios básicos de la Micro-Inmunoterapia 2. Las microdosis “Las sustancias empleadas en Micro-Inmunoterapia se encuentran en diluciones perifisiológicas.” Para hacerse una idea de las las diluciones de las sustancias inmumicrodosis utilizadas en Micro-nocompetentes empleadas en Micro Inmunoterapia, se debe entender Inmunoterapia son próximas a las el significado médico de la palabra fisiológicas. De allí la utilización del fisiología, la ciencia que estudia los término “perifisiológicas” para las procesos físicos y químicos que se de- dosis empleadas. sarrollan en los organismos vivos a lo largo de sus vidas. Así las citoquinas Gracias a las microdosis, la Micro- circulan en el cuerpo en concentracio- Inmunoterapia se tolera bien, sin tenes fisiológicas (muy pequeñas) que ner toxicidad conocida. van del orden de 10-4 a 10-14 M. En Micro-Inmunoterapia, las diluciones de citoquinas empleadas son al menos iguales a la concentración de 10-6 M, pudiendo llegar hasta 10-14 M. Es por ello, que para comunicar directamente con el sistema inmune, 4 Los 7 principios básicos de la Micro-Inmunoterapia 3. La modulación de las diluciones “El objetivo de la Micro-Inmunoterapia es de estimular, modular o inhibir las acciones del sistema inmune.” Además de las microdosis, la MicroInmunoterapia dispone de otra herramienta para devolver su potencial al sistema inmunológico. Se trata de la modulación de las diluciones. Basándose en una práctica empírica de más de 200 años, la precisión de la acción de la Micro-Inmunoterapia sigue el principio de Arndt-Schultz utilizado en farmacología clásica según los diferentes niveles de dilución. 5 • Una dilución alta frena el efecto de una sustancia, • una dilución media permite al sistema inmune modular el efecto de la sustancia en función de la necesidad del organismo y • una dilución baja estimula el efecto de la sustancia. De esta forma, empleando distintos niveles de dilución, la MicroInmunoterapia es capaz de estimular, modular o frenar las acciones del sistema inmunitario en función de la patología a tratar. Dilución alta (DA) ê Frena el efecto de la sustancia Dilución media (DM) è Modula el efecto de la sustancia Dilución baja (DB) Estimula el efecto de la sustancia Los 7 principios básicos de la Micro-Inmunoterapia 4. Una estrategia con objetivos múltiples “La Micro-Inmunoterapia propone un enfoque terapéutico dirigido a actuar a nivel de los síntomas y de las causas.” Contrariamente al enfoque selectivo que suele emplearse en inmunología clásica, la Micro-Inmunoterapia realiza una acción a varios niveles. La Micro-Inmunoterapia tiene como objetivo actuar en diferentes campos: • Acción para modular la respuesta Th1, Th2, Th17, etc. • Acción para estimular o frenar la producción de sustancias químicas citotóxicas. • Acción para modular la producción de citoquinas vinculadas a la actividad de las células. Por ello, puede afirmarse que la Micro-Inmunoterapia propone un enfoque terapéutico no sólo basado en aliviar los síntomas, sino también en actuar sobre las causas. Por ejemplo, en caso de las alergias de tipo hipersensibilidad inmediata (rinitis alérgica estacional), un tratamiento preventivo con Micro-Inmunoterapia sería eficaz. Asimismo en caso de crisis, la Micro-Inmunoterapia tendrá un papel modulador sobre un sistema inmune alterado. Eso explica porque la Micro-Inmunoterapia podría aplicarse tanto en prevención como en tratamiento sintomático. IL-12 TNF-α IL-1 TNF-α IL-2 IL-1 TNF-α IL-2 IL-1 TGF-β SNA TGF-β IL-10 IL-1 Ra GM-CSF GCSF TNF-α IL-6 IFN-γ TNF-α IL-6 IL-1 IL-6 IL-6, IL-1, TNF-α IL-6, IFN-γ, TNF-α IL-8, IFN-γ, RANTES IL-2 IL-4 IL-6 RANTES MIP IL-8 IL-2 IL-3 IL-10 IL-1 IL-6 TNF-α IL-3 TNF-α SNA GM-SCF IL-6 IL-1 IL-1 IL-6 TNF-α 6 Los 7 principios básicos de la Micro-Inmunoterapia 5. Una información secuencial “Permite al sistema inmunitario de recobrar su potencial de realizar reacciones en cadena.” La respuesta inmunitaria se desarrolla en el tiempo. Cuando el sistema inmunológico reconoce un antígeno, analiza la naturaleza del intruso y despliega un número determinado de células inmunocompetentes: inmunidad innata. En caso de persistir el ataque, participarán nuevas células y se pondrá en marcha una estrategia más elaborada, llamada inmunidad adquirida. Desde la presentación del antígeno hasta la erradicación del elemento extraño, se suceden una serie de reacciones inmunitarias y de mensajes citoquínicos en cascada. Esta cascada de citoquinas se conoce como información secuencial. 