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VALIDACIÓN DEL CONTROL
HIGIÉNICO
DE PRODUCTOS FARMACÉUTICOS
NO OBLIGATORIAMENTE
ESTERILES
Validación del Control Higiénico de Productos
Farmacéuticos No obligatoriamente estériles
Objetivo de la validación
Documentar, a través de estudios de laboratorio, que el
método utilizado -ensayado en condiciones claramente
establecidas- justifica su utilización para la cual se
propone.
Fundamento empírico de la validación
Consiste básicamente en desafiar el producto objeto
del control con un determinado número de
microorganismos -en condiciones de ensayo definidasy evaluar su comportamiento a través de la
recuperación microbiana que se obtenga.
Validación del Control Higiénico de Productos
Farmacéuticos No Obligatoriamente Estériles
Desafío principal de la validación
Demostrar que el producto controlado en “esas
determinadas condiciones de ensayo” no inhibe la
viabilidad de los microorganismos que pudieran estar
presentes en el mismo.
Demostrar la neutralización de las propiedades
antimicrobianas de un producto cualquiera sea su
origen (presencia específica de conservadores o
simplemente su formulación.)
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Farmacéuticos No Obligatoriamente Estériles
Estrategias para neutralizar propiedades
inhibitorias de un producto
* Utilización de Inactivantes químicos o
biológicos (específicos o no específicos).
* Elección del método por filtración.
* Realización de diluciones/Utilización de
modificadores.
* Combinación de opciones anteriores
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Farmacéuticos No Obligatoriamente Estériles
Factores principales a considerar en la validación
Microorganismos desafiantes:
- Naturaleza del inóculo
- Preparación y tamaño del inóculo del inóculo
Condiciones específicas de ensayo estandarizadas y
reproducibles (Tpo, temp, membranas y prefiltros,
buffers, etc)
Condiciones de recuperación
- Medio de recuperación
- Condiciones de incubación
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Farmacéuticos No Obligatoriamente Estériles
Protocolo propuesto para la validación
Se define una secuencia de estapas -de ejecución
sucesiva- en función de las recuperaciones
obtenidas para cada etapa de ensayo
Consideraciones generales a evaluar en todos las
etapas
Propiedades de crecimiento de los medios
•Control negativo
•Control Higiénico del producto (siguiendo la
técnica que se está validando)
•
Validación del Control Higiénico de Productos
Farmacéuticos No Obligatoriamente Estériles
1.
Etapa inicial (Metodología directa - Sin estrategia de
neutralización)
Se ensaya sobe dos grupos
a. Grupo viable (control positivo): Buffer + Inóculo
b. Grupo ensayo (muestra desafiada): Muestra +
Inóculo
Criterios de aceptación:
- generales para todas las etapas:
Control negativo sin crecimiento.
Evaluación de resultados del Control higiénico
(de aceptarse la etapa)
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Farmacéuticos No Obligatoriamente Estériles
Criterios de aceptación (continuación):
- Particulares de esta etapa:
Deben realizarse 3 ensayos independientes. Para cada
uno de ellos:
a. Recuperaciones en placa: el porcentaje de recuperación
para el Grupo ensayo no debe ser menor al 70% respecto
del Grupo viable.
b. Recuperaciones en medio líquido: debe observarse
crecimiento abundante para ambos grupos dentro de los
7 días de iniciado el desafío para cada microorganismo.
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Farmacéuticos No Obligatoriamente Estériles
2. Segunda etapa (Metodología directa – con
neutralización)
Se ensaya sobre tres grupos
a. Grupo viable (control positivo): Buffer + Inóculo
b. Grupo ensayo (muestra desafiada): Muestra +
Neutralizante + Inóculo
c. Grupo control toxicidad: Neutralizante + Inóculo
Interpretación:
Verificar el cumplimiento de la eficacia de neutralización
y la posible toxicidad del neutralizante a partir de la
comparación entre grupos (a/b y a/c, respectivamente)
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Farmacéuticos No Obligatoriamente Estériles
Neutralizantes comunes compendiados:
Tipo de agente microbiano
USP XXIV
EP Supp 2000
Fenólicos
Dilución
Organo-mercuriales
Halógenos
Comp. Amonio 4rio
Alcoholes
Parabenos
EDTA
Tioglicolato
Tiosulfato
Lecitina
Dilución
Tween
Iones Ca2+ / Mg2+
Lauril sulfato de sodio
Tween 80 + Lecitina
Yema de huevo
Tioglicolato
Tiosulfato
Yema de huevo
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Farmacéuticos No Obligatoriamente Estériles
Criterios de aceptación:
- Generales:
deben cumplirse
- Particulares de esta etapa:
Deben realizarse 3 ensayos independientes y para cada
uno de ellos:
a. Recuperaciones en placa: el porcentaje de recuperación
para el Grupo ensayo no debe ser menor al 70%
respecto del Grupo viable.
b. Recuperaciones en medio líquido: debe observarse
crecimiento abundante para los tres grupos dentro de
los 7 días de iniciado el desafío para cada
microorganismo.
