Download Tinción de Gram

UNIVERSIDAD AUTONOMA DE CHIAPAS
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
CAMPUS IV EXTENSIÓN OCOZOCOAUTLA
LICENCIATURA: QUIMICO FARMACOBIOLOGO
BIOLOGIA CELULAR
PRACTICA
“TINCION”
CATEDRATICO
DR. ANA OLIVIA CAÑAS URBINA
INTEGRANTES
ARÉVALO PÉREZ ALEXANDRA YURIKO
GÓMEZ DEL CARPIO GUADALUPE E.
MANGA CIGARROA JOSARY YAEL
GARCIA CARREÑO ILSE ALEJANDRA
GALVEZ GOMEZ MERLE YURIDIA
VISTO BUENO POR:
NUÑEZ GOMEZ JESUS WILFREDO
MARTINEZ JUARES BERENICE DEL ROSARIO
OCOZOCOAUTLA DE ESPINOSA, CHIAPAS A 29 DE MARZO DEL 2017
INDICE
RESUMEN .............................................................................................................. 2
MARCO TEORICO.................................................................................................. 3
OBJETIVO............................................................................................................... 5
METODOLOGIA...................................................................................................... 5
RESULTADOS ........................................................................................................ 6
DISCUSION DE RESULTADOS ............................................................................. 8
CONCLUSIÓN ........................................................................................................ 8
CUESTIONARIO ................................................................................................... 10
RESUMEN
Existen tinciones diferenciales y simples, todo tipo de tinción es empleada para
poder tener una mejor imagen de lo que se observa en el microscopio y poder
identificar estructuras.
Las tinciones diferenciales son aquellas donde se usan más de una sustancia para
poder realizar la tinción, como la tinción de Gram.
Dicha tinción es usada para identificar bacterias, poniendo o dando un color ya sea
rosa o azul, dependiendo del tipo de color que se observe se ira clasificando en
Gram positiva o Gram negativa.
Esta tinción se usara con el fin de poder observar cómo es que actúa una tinción
diferencial en una célula animal y en especial esta tincion.
En la tinción simple se usa solo un tipo de sustancia. Como el azul de metileno el
cual se empleó en células vegetales, con la finalidad de observar estructuras en
este tipo de células.
Las células es la principal unidad de todo ser vivo. Las células procariotas donde se
clasifican las bacterias y archea, este tipo de célula miden de 1000 a 5000 nm.
Cuenta con pared celular, capsula, nucleoide, ribosoma y tiene una división celular
directa.
Las células eucarionte, en ella se encuentran las células animal y vegetal, cuenta
con nuleolo, núcleo en el cual se encuentra el ADN, vacuola y tiene una división por
mitosis. Esta célula mide de 10 a 50 micras. En ella también se encuentran
organelos como el aparato de Golgi y el retículo endoplasmatico rugoso y liso.
MARCO TEORICO
TINCIONES
La mayoría de las observaciones iniciales de los microorganismos se realizan con
preparados teñidos. El termino tinción significa simplemente colorear los
microorganismos con un colorante que destaque ciertas estructuras. Sin embargo
antes de teñir los microorganismos se los debe fijar (adherir) al portaobjeto. El
proceso de fijación produce la muerte simultánea de los microorganismos y su
adherencia al portaobjeto. Cuando se tiene que fijar una muestra se extiende una
película delgada del material que contiene los microorganismos sobre la superficie
del portaobjeto, esta película, denominada extendido, se deja secar al aire. En la
mayor parte de los procedimientos de tinción el portaobjeto se fija pasándolo varias
veces a través de la llama de un mechero bunsen con el lado del extendido hacia
arriba o cubriéndolo con alcohol metílico durante 1 minuto. Se aplica el colorante,
se lava con agua y se seca con papel absorbente. Una vez efectuado el
procedimiento, los microorganismos están listos para la observación microscópica.
Los colorantes son sales compuestas por un ion positivo y un ion negativo, uno de
los cuales esta coloreado y se conoce como cromo foro (Tortora, Funke, & Case,
2007).
TIPOS DE TINCION
Tortora, Funke, & Case, 2007 dice que la tinción Simple es una solución acuosa o
alcohólica de un colorante básico único. Se utiliza para poder visualizar las formas
y las disposiciones celulares. Algunas de las tinciones simples utilizadas con
frecuencia en el laboratorio son el azul de metileno, la carbolfucsina, el violeta de
genciana (cristal violeta) y safranina. Se puede usar un mordiente para mejorar la
unión entre el colorante y la muestra.