7 Las fórmulas propuestas en Micro- Inmunoterapia retoman esta cascada de citoquinas. Una fórmula de Micro-Inmunoterapia presenta, por tanto, una repartición específica de citoquinas en lapsos determinados de tiempo. Esta función conlleva la administración secuencial del medicamento. El ritmo que propone esta posología, repetida sucesivamente, permite que el sistema inmunitario recupere el funcionamiento correcto de sus reacciones en cadena. Como en una buena educación, la repetición constante y seguida de la información mejora la asimilación. Los 7 principios básicos de la Micro-Inmunoterapia 6. Los Ácidos Nucleicos Específicos (SNA®) “Una acción muy precisa en relación con la patología tratada.” Además de los mensajeros del sistema inmunitario (las citoquinas), las fórmulas de Micro-Inmunoterapia contienen otra clase de sustancias utilizadas en diluciones altas: los ácidos nucleicos específicos o SNA® (del inglés: Specific Nucleic Acid ). El SNA® es un oligonucleótido de síntesis, de pequeño tamaño y homólogo a una secuencia de un gen particular. gía de las células del sistema inmune o del agente patógeno. El SNA® varía en cada fórmula de Micro-Inmunoterapia, con el fin de tener una acción precisa ante cada una de las patologías tratadas. Los SNA® fueron patentados internacionalmente en 2002 por el laboratorio Labo’Life. El SNA®, por la dilución empleada, tiene por objetivo inhibir el carácter expansivo de un agresor (propio o ajeno) o bien, cuando se dirige a un gen humano, corregir un estado de inmunidad alterada. Su modo de acción es muy específico para la fisiolo- 8 Los 7 principios básicos de la Micro-Inmunoterapia 7. Absorción por el circuito linfático “La información de la Micro-Inmunoterapia se transmite directamente en el lugar del combate inmunológico. ” La red linfática es, desde el punto de vista fisiológico, la sede de la respuesta inmune, es el lugar de encuentro y movilización de los linfocitos. La forma galénica utilizada para la administración de la Micro-Inmunoterapia, la vía sublingual, es la que mejor responde a la recepción de la información teniendo en cuenta la estructura inmunológica de las células del organismo. 9 La información contenida en una cápsula-dosis de Micro-Inmunoterapia, al entrar en contacto con la amplia superficie de la mucosa sublingual, llega directamente al centro del combate inmunitario del circuito linfático. La presentación en forma de cápsuladosis y el modo de absorción sublingual próximo al sistema linfático, son esenciales para el modo de acción de la Micro-Inmunoterapia. Los 7 principios básicos de la Micro-Inmunoterapia Sinergia de los 7 principios Ejemplo: Fórmula de Micro-Inmunoterapia PAPI La Micro-Inmunoterapia proyecta fórmulas específicas con ácidos nucleicos, citoquinas, moléculas endógenas naturales y otros inmunomoduladores, en dosis altamente diluidas (microdosis) de absorción sublingual, para modular secuencialmente diferentes mecanismos implicados en una enfermedad determinada. Para permitir una mejor comprensión del modo de acción de este enfoque terapéutico, en este apartado se muestra la acción sinérgica de los 7 principios básicos de la Micro-Inmunoterapia tomando como ejemplo una de las fórmulas específicas de Micro-Inmunoterapia, la fórmula PAPI, cuyo objetivo es apoyar al sistema inmune para hacer frente a la infección por VPH. Composición de la Fórmula PAPI Interleucina 1 Interleucina 2 Interferón-α Ciclosporina A Ciclosporina A Ácido ribonucleico Ácido nucleico específico SNA-HLA II Ácido nucleico especifico SNA-PAPI 17CH 17CH 17CH 7CH 17CH 18CH 16CH 16CH 10 Los 7 principios básicos de la Micro-Inmunoterapia Sinergia de los 7 principios La fórmula PAPI está compuesta por: Principio básico 1 Las citoquinas è ff Citoquinas como la Interleucina-1 (IL-1), Interleucina-2 (IL-2) y el Interferón-α (IFN-α) ff Inmunomoduladores como la Ciclosporina A (CsA) ff