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Expressió i quantificació de
miRNA en el teixit pulmonar
neoplàsic i en la circulació
perifèrica
Beca SOCAP 2009
IP Dr. Ramon Mª Marrades
By 1998, the genomic sequence of the first
metazoan organism, Caenorhabditis elegans,
was completed,
Nature Neuroscience 7, 429 - 433 (2004)
Neurogenomics: at the intersection of
neurobiology and genome sciences
Mark S Boguski & Allan R Jones
Lee RC, Feinbaum RL, Ambros V.
Harvard University, Department of Cellular and Developmental Biology,
Cambridge, Massachusetts 02138.
Cell. 1993 Dec 3;75(5):843-54.
The C. elegans heterochronic gene lin-4
encodes small RNAs with antisense
complementarity to lin-14.
(“small temporals RNAs (stRNAs))
Science 294, 853 (2001)
Science, perspectives
• Glimpses of a tiny RNA world
– Gary Ruvkun
• SCIENCE, 2001; 294: 797-9
• “Tiny RNA genes may be the biological equivalent
of dark matter – all around us but almost escaping
detection – until first revealed by C. elegans
genetics
• Transcripción:
– ADN a ARNm
• Traducción:
– ARNm a proteína
ADN
ARNm
Proteína
Intrón
• No se sabe
• Embriogénesis
• No sirven para nada
Micro RNA (miRNA)
- Pequeñas moléculas de RNA
no codificante de unos 22 nucleótidos (intrones).
- Regulan la expresión (traducción) de RNAm.
- Los miRNAs tiene distintos patrones de expresión
en diferentes tejidos.
- Se identifican mediante la técnicas habituales
para la detección del RNA.
microRNA biogenesis
miRNA gen
(intron o region intergénica)
↓
Primary miRNA
↓
Drosha
Precursor miRNA
↓
Dicer
Maduro miRNA
↓
miRNA + RISC
↓ Mensajero RNA
RISC: RNA induced silencing complex
miRNA mecanismos y función
Translation repression
Degradación del mRNA
miRNA mecanismos y función
Represión de la traducción
mRNA degradation
Regulación negativa de la expresión génica a nivel post-transcripcional
Only recently discovered, microRNAs (miRNAs) are small RNA gene
products that regulate the activity of messenger RNAs by
antisense base pairing. They thus constitute an astonishing
further layer of gene expression regulation.
Objetivo
• Analisis de los miRNA en:
– Cáncer de pulmón (biopsia bronquial).
– Pulmón sano (biopsia bronquial).
– Embriones humanos.
Muestras
36 pulmón humano
12 pulmón de embrión humano
+
18 pacientes
(7-12 semanas)
18 NT
18 TT
fibrobroncoscopia
E
M
B
R
Y
O
TT
NT
Extracción Total de RNA con el método TRIZOL
microRNAs
T
E
N
Lung
Embryos
Lung Tumor
Normal Lung Tissue
Conclusiones
Puede cuantificarse la expresión de miRNAs en una BB
Utilidad de los microRNA como
factor pronóstico después de
cirugía resectiva pulmonar
• 70 pacientes intervenidos entre 1996 y
2002.
• Seguimiento clínico durante cinco años o
hasta la recidiva.
• Extracción de ADN y ARN de muestras de
tumor conservadas en parafina y
determinación del miRNA34.
Conclusiones
• El miR-34a podría ser un nuevo
marcador pronóstico en pacientes
CPCNP
• Se confirman las relaciones entre p53
y miR-34a
Expresión y cuantificación de microRNAs en sangre
periférica, tejido tumoral y tejido normal pacientes con
cáncer de pulmón.
IP Dr. RM Marrades.
SOCAP 2009
• Determinación de miRNAs en
– Tumor (pieza quirúrgica)
– Tejido sano (pieza quirúrgica)
– Sangre periférica:
• Preoperatorio
• Evolución:
– Trimestral el primer año
– Semestral el 2º y 3º año.
• Octubre 2010
– 40 pacients.
– 80 mostres de teixit (neoplàsic i normal)
– 120 mostres de sang.
Small non coding RNAs:
–microRNAs (miRNAs)
–Small interfering RNAs (siRNAs)
–Transacting siRNAs (tasiRNAs)
–Small scan RNAs (scnRNAs)
–Repeat associated siRNAS (rasiRNAs)
–Piwi-interacting RNAs (piRNAs)
Thanks
Merci
Gracias
Obrigado
Danke
Gràcies
Grazie
Multumesc
Gratia