Tinción Diferencial
A diferencia de las tinciones simples, las tinciones diferenciales reaccionan de modo
diferente con las distintas clases de bacterias y por lo tanto pueden ser empleadas
para establecer una distinción entre ellas. Las tinciones diferenciales utilizadas con
más frecuencia para las bacterias son la tinción de Gram y la tinción de ácido-alcohol
resistencia.
Tinción de Gram
La tinción de Gram fue desarrollada por el bacteriólogo danés Hans Christian Gram
en 1884 y es uno de los procedimientos de tinción más útiles porque permite
clasificar las bacterias en dos grandes grupos: gram positivas y gram negativas (Img
1).
En el procedimiento de tinción de Gram se utiliza un colorante de violeta (violeta de
genciana), el yodo como mordiente, un decolorante alcohólico y un colorante rojo
de contraste. Las bacterias grampositivas retienen la coloración violeta después del
paso de la decoloración; las bacterias gram negativas no la retienen y aparecen de
color rosado después del agregado del colorante de contraste (Tortora, Funke, &
Case, 2007).
Imagen 1. Preparado de tinción de Gram
Microfotografía de bacterias teñidas
con Gram los bacilos y los coco (de
color violeta) son grampositivas y las
vibriones (de color rosado) son gram
negativas (Img 2).
Imagen 2. Microfotografia de bacterias teñidas con Gram.
OBJETIVO
Identificar las partes y sistemas que componen al microscopio, así como el
debido montaje y enfoque de diferentes muestras problema.
Saber diferenciar entre una tinción simple y una diferencial.
METODOLOGIA
Muestras
Preparación con tinciones simples
Preparación con tinciones diferenciales
Montaje y enfoque de muestra
Coloque cada una de las muestras sobre la platina a una distancia focal apropiada
para el alumno; obtenga un mejor enfoque observando por los oculares y
manipulando los tornillos macro métrico y micrométrico. Para empezar a enfocar
siempre utilice el objetivo de menor resolución hasta llegar al objetivo que le
proporciona la mejor resolución y enfoque en una muestra específica. Se sugiere
iniciar el enfoque con el objetivo de 10X. Una vez enfocada la muestra, el alumno
buscará obtener una mejor nitidez de la muestra mediante la manipulación del
diafragma y centrará la iluminación del campo de observación con ayuda
del tornillo del condensador. Anote sus observaciones en la tabla de registro y
discuta
RESULTADOS
Como resultado de la práctica de microscopio lo cual observamos tinción de Gram
y una hoja.
La muestra de tinción de Gram se observa las bacterias las bacterias Gram
negativas, con el objetivo de 4x las bacterias de miraban en diminutos puntitos
azules, se observaron muchos de ellos, la diferencia de ver con el objetivo de 10x
la imagen de la bacteria se aumentó se miraba pequeños palitos alargados, con el
objetivo de 40x logramos observar con más claridad a la bacteria.
Con la visualización de la hoja en el microscopio se observó con el objetivo de 4x
se miraban diminutos cuadros verdes, al pasar el objetivo a 10x la imagen de los
cuadros verde aumento, con el objetivo 40x los cuadros verdes se miran más de
cerca con más claridad.
Hoja visto en el microscopio con el
objetivo 40x.
Hoja visto en microscopio con el
objetivo de 10x.
Tinción de Gram positivo con una
coloración azul, visto con el objetivo
de 4x.
Tinción de Gram positivo, con los
objetivos de 10x.
Tabla 1. Observaciones de la Tinción de Gram y la célula vegetal
Todas las imágenes fueron tomadas con la
cámara de 13 megapíxel Huawei por Josary
Yael Manga Cigarroa.
Objetivo
Objetivo 4
Observaciones
Se
observan
manchas
y
puntos
dispersos con un color morado.
Objetivo 10
Se observan las mismas manchas
dispersas y puntos con mayor tamaño y
mejor visualización.
Objetivo 40
En este caso se observan pequeñas
bacterias, se observan las mismas
manchas con mayor definición y se
observan mejor las características.
Tabla 2. Resultados obtenidos de Tinción de Gram
DISCUSION DE RESULTADOS
“La tinción de Gram se informa con la identificación o no de bacterias. Si hay
bacterias, el microbiólogo indicará si son Gram positivas (púrpuras) o Gram
negativas (rosas), qué forma tienen, y cómo se organizan” (Webconsultas, 2016).
Por lo cual se apreciaba minúsculas manchas teñidas de azul-violeta, después se
pasó a los demás objetivos, una por una para ver cada vez más cerca la tinción, el
color se dispersaba más por el simple hecho que la tinción estaba lavadas de más
y junto a mis compañeras reconocimos que era una tinción de Gram positivas, se
nos dificulto reconocer el tipo de tinción debido a que la muestra usada fue un frotis
que estaba mal hecho. En cuanto lo observado con la hoja, no se pudo distinguir
bien la pared celular debido a que la hoja estaba un poco gruesa.