Ácidos nucleicos como el Ácido Ribonucleico (ARN) Principio básico 6 è Los Ácidos Nucleicos Específicos (SNA®) Principio básico 2 Las microdosis Principio básico 5 Una información secuencial è è ff Ácidos nucleicos específicos: `` SNA-HLA II `` SNA-PAPI Todas las sustancias contenidas dentro de la fórmula PAPI se preparan en dosis altamente diluidas según el método de dilución/sucusión. La eficacia de las diluciones perifisiológicas de moléculas endógenas y de diversos inmunomoduladores, ha sido extensamente descrita en las diversas publicaciones científicas1-14. La composición de la fórmula PAPI, así como la de todas las fórmulas de Micro-Inmunoterapia, está proyectada en secuencias. La estructura secuencial de la fórmula, ha sido concebida para que actúe a nivel de la cascada de mecanismos básicos que establecen la fisiopatología de la enfermedad. Esta secuencialidad, ha sido siempre considerada por el Dr. Jenaer, como una de las claves de la Micro-Inmunoterapia. El orden secuencial de la fórmula PAPI se basa en los siguientes puntos: • Las cepas activas de una cápsula están dirigidas a realizar su efecto sobre un único mecanismo fisiopatológico esencial de la infección por VPH. • Una secuencia de cápsulas busca actuar sobre una cascada de mecanismos fisiopatológicos básicos en el origen y desarrollo de la enfermedad por VPH. • Cada cápsula interactúa con la siguiente cápsula (transición entre cápsulas), estableciendo el «efecto dominó» de la secuencia. 12 Los 7 principios básicos de la Micro-Inmunoterapia Sinergia de los 7 principios En el caso de la fórmula PAPI la secuencia va a estar estructurada en tres niveles. ÆÆ Ciclo viral ÆÆ Alteración inmune ÆÆ Patología asociada En cada nivel, la fórmula PAPI busca modular específicamente una serie de eventos implicados en el desarrollo y evolución de las infecciones por VPH y las patologías relacionadas. Para ello, la fórmula PAPI, siguiendo el principio de ArndtSchultz, emplea distintos niveles de dilución para las diferentes sustancias que contiene. Principio básico 4 Una estrategia con objetivos múltiples Principio básico 3 La modulación de las diluciones A continuación se describen por etapas los objetivos de la fórmula PAPI, así como el modo de acción de las sustancias y diluciones empleadas en cada uno de estos tres niveles. Ciclo de vida del virus 1. Replicación viral Inmunovigilancia 3. Inmuno-Inflamación inducida por el HPV ARN viral SNA® PAPI HPV Inflamación NF-kB ARN 4. Inmuno-Evasión inducida por el HPV Célula huésped HPV E7 DC IL-1 IL-1 Tolerancia y persistencia viral IL-2 HPV cdks Treg (CD4+ CD25+) IL-2 CsA p21 Inmunosupresión CsA 2. Proliferación celular inducida por el HPV estimulación de la proliferación celular Transcripción Receptores de tipo Toll TLR8 Fórmula PAPI Enfermedades asociadas al HPV 5. Iniciación de la progresión neoplásica oncoproteína IFN-α protéine E2++ IFN de tipo I forma episomal del HPV-HR Mitosis 6. Historia natural de la progresión neoplásica E6 E2E2forma integrada del HPV-HR oncoproteína E7 SNA®-HLA II Superficie de los queratinocitos Expresión epitelial de HLA DR HLA DR 13 Los 7 principios básicos de la Micro-Inmunoterapia Sinergia de los 7 principios A. Ciclo viral En el primer nivel orientado al ciclo viral del VPH, la fórmula PAPI se centra en dos etapas: 1. Reducir la expresión del genoma viral: Modular replicación/transcripción. SNA-PAPI: Independientemente de su modo de replicación, los virus contienen al menos una hebra "matriz" de ADN que contiene su información genómica específica. La secuencia viral, puede integrarse en el ADN celular humano y dar origen a diversas patologías. Sin embargo, una cadena viral puede ser interceptada por diversas técnicas, provocando la inhibición específica de estas secuencias virales15. El SNA-PAPI es un oligonucleótido de síntesis, de secuencia sensiblemente análoga a una parte del material genómico ligado al VPH. Una alta dilución frenadora de SNA-PAPI, tiene el objetivo de bloquear la información perjudicial introducida por el VPH y restaurar la función fisiológica de la célula. 