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Farmacéuticos No Obligatoriamente Estériles
3. Tercera etapa (Metodología por filtración – con o sin
neutralización)
Se ensaya sobre cuatro grupos (Diseño con neutralizador)
a. Grupo viable (control positivo): Buffer x Memb + Inóculo
b. Grupo ensayo (muestra desafiada): Muestra x Memb +
Neutralizante + Inóculo
c. Grupo control toxicidad: Neutralizante + Inóculo
d. Grupo control de la técnica por filtración: Inóculo
directamente en placa
Interpretación: Verificar la inhibición que genera la
membrana y el vaso de filtración sobre el microorganismo
inoculado, a partir de la comparación entre grupos (a/d)
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Farmacéuticos No Obligatoriamente Estériles
Criterios de aceptación:
- Generales:
deben cumplirse
- Particulares de esta etapa:
Deben realizarse al menos 3 ensayos independientes y
para cada uno de ellos:
Los porcentajes de recuperación para metodología por
filtración para los diferentes grupos deben resultar
similares.
Aclaración: El método por Filtración podrá realizarse si la
muestra puede ser aceptablemente filtrada. De ser
necesario un tratamiento de muestra adicional, su acción
sobre la viabilidad de los microorganismos debe ser
evaluada (por ejemplo, ciertas suspensiones, cremas,
ungüentos, etc)
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Farmacéuticos No Obligatoriamente Estériles
4. Cuarta etapa (Metodología por Dilución/Combinaciones)
La Técnica de dilución puede utilizarse en forma
complementaria a una metodología directa o una metodología
por filtración (considerándose como una preparación de
muestra especial).
También podrá realizarse conjuntamente a la utilización de
agentes de neutralización.
Cualquiera sea la situación los límites de aceptación dependerán
del protocolo seguido.
Inconveniente de la metodología: Las recuperaciones por unidad
de muestra de ciertas determinaciones no podrán satisfacer los
límites establecidos por la Autoridad Sanitaria.
Validación del Ensayo de Efectividad Antimicrobiana en
Productos Farmacéuticos No Obligatoriamente Estériles
Ciertos productos No Obligatoriamente Estériles deben
asegurar -por su actividad antimicrobiana per se ó gracias al
agregado de ciertos conservadores- condiciones protectoras
frente a una contaminación microbiana ó desfavorables para
su proliferación durante el almacenamiento y/o la utilización
del producto.
Así el Ensayo para determinar la efectividad antimicrobiana
debe realizarse para todo aquel producto que contenga un
conservador, para presentaciones multidosis tópicas y orales,
como así también para aquellas formas oftálmicas, óticas,
nasales -entre otras- que presenten agua en su formulación.
Validación del Ensayo de Efectividad Antimicrobiana en
Productos Farmacéuticos No Obligatoriamente Estériles
Fundamento del Ensayo de Efectividad antimicrobiana
Desafiar el producto con un inóculo determinado de diferentes
microorganismos, almacenar las muestras inoculadas en
condiciones claramente establecidas y a partir de las mismas,
recoger y procesar “en condiciones de ensayo definidas”
muestras a diferentes tiempos.
Los límites de aceptación del Ensayo se establecen en función
de las recuperaciones logradas a lo largo del tiempo
(disminución o mantenimiento de la carga microbiana -según
corresponda-) y de acuerdo al grado de protección deseado
para el tipo de producto que está siendo desafiado
Ensayo de Efectividad Antimicrobiana
Esquema General
„
„
„
„
„
MICROORGANISMOS DESAFIANTES
INOCULO
‹ CONCENTRACIÓN
‹ TIPO
INCUBACIÓN DE LAS MUESTRAS
INOCULADAS
PERIODICIDAD DEL MUESTREO
CRITERIOS DE ACEPTACIÓN
Ensayo de Efectividad Antimicrobiana
„
MICROORGANISMOS DESAFIANTES
„
USP 24
‹
‹
‹
‹
‹
‹
„
Candida albicans ATCC 10231
Aspergillus niger ATCC 16404
Escherichia coli ATCC 8739
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027
Staphylococcus aureus ATCC 6538
Opcionales: contaminantes del producto
BP 2000
‹
‹
‹
‹
‹
Candida albicans ATCC 10231
Aspergillus niger ATCC 16404
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027
Staphylococcus aureus ATCC 6538
Opcionales: contaminantes del producto
Escherichia coli ATCC 8739
Zigosaccharomyces rouxii NCYC 381
Ensayo de Efectividad Antimicrobiana
„
INOCULO
‹ CONCENTRACIÓN
USP 24: 105 – 106 UFC/g o mL producto
 BP 2000: 105 – 106 UFC/g o mL producto

‹
TIPO
Uso 24: único
 BP 2000: único

Ensayo de Efectividad Antimicrobiana
„
INCUBACIÓN DE LAS MUESTRAS
INOCULADAS
‹ 20 ° C - 25° C,
‹ Protegidas de la luz
„
PERIODICIDAD DEL MUESTREO
USP 24: 0, 7, 14, 28 días
‹ BP 2000: 0, 6h, 24h, 2 d, 7d, 14d, 28días
‹
Ensayo de Efectividad Antimicrobiana
„
CRITERIOS DE ACEPTACIÓN
‹
USP 24:
Categoría 1A
Inyectables, otros parenterales, óticos,
estériles nasales, oftálmicos, todos con
vehículos acuosos
Categoría 1B
Tópicos con vehículos acuosos, nasales no
estériles y emulsiones, a aplicar sobre
mucosas
Categoría 1C
Orales con vehículos acuosos
Categoría 2
Todos los de categoría 1 con vehículos no
acuosos
Ensayo de Efectividad Antimicrobiana
„
CRITERIOS DE ACEPTACIÓN
Categoría 1A
Categoría 1B
Categoría 1C
Categoría 2
Bacterias: reducción de al menos 1 log en 7
días, 2 log en 14 días y sin incremento a 28
días. Hongos sin incremento hasta el día 28.
