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APLICACIÓN DE LA PCR A LA TIPIFICACIÓN DE GENES DE
INTERÉS EN PRODUCCIÓN ANIMAL
-Genotipado de proteínas lácteas
-Sexaje de embriones
Universidad
de Zaragoza
PRODUCCIÓN LÁCTEA:
- Existían grandes desequilibrios en la producción.
- Incapacidad de absorber los excedentes.
- Necesidad de derivar la producción
hacia derivados lácteos.
Universidad
de Zaragoza
- Genotipado de proteínas lácteas con influencia
en producción (calidad y cantidad) láctea.
- Elección del sexo en embriones antes de
transferencia.
-Tipado de sexo y proteínas lácteas en embriones.
- Detección de hembras Free-Martin
Universidad
de Zaragoza
CARACTERIZACIÓN GENÉTICA DE
PROTEÍNAS LÁCTEAS
BB Kappa Casein
Universidad
de Zaragoza
CARACTERIZACIÓN GENÉTICA DE
PROTEÍNAS LÁCTEAS
PROTEÍNAS DEL CUAJO
- CASK
PROTEÍNAS DEL LACTOSUERO
- LGBB
- LAA
- CASB
-CASA1
-CASA2
P.C.R.
CARACTERIZACIÓN GENÉTICA DE
PROTEÍNAS LÁCTEAS (CASK)
Amplificación por PCR Alelo Específico (A.S.O.)
Universidad
de Zaragoza
CARACTERIZACIÓN GENÉTICA DE
PROTEÍNAS LÁCTEAS (CASA2)
Exón VIII
Intrón VII
Intrón VIII
Oli 31
Oli 32
Mnl-1
CASA2A
CASA2D
Ser Ser Glu
TGT ACT GAG GTAAG
TGT ACT GAT GTAAG
Mnl-1
Universidad
de Zaragoza
CASA2A
CASA2D
Ser Ser Glu
TGT ACT GAG GTAAG
TGT ACT GAT GTAAG
396 bp
PCR
396 bpMnl-I
CASA2A
124 bp
272 bp
396 bp
CASA2B
Universidad
de Zaragoza
CARACTERIZACIÓN GENÉTICA DE
PROTEÍNAS LÁCTEAS (CASA2)
+
DD
AA
AD
-
Universidad
de Zaragoza
1 . CARACTERIZACIÓN GENÉTICA DE
PROTEÍNAS LÁCTEAS
CASKB/CASBB/LGBB
Universidad
de Zaragoza
TIPIFICACION DE EMBRIONES
PROGRAMAS DE TRANSFERENCIA EMBRIONARIA
ELECCIÓN DEL
SEXO
SEXAJE DE EMBRIONES
DETECCIÓN DE
GENES DE INTERÉS
DETECCIÓN DE PROTEÍNAS
LÁCTEAS
“Sistema XY”
XY XX “Sistema ZW”
ZW “Sistema X: A”
X XX -
ZZ -
Universidad
de Zaragoza
SELECCIÓN ARTIFICIAL
DEL SEXO
Separación de espermatozoides X e Y
(basado en la diferente masa, movilidad, contenido DNA, carga y antígenos de superficie)
- Citómetro de flujo
- Cromatografía
Sexaje de embriones antes de la implantación.
- Métodos No invasivos
- Enzimas ligadas al cromosma X (Toxicidad)
- Detección Ag HY (Falsos positivos)
- Métodos invasivos: Biopsia embrionaria
Separación de espermatozoides X e Y
- Por diferencias de masa: el cromosoma Y tiene un peso menor
en un 4,2% que el cromosoma X en bovino por lo que tienen
distinta velocidad de sedimentación
- Por diferencias de movimiento: los espermatozoides Y se
mueven a mayor velocidad que los espermatozoides X
- Por diferencias en el contenido de DNA mediante citometría
de flujo. Se tiñe el DNA del espermatozoide con fluorocromos
- Por diferencias en antígenos de superficie: se basa en la
detección del Antígeno Y de histocompatibilidad. Solo lo
tienen los espermatozoides Y
Manipulación de embriones
Métodos invasivos :
- obtención de una biopsia en estado de blastocisto (en bovino
a los 7 días).
- la cantidad de DNA obtenido a partir de una biopsia
equivale a aproximadamente a 10 células (aprox. 100 pg)
Análisis de cariotipo
Análisis de regiones de DNA
del cromosoma Y
XY
XX
SEXAJE DE EMBRIONES
(Análisis de zonas de DNA del Cr Y)
Universidad
de Zaragoza
+
ZONAS DE COPIA ÚNICA
AMPLIFICADO
EN
Y
-
MENOR SENSIBILIDAD
ZONAS REPETIDAS
MAYOR SENSIBILIDAD
SÓLO
AMPLIFICADO
EN
2. SEXAJE DE EMBRIONES
Universidad
de Zaragoza
+
ZONAS DE COPIA ÚNICA
ZFX/ZFY
ZONAS REPETIDAS
BRY4a
-
SEXAJE DE EMBRIONES
Universidad
de Zaragoza
ZONAS DE COPIA ÚNICA
ZFX
ZFX
ZFX
ZFY
Pst-1
100%
75%
50%
25%
250 ng 250 pg 80 pg 20 pg
Universidad
de Zaragoza
Sexaje y genotipado de
proteínas lácteas en el embrión
TIPAJE DE EMBRIONES
(Zona BRY 4a)
Universidad
de Zaragoza
SEXO/CASB
SEXO/CASK
AA
AA AB
BB
AA AA
AB AA
Universidad
de Zaragoza
DETECCIÓN DE ANIMALES
FREE-MARTIN
FREEMARTINISMO: Originado por la fusión de los
coriones de dos embriones (macho y hembra) que lleva
consigo un quimerismo XX/XY y afecta negativamente
a las caracteristicas reproductivas de las hembras.
Diluciones detectadas
ZFY/ZFX
l / 20
BRY4a/CASK
l / 50