2. Disminuir la Proliferación celular inducida por el virus (VPH). Ciclosporina A (CsA): El VPH reprime la expresión de la proteína p2116 y la CsA favorece la expresión de la p21, proteína inhibidora de la proliferación celular17. En esta fase de la fórmula PAPI, la CsA se encuentra en dilución moduladora, para obtener el efecto buscado de promover la expresión de p21 y la consecuente inhibición de la proliferación celular, sin favorecer el efecto inmunosupresor de la CsA. Interleucina-1 (IL-1): La IL-1, es una citoquina pro-inflamatoria que estimula la mitogénesis de los queratinocitos y de las líneas celulares de carcinoma cervical inmortalizadas por el VPH18. En la fórmula PAPI, la IL-1 se encuentra en alta dilución frenadora, para oponerse a los efectos de esta citoquina sobre la mitogénesis de queratinocitos. 14 Los 7 principios básicos de la Micro-Inmunoterapia Sinergia de los 7 principios ÆÆ Resumen “Ciclo viral”: La fórmula PAPI está concebida para obstaculizar la replicación del VPH y para cortar el ciclo de mitogénesis/proliferación de los queratinocitos estimulados por el virus. B. Alteración inmune En un segundo nivel, orientado a la respuesta inmune asociada al VPH, se busca desarrollar una inmunomodulación enfocada en la alteración inmune específica inducida por el papilomavirus. En este punto, en la fórmula PAPI vamos a identificar dos etapas: 3. Modular la reacción inmuno-inflamatoria: NF-kB y citoquinas proinflamatorias ARN: Los ARN virales y sintéticos, son potentes inductores de Interferón al estimular los receptores de tipo Toll (Toll-like receptores). El ARN es un ligando para el Toll-like 8. La unión del ARN al receptor Toll-like 819,20 activa el factor NFkB21, factor esencial en la inflamación. La activación aberrante del NF-kB en las células infectadas por el VPH es responsable de la inhibición de la apoptosis y proliferación22 de las células infectadas y de la progresión a cáncer23. En la fórmula PAPI, el ARN se encuentra en alta dilución frenadora para contrarrestar la excesiva activación del NF-kB. 4. Reducir la evasión inmune, la inmunosupresión y la tolerancia al virus: Células de Langerhans y CD4+CD25+ Treg. Ciclosporina A (CsA): El fármaco inmunosupresor CsA causa reducción del número, síntesis de ADN y función de las células de Langerhans: Células Presentadoras de Antígeno Profesionales (CPAs Profesionales), e inhibe la diferenciación de los precursores de estas células en la epidermis, explicando en parte el aumento del riesgo de enfermedad viral y cáncer de piel en los pacientes tratados crónicamente24. En esta fase de la fórmula PAPI, la CsA se encuentra en alta dilución frenadora, para favorecer la producción y la función de las células de Langerhans, esenciales “CPAs Profesionales”. 15 Los 7 principios básicos de la Micro-Inmunoterapia Sinergia de los 7 principios Interleucina-2 (IL-2): La IL-2, es una citoquina necesaria para la generación, mantenimiento y expansión de las células T reguladoras (Treg)25, células que van a disminuir la actividad de los linfocitos TCD8. En la fórmula PAPI, la IL-2 se encuentra en alta dilución frenadora, para contrarrestar la producción y la función de las células Treg, fundamentales para el escape del virus al sistema inmune y para la tolerancia viral. ÆÆ Resumen “Alteración inmune”: La fórmula PAPI está concebida para reducir el exceso de inflamación secundaria a una desproporcionada activación del factor NF-kB, y para sostener el sistema inmunitario contra los mecanismos de evasión del virus y de la tolerancia a este. C. Patología asociada Y por último, un tercer nivel orientado a las enfermedades asociadas a la infección por VPH, como es la enfermedad neoplásica. En la fórmula PAPI vamos a identificar dos etapas fundamentales: 5. Evitar los eventos iniciales que conducen al origen y desarrollo neoplásico: Inestabilidad genómica y selección clonal Interferón-α (IFN-α): La activación endógena de la respuesta antiviral desarrollada por el interferón tipo I se asocia a un aumento de la inflamación y de la expresión de las proteínas virales E6-E7 en las células que contienen el VPH integrado en su genoma26,27. La expresión desregulada de E6 y E7 es un factor de predisposición y progresión del cáncer cervical28. En la fórmula PAPI, el IFN-α se encuentra en alta dilución frenadora, para neutralizar la producción de las oncoproteínas virales, implicadas en el origen y progresión del proceso neoplásico. 