Bacterias: reducción de al menos 2 log en
14 días y sin incremento a día 28.
Hongos: sin incremento hasta el día 28.
Bacterias: reducción de al menos 1 log rn
14 días, sin incremento hasta el día 28.
Hongos: sin incremento hasta el día 28
Sin incremento en los días 14 y 28.
Ensayo de Efectividad Antimicrobiana
„
CRITERIOS DE ACEPTACIÓN
‹
BP 2000: Preparaciones oftálmicas y parenterales
Reducción en log
Bacterias
Hongos y
levaduras
6h
24 h
7d
14 d
28 d
A
2
3
-
-
NR
B
-
1
3
-
SI
A
-
-
2
-
SI
B
-
-
-
1
SI
NR: sin crecimiento; SI: sin incremento
Ensayo de Efectividad Antimicrobiana
„
CRITERIOS DE ACEPTACIÓN
‹
BP 2000: Preparaciones orales
Reducción en log
14 d
28 d
Bacterias
3
Si
Hongos y levaduras
1
SI
Ensayo de Efectividad Antimicrobiana
„
CRITERIOS DE ACEPTACIÓN
‹
BP 2000: Preparaciones tópicas
Reducción en log
Bacterias
Hongos y
levaduras
2d
7d
14 d
28 d
A
2
3
-
SI
B
-
-
3
SI
A
-
-
2
SI
B
-
-
1
SI
Ensayo de Efectividad Antimicrobiana
„
CRITERIOS DE ACEPTACIÓN
‹
BP 2000: Preparaciones óticas
Reducción en log
6h
24 h
7d
14 d
28 d
Bacterias
2
3
-
-
NR
Hongos y
levaduras
-
-
2
-
SI
Validación del Ensayo de Efectividad Antimicrobiana en
Productos Farmacéuticos No Obligatoriamente Estériles
Validación del Ensayo de Efectividad Antimicrobiana
Evidenciar y documentar la adecuabilidad del procedimiento
para demostrar la reducción (ó mantenimiento) deseada en las
recuperaciones obtenidas a través del tiempo para cada
microorganismo.
Nuevamente identificar las condiciones de ensayo establecidas
para neutralizar la actividad antimicrobiana del producto (de
manera de lograr que no interfieran en la interpretación de los
recuentos reducidos hallados) será el desafío principal de las
tareas de validación para esta metodología.
ARBOL DE DECISION
SI
ATRIBUTOS DE CALIDAD MICROBIOLOGICA DE LOS
PRODUCTOS NO OBLIGATORIAMENTE ESTÉRILES
Contiene el producto conservadores antimicrobianos?
SI
NO
Establecer criterios de aceptabilidad para el conservador
y llevar a cabo la validación de la efectividad del mismo
sobre el producto, usando una concentración del conservador
menor ó igual a la mínima especificada.
El producto, inherentemente, puede soportar el
crecimiento de microorganismos de prueba, ó superar
los límites de aceptabilidad (criterios de farmacopeas)
durante su desarrollo?
NO
Es el producto una forma farmacéutica sólida,
seca, por ejemplo: oral ó en polvo?
SI
NO
Establecer criterios microbianos
de aceptabilidad
SI
Proveer evidencia científica que
demuestre las propiedades inhibitorias del
producto
Efectuar el control higiénico lote a lote
NO
Todos los lotes cumplen en forma consistente con
los límites microbianos de aceptación?
Los límites y criterios de aceptabilidad
microbiológica y su prueba pueden no ser
necesarios.
SI
Realizar pruebas de los límites microbianos en lotes no
consecutivos ó proveer información científica para no
realizar el control higiénico en forma rutinaria.