Al observar en el microscopio con una mejor resolución se identificó las paredes
celulares de las células que se encontraban en la hoja, aunque no se alcanzó a
observar algún otro organelo. En el frotis con tinción de Gram solo se pudieron
observar Gram positivas en algunas partes del frotis.
CONCLUSIÓN
De acuerdo con los objetivos no se logró al cien por cierto cumplir con ellos debido
a que se tuvo problemas con la observación de la célula vegetal, como ya se
mencionó la muestra de este tipo de célula esta gruesa, en cuanto a las tinciones
diferenciales se logró reconocer entre una tinción simple y una diferencial, en este
caso una tinción de Gram.
REFERENCIAS
Alberts, B., Bray, D., Hopkin, K., Johnson, A., Lewis, J., Raff, M., . . . Walter, P. (2004). Introducción a
las células. En B. Alberts, Introducción a la biología celular (págs. 8-10). España: Editorial
medica panamericana.
Tortora, G., Funke, B., & Case, C. (2007). Bases de la microbiologia. En G. J. Tortora, Introducciòn a
la microbiologia (págs. 68-71). España: Editorial medica panamericana.
Vaivasuata. (28 de Septiembre de 2014). Obtenido de http://diferenciaentre.info/diferencia-entreglobulos-rojos-y-globulos-blancos/
Webconsultas. (2016). Pruebas medicas. Tinciòn de Gram. Obtenido de
http://www.webconsultas.com/pruebas-medicas/resultados-de-la-tincion-de-gram-13403
CUESTIONARIO
1. Defina longitud de onda, espectro visible, resolución y apertura numérica
R. Longitud de onda: es la distancia que hay entre dos crestas.
Espectro visible: es la luz que alcanza a percibir el ojo humano.
Resolución: el alcance que tiene el ojo humano o ya sea un microscopio u otro
aparato que se use para observar o percibir cosas.
Apertura numérica: magnitud del ángulo en donde llega de enfoque de luz.
2. ¿Cuál es la importancia del uso del condensador?
R. Nos ayuda a tener una mejor resolución de la muestra.
3. ¿Qué diferencia hay entre el ojo humano, microscopio óptico y microscopio
electrónico?
R. Alberts et al, 2004, dice que el ojo humano tiene una resolución de
aproximadamente 200 µm, el microscopio óptico tiene una mínima resolución de
200 nm y el microscopio electrónico tiene un resolución mínima de 0,2 nm
4. ¿Para qué se emplea el microscopio de campo oscuro, el microscopio de
contraste de fases y el microscopio de fluorescencia? ¿Qué es microscopia led?
R. El microscopio de campo oscuro, se utiliza para examinar microorganismos vivos
que no se pueden observar en un microscopio común, debido a que no pueden
teñirse con los métodos estándares (Tortora, Funke, & Case, 2007).
Microscopio de contraste de fase, permite observar con as detalle las estructuras
internas de los microorganismos vivos.
Microscopio de fluorescencia, se utiliza cuando las células son teñidas con
colorantes fluorescentes específicos, estos microscopios tienen esa capacidad de
poder observar esas células, como el del DNA (Alberts, et al, 2004)
Microoscopia led, es un nuevo sistema de iluminacion para los microscopios y asi
tener una mejor resolucion de las muestras.
5. Explique qué son tinciones simples y qué son tinciones diferenciales y dé 2
ejemplos de cada una de ellas.
R. Las tinciones simples son aquellas que solo tienen un solo componente, como
el azul de metileno o safranina.
Las tinciones diferenciales, son las que tienen más un componente o donde se usan
varias, como en al tinción de Gram y tinción de Wright.
6. ¿Por qué existen objetivos con diferentes aumentos? ¿Le sirvieron en la
presente práctica? Explique sus respuestas ¿Qué dificultades se presentarían si
se iniciara un enfoque de muestra con la lente de mayor aumento? ¿Por qué
debe emplearse aceite de inmersión con el objetivo de 100X?
R. Existen varios objetivos con diferente aumento, para que tenga diferentes
perspectivas de la muestra. Cada objetivo nos fue útil esta práctica, para observar
con diferente resolución la muestra, en este caso fue un cabello.
No se va poder observar bien debido a que para el objetivo de 100x es necesario
usar aceite de inmersión, este se usa para que los fotones no se escapen por
completo y la luz sea dirigida hacia la muestra y tener una mejor resolución.