6. Evitar los eventos que conducen a la progresión neoplásica: Expresión aberrante del antígeno HLA-DR. 16 Los 7 principios básicos de la Micro-Inmunoterapia Sinergia de los 7 principios SNA-HLA II: Las HLA-DR son moléculas de tipo MHC de clase II que actúan como receptores celulares de superficie, codificados por el antígeno leucocitario humano. La función primaria de HLA-DR es presentar antígenos al sistema inmunológico con el fin de inducir o suprimir respuestas de células T. Las CPAs Profesionales como macrófagos, células B y células dendríticas son las células en las que se encuentran típicamente las HLA-DR. La expresión exagerada de moléculas HLA-DR en Células Presentadoras de Antígeno No profesionales (CPAs No profesionales) como los queratinocitos, posiblemente inducidas por un exceso de mediadores pro-inflamatorios, está relacionada con patologías como el cáncer y la autoinmunidad. En el caso de neoplasia cervical asociada al HPV, el aumento de la expresión de HLA-DR en queratinocitos está asociado a la progresión de la enfermedad (CIN)29. En la fórmula PAPI, el SNA-HLA II se encuentra en alta dilución frenadora, para obstaculizar la aparición de estructuras HLA de tipo DR en la superficie de las células "CPAs No profesionales". ÆÆ Resumen “Patología asociada”: La fórmula PAPI está concebida para reducir la posibilidad de eventos neoplásicos y/o la progresión de estos. Cómo último punto cabe comentar que los glóbulos de la fórmula PAPI se administran de forma sublingual, donde entran en contacto con la mucosa bucal y sublingual para que la información pueda llegar a los elementos inmunes presentes en estas regiones como monocitos, macrófagos y células de Langerhans. A partir de aquí, la información accederá al anillo de Waldeyer30,31, donde varios tipos de células inmunes y receptores como los Toll-like32 presentes en estas áreas, pueden reaccionar y producir citoquinas, y otras sustancias antivirales. Por otro lado, la información de la fórmula PAPI, a través de receptores específicos de células del sistema inmune, redes de Jerne33,34, redes de linfocitos y otros elementos inmunes, podría ser transmitida igualmente al resto del sistema. Principio básico 7 Absorción por el circuito linfático Así pues, como se ha mencionado al principio, éste es un ejemplo para comprender la sinergia entre los 7 principios básicos de la Micro-Inmunoterapia, aunque dichos principios se pueden encontrar en cualquiera de las otras fórmulas de Micro- Inmunoterapia. 17 Los 7 principios básicos de la Micro-Inmunoterapia Sinergia de los 7 principios Conclusión “La Micro-Inmunoterapia es una herramienta terapéutica cotidiana dentro de toda estrategia terapéutica.” La Micro-Inmunoterapia propone una acción general, precisa, no tóxica, para devolver todo el potencial al sistema inmunitario. La armonía de los 7 principios básicos descritos anteriormente es fundamental para su eficacia. La Micro-Inmunoterapia no substituye al sistema inmunitario, no lo fuerza ni bloquea su funcionamiento; simplemente le informa con suavidad y sutileza. Como método terapéutico, la Micro-Inmunoterapia, se puede combinar con otras terapias como son la cirugía, la hormonoterapia, la quimioterapia, la fitoterapia, etc. dentro de toda estrategia terapéutica. El objetivo de su acción es de actuar directamente en la inmunidad, situándose en el amplio abanico de terapias que propone la medicina moderna. 18 Los 7 principios básicos de la Micro-Inmunoterapia Sinergia de los 7Bibliografía principios 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. 16. 17. Belon P, Cumps J, Ennis M, Mannaioni PF, Roberfroid M, Sainte-Laudy J, Wiegant FAC. Histamine dilutions modulate basophil activation. Inflamm. Res.2004; 53: 181-188. Lingg G, Endler PC, Frass M, Lothaller H. Treatment of highland frogs from the two-legged stage with homeopathically prepared thyroxin (10-11 - 10-21). ScientificWorldJournal. 2008 Apr 20;8:446-50. Chirumbolo S, Brizzi M, Ortolani R, Vella A, Bellavite P. 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